GB/T 27532-2011犬瘟熱診斷技術

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T27532—2011

犬瘟熱診斷技術

Diagnostictechniquesforcaninedistemper

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T27532—2011

前言

本標準的附錄和附錄為資料性附錄

AB。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位青島農(nóng)業(yè)大學動物科技學院中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中華人民

:、、

共和國山東出入境檢驗檢疫局

。

本標準主要起草人單虎黃娟熊煒溫建新秦曉冰朱來華宮文妮袁小遠孫園園馬晶

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27532—2011

犬瘟熱診斷技術

1范圍

本標準規(guī)定了犬瘟熱的臨床診斷犬瘟熱病毒的病原分離免疫酶檢測免疫組織化學檢測

、、、、RT-

檢測的操作方法

PCR。

本標準適用于犬瘟熱的鑒定及其流行病學調(diào)查診斷和監(jiān)測其中病毒分離免疫酶檢測免疫組

、。、、

織化學檢測檢測適用于犬瘟熱的病原診斷

、RT-PCR。

2試劑和材料

21改良最低要素營養(yǎng)液培養(yǎng)基配方參見附錄

.(DMEM):A。

22非洲綠猴腎細胞細胞

.(Vero)。

23磷酸鹽緩沖液配制參見附錄

.(PBS):A。

24青霉素鏈霉素配方參見附錄

.、:A。

25陽性血清中和抗體效價

.CDV:1∶1024。

26陰性血清無感染的犬血清

.CDV:CDV。

27酶結(jié)合物標記的葡萄球菌蛋白

.:HRPA(SPA)。

28底物溶液配制參見附錄

.:A。

29過氧化氫甲醇溶液配制參見附錄

.:A。

210鹽酸酒精溶液配制參見附錄

.:A。

211胰蛋白酶溶液配制參見附錄

.:A。

212酶及倍酶反應緩沖液酶濃度為保存

.Taq10Taq:Taq5U/μL,-20℃。

213逆轉(zhuǎn)錄酶及倍逆轉(zhuǎn)錄酶反應緩沖液逆轉(zhuǎn)錄酶濃度為保存

.10:50U/μL,-20℃。

214酶抑制劑保存

.RNA(40U/μL):-20℃。

215含各保存

.dNTP:dATP、dGTP、dCTP、dTTP10mmol/L,-20℃。

216引物濃度為其序列如下

.:20μmol/L,:

上游引物

(CDVF):5′CGAGTCTTTGAGATAGGGTT3′;

下游引物

(CDVR):5′CCTCCAAAGGGTTCCCATGA3′。

217隨機引物含有個堿基的隨機序列引物濃度為保存

.:9,50μmol/L,-20℃。

218水自配參見附錄或購買商品化水

.DEPC:(A),DEPC。

219試劑保存

.Trizol:4℃。

220異丙醇使用前預冷至

.:-20℃。

221乙醇用新開啟的無水乙醇和水配制使用前預冷至

.75%:DEPC,-20℃。

222無酶的管

.1.5mLRNAEppendorf。

223無酶的薄壁管

.0.2mLRNAPCR。

3器材和設備

31細胞培養(yǎng)瓶中號瓶

.