維生素A的分析

第一節(jié)概述第二節(jié)維生素A的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

第三節(jié)維生素A的鑒別第四節(jié)維生素A的含量測定什么是維生素A呢？＊維生素A是維持人體正常生理機能所必需的生物活性物質(zhì)；主要用于機體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)；大多數(shù)維生素在人體內(nèi)不能合成，須從食物中提取。＊第一節(jié)概述富含維生素A的食物水果類梨、蘋果、枇杷、櫻桃、香蕉、桂圓、杏子、荔枝、西瓜、甜瓜。蔬菜類

馬齒菜、大白菜、薺菜、番茄、茄子、南瓜、黃瓜、菠菜植物類綠豆、大米、胡桃仁維生素A的分類維生素A1A1存在于動物肝臟、血液和眼球的視網(wǎng)膜中，又稱為視黃醇,天然維生素A主要以此形式存在。脂溶性淡黃色片狀結(jié)晶，熔點64℃維生素A2A2主要存在于淡水魚的肝臟中。維生素A2的化學(xué)結(jié)構(gòu)與A1的區(qū)別只是在β-白芷酮環(huán)的3,4位上多一個雙鍵。

＊維生素具有多種生理功能，對視力、生長、上皮組織及骨骼的發(fā)育都是必需的。如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機能。

例如:VA缺乏—夜盲癥重要功能1.維持視覺

維生素A可促進視覺細胞內(nèi)感光色素的形成。全反式視黃醛可以被視黃醛異構(gòu)酶催化為4-順-視黃醛，4-順-視黃醛可以和視蛋白結(jié)合成為視紫紅質(zhì)（rhodopsin）。視紫紅質(zhì)遇光后其中的4-順-視黃醛變?yōu)槿匆朁S醛，因為構(gòu)像的變化，引起對視神經(jīng)的刺激作用，引發(fā)視覺。而遇光后的視紫紅質(zhì)不穩(wěn)定，迅速分解為視蛋白和全反視黃醛，重新開始整個循環(huán)過程。維生素A可調(diào)試眼睛適應(yīng)外界光線的強弱的能力，以降低夜盲癥和視力減退的發(fā)生，維持正常的視覺反應(yīng),有助于對多種眼疾(如眼球干燥與結(jié)膜炎等的治療)。

。2.促進生長發(fā)育

與視黃醇對基因的調(diào)控有關(guān).視黃醇也具有相當于類固醇激素的作用，可促進糖蛋白的合成。促進生長、發(fā)育，強壯骨骼，維護頭發(fā)、牙齒和牙床的健康。視黃醇，又稱維生素A，分子式：C20H30O它是人體必需的13種維生素之一，是一種脂溶性抗氧化劑，在人體中可以維持視力并且促進骨骼成長。是一種可溶于脂肪的脂溶性維生素，耐高溫，在空氣中易氧化。3.維持上皮結(jié)構(gòu)的完整與健全視黃醇和視黃酸可以調(diào)控基因表達，減弱上皮細胞向鱗片狀的分化，增加上皮生長因子受體的數(shù)量。保持皮膚濕潤，防止皮膚黏膜干燥角質(zhì)化，不易受細菌傷害，有助于對粉刺、膿包，皮膚表面潰瘍等癥的治療；4.加強免疫能力維生素A有助于維持免疫系統(tǒng)功能正常，能加強對傳染病特別是呼吸道感染及寄生蟲感染的身體抵抗力；有助于對肺氣腫、甲狀腺機能亢進癥的治療。主要表現(xiàn):由于破骨細胞活性增強，導(dǎo)致骨質(zhì)脫鈣、骨脆性增加、生長受抑、長骨變粗及骨關(guān)節(jié)疼痛；易激動、疲乏、頭痛、惡心、嘔吐、肌肉無力、坐立不安。食欲降低、腹痛、腹瀉；血液中血紅蛋白和鉀減少，凝血時間延長，易于出血。維生素A攝入過量維生素類藥物的分析方法有：生物法、微生物法、化學(xué)法和物理化學(xué)法，都是依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)與生物特性而進行的。目前常用的分析方法主要是化學(xué)法或物理化學(xué)法。

第二節(jié)維生素A的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)一．結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

1.化學(xué)結(jié)構(gòu)R=HVA醇VA1R=—COCH3VA醋酸酯R=—COC15H31VA棕櫚酸酯結(jié)構(gòu)特點：

（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；

lǘ（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。所謂天然維生素，就是食物中所含有的維生素。而科學(xué)家通過長期的研究和試驗，利用人工合成的方法來制造出的具有相同的維生素，即是人工合成的維生素，多作為維生素藥物。兩者不同的是：

天然的維生素多存在于膳食中，含量較少，營養(yǎng)的補充，一般多食不會給人體帶來副作用；而人工合成的維生素多為藥物制劑，含量及純度較高，常作為防病、治病的藥物應(yīng)用，需在醫(yī)生的指導(dǎo)下使用，一般不可濫用，否則會影響人體健康，甚至?xí)蚓S生素過量或積蓄所產(chǎn)生的毒副作用而造成嚴重的不良后果。

人造維生素更易被人體吸收，這是因為天然食品中的維生素是以化合物方式存在的，人體難以按需取用。以葉酸為例：從牛肝中人體只能吸收10%的葉酸，而人造葉酸人體則可加倍吸收

2.性質(zhì)

a.

紫外吸收＊具有共軛多烯側(cè)鏈—紫外吸收；＊最大吸收波長在325-328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同。b.溶解性：＊不溶于水＊溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。c.不穩(wěn)定性（易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)）＊共軛多烯側(cè)鏈—性質(zhì)非?；顫奷.與三氯化銻呈色鯨醇與SbCl3作用—卡爾-普賴斯（Carr-Price）反應(yīng)

應(yīng)用：

★鑒別★含量測定CHCl3條件:無水無醇水可使SbCl3水解成SbOCl乙醇可與正碳離子作用，使正電荷消失第三節(jié).鑒別試驗1.

三氯化銻反應(yīng)2.

紫外吸收光譜3.TLC

1.

三氯化銻反應(yīng)

藍色紫紅。VA與三氯化銻(SbCl3)中存在的親電試劑氯化高銻（SbCl5）作用形成不穩(wěn)定的藍色正碳離子

2.

紫外吸收光譜

VA的無水乙醇溶液在326nm有最大吸收。λmax為326nm一個吸收峰λmax為350～390nm三個吸收峰（VitA3）3.TLC

確認醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯.▲例：VA和其標準品用環(huán)己烷溶解展開劑：環(huán)己烷—乙醚（80：20）

吸附劑：硅膠G顯色：SbCl3T.S.（藍色斑點）Rf：VA醇0.08VA醋酸酯0.41VA棕櫚酸酯0.75第四節(jié)維生素A的含量測定一、紫外-可見分光光度法（三點校正法）二、三點波長的選擇法三、雜質(zhì)吸收四、皂化反應(yīng)一、紫外-可見分光光度法（三點校正法）本法是在三個波長處測定吸收度，根據(jù)校正公式計算吸收度A校正值后，再計算含量，亦稱“三點校正法”。原理：①雜質(zhì)的吸收在310～340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大，吸收度變小。②物質(zhì)對光的吸收具有加和性三點波長的選擇法①第1點：選擇維生素A的最大吸收波長（即λ1）。②第2點和第3點：在最大吸收波長的兩側(cè)各選一點（即λ2和λ3）。等波長差法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使λ3-λ1＝λ1-λ2.維生素A醋酸酯。等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1.維生素A醇。雜質(zhì)的吸收對維生素A測定有影響的雜質(zhì)，主要包括以下幾種⑴維生素A2和維生素A3，維生素A2在345～350nm波長范圍內(nèi)有吸收⑵維生素A的氧化產(chǎn)物(環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸)⑶維生素A在光照條件下產(chǎn)生的無活性的聚合物：鯨醇◆維生素A的氧化產(chǎn)物：▲ⅰ.環(huán)氧化物▲ⅱ.維生素A醛▲ⅲ.維生素A酸or三點測定法波長的選擇法三點波長選擇的原則為一點選擇維生素A的最大吸收波長處（即λ1）。其他兩點選擇在λ1的兩側(cè)各選一點（即λ2和λ3）。⑴等波長差法：λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使λ3-λ1＝λ1-λ2.Chp2010版規(guī)定測定維生素A醋酸酯時λ1=328nm，λ2=316nm，λ3=340nm。⑵等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3，使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1.Chp2010版規(guī)定測定維生素A醇時，λ1=325nm，λ2=310nm，λ3=334nm。測定方法合成維生素A和天然魚肝油中的維生素A是酯式維生素A。如供試品中干擾測定的雜質(zhì)較少，能符合下列第一法測定的規(guī)定時，可直接用溶劑溶解供試品后測定；否則應(yīng)按第二法，經(jīng)皂化提取，除去干擾后測定。⑴直接測定定法

1）方法：取維生素A醇酸酯適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解并定量稀釋制成每1ml中含9～15單位的溶液然后在310、316、628、340和360五個波長處分別測定吸光度確定最大吸收波長（應(yīng)為328nm）計算各波長下的吸光度與328nm波長下的比值。⑷維生素A的異構(gòu)體及其他：包括維生素Aa（2-順式）、新維生素Ab（4-順式）、新維生素Ac（2，6-二順式）及在合成過程中產(chǎn)生的中間體上述雜質(zhì)均在310～340nm的波長范圍內(nèi)有吸收，所以干擾維生素A的測定。因此，在測定維生素A的含量時，必須排除這些雜質(zhì)的干擾，三點校正法即可消除這些雜質(zhì)的影響皂化法該法適用于維生素A醇的測定方法：精密稱取一定量的供試品，加氫氧化鉀乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再經(jīng)乙醚提取、洗滌、過濾、濃縮等處理，最后用異丙醇溶解殘渣并稀釋成每1ml中含維生素A為9～15單位的溶液，在300、310、325、344nm波長處測定吸光度，并確切最大吸收波長（應(yīng)為325nm）計算A.求E1％1cm：由E