《人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體》征求意見稿編制說明

《人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿標(biāo)準(zhǔn)編制說明任務(wù)來源及背景按照《中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理辦法（試行）》的有關(guān)規(guī)定和要求解讀，為推進(jìn)外泌體領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)化工作，推動細(xì)胞外泌體科研和應(yīng)用，助力產(chǎn)業(yè)良性發(fā)展，培育和促進(jìn)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)。由青島海爾生物科技有限公司提出立項(xiàng)申請，促進(jìn)會秘書處組織專家按程序?qū)徸h后予以立項(xiàng)。該標(biāo)準(zhǔn)起草單位為：青島海爾生物科技有限公司、山東省千佛山醫(yī)院、北京華龕生物科技有限公司、北京第一生物化學(xué)藥業(yè)有限公司、成都康景生物科技有限公司、中科聚研干細(xì)胞有限公司、上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司等企業(yè)。標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及其論據(jù)，如項(xiàng)目的社會意義和經(jīng)濟(jì)性、技術(shù)指標(biāo)、性能要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等；近年來，外泌體（exosomes）的研究快速進(jìn)展，無論是基礎(chǔ)研究還是技術(shù)開發(fā)都呈現(xiàn)指數(shù)上升。外泌體是一種細(xì)胞分泌的囊泡，里面含有豐富的核酸和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，可通過信息物質(zhì)如穿梭性功能核酸的傳遞影響細(xì)胞功能，從而對基因進(jìn)行調(diào)控，并可在全身水平發(fā)揮調(diào)控功能，與多種疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。其主要產(chǎn)生途徑為細(xì)胞內(nèi)吞產(chǎn)生的小囊泡融合形成的核內(nèi)體，隨著胞質(zhì)內(nèi)RNA、蛋白、脂質(zhì)等內(nèi)涵物的進(jìn)入，演變成多泡體，多泡體與細(xì)胞膜融合釋放到胞外形成外泌體。作為細(xì)胞間的一種通訊方式，多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，外泌體可在體外培養(yǎng)的動植物細(xì)胞產(chǎn)物和多種生物體液中檢測到，例如條件細(xì)胞培養(yǎng)基、血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。人體中大約每天產(chǎn)生10^14個外泌體，平均每個細(xì)胞產(chǎn)生1000～10000個。外泌體已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、食品、化妝品、科研試驗(yàn)和藥物申報(bào)中，具有十分廣闊的應(yīng)用前景。例如干細(xì)胞外泌體具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎和抗纖維化、抑制氧化應(yīng)激、增強(qiáng)血管生成等作用。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）外泌體富含糖酵解相關(guān)酶，可增加ATP的產(chǎn)生，減少組織細(xì)胞死亡。MSCs外泌體還含有VEGF、TGF-β、IL-6、IL-10和HGF等細(xì)胞因子，有利于血管生成和免疫調(diào)節(jié)。而腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在腫瘤生長、免疫逃逸、耐藥和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，可以用作腫瘤早期檢測和癌癥復(fù)發(fā)監(jiān)測的生物標(biāo)志物。此外，外泌體可以作為一種藥物遞送工具，或是一種疾病的治療制劑，或者作為疾病的新型診斷標(biāo)志物。在科研領(lǐng)域，有關(guān)外泌體的論文發(fā)表數(shù)量也呈近爆炸式增長，平均每年外泌體相關(guān)論文都在3000篇以上。盡管外泌體擁有無限應(yīng)用前景，但也有很多挑戰(zhàn)，包括制備均一穩(wěn)定的外泌體產(chǎn)品，且制備方法可重復(fù)。制定細(xì)胞外泌體純化、鑒別和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等細(xì)胞外泌體質(zhì)量技術(shù)規(guī)范，對于推動細(xì)胞外泌體科研和應(yīng)用具有關(guān)鍵意義。然而國內(nèi)對于間充質(zhì)干細(xì)胞的制備、鑒定尚未有標(biāo)準(zhǔn)約定，因此為了推動間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的科學(xué)研究和轉(zhuǎn)化應(yīng)用，根據(jù)國內(nèi)外細(xì)胞外泌體相關(guān)文獻(xiàn)、規(guī)范性和指導(dǎo)性文件、專家共識等資料，結(jié)合參編單位的科學(xué)研究和應(yīng)用實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的鑒定方法、檢驗(yàn)要求、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、儲存、運(yùn)輸和廢棄物處理要求。適用于人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的制備和檢驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)編制原則及依據(jù)本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法/WS213丙型肝炎診斷/WS273梅毒診斷/WS293艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)/WS299乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)/中華人民共和國藥典（2020年版）/全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）/《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》/T/CSCB0001-2020干細(xì)胞通用要求/T/CSCB0003-2020人間充質(zhì)干細(xì)胞。與現(xiàn)行法律法規(guī)、強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)和其他有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系，采用國際標(biāo)準(zhǔn)的程度及水平的簡要說明；本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)無沖突和交叉。沒有采用國際標(biāo)準(zhǔn)。重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)；主要修改內(nèi)容如下：1.條款3.2人源間充質(zhì)干細(xì)胞humanmesenchymalstemcell一類存在于多種人體組織(如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等），具有多向分化潛力，非造血干細(xì)胞的成體干細(xì)胞。這類干細(xì)胞具有向多種間充質(zhì)系列細(xì)胞（如成骨、成軟骨及成脂肪細(xì)胞等）或非間充質(zhì)系列細(xì)胞分化的潛能，并具有獨(dú)特的細(xì)胞因子分泌功能。依據(jù)：與標(biāo)題呼應(yīng)，增加人源要求。2.條款5人源間充質(zhì)干細(xì)胞要求應(yīng)建立細(xì)胞采集的供者評估和篩選標(biāo)準(zhǔn)、采集方法、運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)和交接標(biāo)準(zhǔn)，保證供者和細(xì)胞的安全。需提供干細(xì)胞的獲取方式和途徑以及相關(guān)的臨床資料，包括供者的一般信息、既往病史、家族史等。既往史和家族史要對遺傳病(單基因和多基因疾病,包括心血管疾病和腫瘤等）相關(guān)信息進(jìn)行詳細(xì)采集。供體應(yīng)篩查確認(rèn)無HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV和TP感染。應(yīng)建立細(xì)胞培養(yǎng)的工藝標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、儲存標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，保證制備外泌體原材料的質(zhì)量可控及安全性。依據(jù)：參考干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行），增加對供者的臨床資料要求。3.條款6.2.3標(biāo)志蛋白需同時滿足以下條件。CD9、CD63以及CD81任意兩個表達(dá)陽性；Alix、Tsg101任意一個表達(dá)陽性；Calnexin、histone3以及GM130任意兩個表達(dá)陰性。依據(jù)：加上條件約定，減輕歧義。4.條款6.2.4微生物真菌、細(xì)菌、支原體、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、外源病毒因子、內(nèi)毒素為陰性。依據(jù)：內(nèi)毒素也是對安全重要影響條件之一。5.條款6.2.5純度外泌體顆粒數(shù)與蛋白量比值不低于1×10^11particles/mg。依據(jù)：外泌體屬于顆粒物，加上純度的要求，更能清晰反映產(chǎn)品的質(zhì)量。6.條款7.2數(shù)量、粒徑、濃度按照納米流式檢測法、納米顆粒跟蹤分析儀或納米庫爾特粒度儀分析。依據(jù)：這三種設(shè)備都能夠?qū)崿F(xiàn)需求。7.條款7.5.13內(nèi)毒素按照《中華人民共和國藥典》通則“1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”檢測。8.條款8.1總原則在一個制備周期中，同一來源、同一批次、同一方法、同一生產(chǎn)線制備出來的產(chǎn)品為一批依據(jù)：細(xì)胞具有復(fù)雜性，不同代次的狀態(tài)可能不同，同一批次能夠保證工藝一致性。9.條款8.2.1每一批產(chǎn)品中隨機(jī)抽取一定數(shù)量最小包裝單元進(jìn)行檢驗(yàn)。取樣量一般應(yīng)為檢驗(yàn)需求量的2倍。抽樣原則根據(jù)實(shí)際情況可參考《藥品抽樣原則及程序》（國藥監(jiān)藥管〔2019〕34號）制定。10.條款8.2.3每一批制劑均應(yīng)進(jìn)行放行檢驗(yàn)，并附檢驗(yàn)報(bào)告。11.條款8.3.1每一批外泌體必須留樣，在無菌條件下留取適量外泌體進(jìn)行留樣。留樣量一般至少應(yīng)當(dāng)能夠確保按照相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)滿足2次全檢，并至少保留一件最小包裝的成品。依據(jù)：參考GMP的要求，符合藥物開發(fā)/生產(chǎn)的條件。12.條款8.5放行檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合6.3關(guān)鍵質(zhì)量屬性規(guī)定，即判為合格產(chǎn)品；有1項(xiàng)及以上不符合的，則被判為不合格產(chǎn)品。依據(jù)：本次修改刪除了復(fù)檢要求，所以進(jìn)行了調(diào)整，關(guān)鍵質(zhì)量屬性必須全部滿足條件才可放行。13.條款9.1.1直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料，應(yīng)選擇低吸附、對外泌體關(guān)鍵質(zhì)量屬性無影響的材料和容器。14.條款9.1.2直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料應(yīng)滿足無菌、無熱原要求。依據(jù)：包裝材料直接影響產(chǎn)品質(zhì)量，應(yīng)充分考慮其安全性。15.條款9.4凍存的外泌體應(yīng)在干冰環(huán)境下運(yùn)輸，非凍存的外泌體應(yīng)在2~8℃條件