三體綜合征產(chǎn)前

21三體綜合征產(chǎn)前診斷201208010301鄭麗產(chǎn)前診斷定義：產(chǎn)前診斷始終遺傳咨詢的基礎上，主要通過遺傳檢測和影像學檢查，對高風險胎兒進行明確診斷，通過對患胎的選擇性流產(chǎn)達到胎兒選擇的目的，從而降低出生缺陷率，提法哦優(yōu)生質(zhì)量和人口素質(zhì)。產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷，它是為了了解胎兒在子宮內(nèi)的健康，有無先天性畸形和遺傳病，用某些特殊方法在子宮內(nèi)對胎兒進行診斷，以便及早采取措施避免殘疾胎兒的出生，提高出生人口的素質(zhì)，是優(yōu)生學的重要組成部分。21三體綜合征屬于常染色體病，為多了一條21號染色體導致，又稱Down’s綜合征，先天愚型新生兒發(fā)病率為1/800，男性患兒多于女性案例1張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕十五周，，擔心所懷胎兒不正常，前來進行產(chǎn)前咨詢。咨詢得知張某一姐姐曾生育一智力低下兒子，經(jīng)某醫(yī)院診斷為先天愚型，但具體核型不詳。張某孕前檢查各項優(yōu)生指標均正常，孕前無感冒服藥史，無有毒有害物質(zhì)接觸史。張某丈夫，32歲，司機，有煙酒嗜好，在妻子懷孕前半年已戒酒，減少吸煙量。兩人核型檢查均正常，家族中無其他特殊疾病患者，根據(jù)張某的情況，做孕中期唐篩，結(jié)果張某血清的AFP,hCG和uE3檢查結(jié)果陽性，再進行B超檢查胎兒情況，證實胎兒胎齡正確，發(fā)育正常。根據(jù)上述資料，張某所孕胎兒具有21三體綜合征的高風險，建議進行產(chǎn)前診斷。AFP：甲胎蛋白uE3:非結(jié)合雌三醇21三體綜合征hCG:35以下孕婦檢出率57%現(xiàn)認為β-hCG作為總hCG的亞單位，對先天愚型胎兒篩查意義更大產(chǎn)前診斷的方法非侵襲的：超聲波、X線、CT、磁共振等絨毛吸取術(shù)（8-12周）羊膜穿刺術(shù)（16-20周）侵襲性的：臍帶穿刺術(shù)（17-32周）孕婦外周血分離胎兒細胞

胎兒鏡羊膜穿刺術(shù)原理：羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細胞，通過羊膜穿刺獲取羊水中的胎兒細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)后通過G顯帶實驗進行核型分析，判斷染色體是否畸形從而診斷21三體綜合征。G顯帶：指將染色體標本經(jīng)堿、胰蛋白酶或其他鹽溶液處理后，再用Giemsa染液染色，染色體上出現(xiàn)深染及淺染的橫紋。實驗材料、試劑、器材1、藥品：pH6.8PBS,Giemsa,0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）2、器材：離心管、離心機、天平、37攝氏度溫箱、載玻片，蓋玻片、恒溫水浴箱、標本、光學顯微鏡、玻璃鉛筆、定時鐘、染色缸、直柄虹膜鑷、滴管實驗步驟1、取材A、腹部備皮，排空膀胱，平臥位常規(guī)消毒后鋪無菌洞巾B、麻醉。一般不需要，精神緊張者或可用普魯卡因或利多卡因麻醉。C、選擇穿刺部位，B超胎盤定位后避開胎盤D、抽取羊水E、穿刺完成后拔出穿刺針，局部壓迫5分鐘，穿刺部位敷無菌紗布，膠布固定穿刺部位的選擇1、中期妊娠：選擇恥骨聯(lián)合上3橫指，于腹中線或其左右側(cè)旁，捫吉囊樣感的部位做穿刺；也可在宮底與恥骨聯(lián)合連線中點或左右任何一側(cè)穿刺。2、晚期妊娠：先捫清胎先露，然后上推先露部，在先露下方穿刺；也可在胎兒頸背部空隙處或胎兒肢體側(cè)空隙處穿刺。穿刺過程在B超定位下，以20-21號腰椎穿刺針垂直刺入腹壁，通過腹壁和宮壁兩次阻力，當有落空感使進入羊膜腔，抽取芯針，見羊水溢出，接注射器，抽取清亮羊水20-30ml，送檢注意：如果抽取失敗或有母血感染，可隔一周再穿刺抽取。穿刺時間及風險估計抽取羊水最佳時間是妊娠16-20周原因：此時羊水量多，胎兒浮動，穿刺時進針容易，且不易傷及胎兒風險：引起流產(chǎn)的風險為0.5%，母體感染，RH溶血和其它婦科合并癥發(fā)生率低。細胞體外培養(yǎng)無菌超凈臺上將羊水注入50ml無菌離心管內(nèi)，1500r/min常溫離心10min，移去上清，留約0.5ml上清液，槍尖混勻，分裝吸取至3個60min培養(yǎng)皿，每皿添加4ml羊水完全培養(yǎng)基，37攝氏度5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6-7天。制片培養(yǎng)6-7天后，倒置顯微鏡觀察細胞生長情況有若干梭形發(fā)育良好細胞克隆生長，更換新鮮培養(yǎng)液，觀察2-3天后細胞島長成細胞融合度達70-80%較大克隆，出現(xiàn)數(shù)目不等圓形類圓形透亮細胞時，可收獲收獲是更換培養(yǎng)液，加秋水仙素0.1微克每毫升，4-4,5h，鏡下大量“魚眼樣”透明細胞，收獲吸取培養(yǎng)上清至一新離心管，加入0.25%胰酶，37攝氏度消化2min，1000r/min離心10min，棄上清，加入0.075mol/LKCL低滲液，37攝氏度12-13min，用3:1甲醇/冰醋酸預固定和固定后，滴片，常規(guī)G顯帶。顯帶1、將制好的染色體標本，至72-75攝氏度烤箱烤片3h.2、放入預溫至37攝氏度的0.025%胰酶溶液中(pH=7.2-7.4)消化1min左右，每次的作用時間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時間。顯帶在Giemsa染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干，閱片。鏡檢：顯微鏡倍目鏡下檢查顯帶標本，在染色體上高若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標本，可供攝像分析。結(jié)果21三體綜合征純合型占95%

嵌合型占1-2%

易位型占3-4%純合型核型：47，XX(XY)，+21發(fā)生與父母染色體核型無關，是由于配子形成過程中21號染色體不分離不分離大多發(fā)生是患者母親，且母親年齡越大，不分離幾率越高，出生21三體綜合征患兒可能性越大。嵌合型核型：46，XX(XY)/47，XX(XY)，+21原因：受精卵早期發(fā)育中發(fā)生了21號染色體不分離不分離發(fā)生時間越晚，21三體細胞越少易位型Dq21q:14q21q占58.5%核型：45，XX(XY)，-14，-21，+rob(14;21)55%新發(fā)生，45%是由于雙親之一的平衡易位攜帶者遺傳而來21qGq:96%新發(fā)生21q21q占83.3%核型：46，XX(XY),-21，+t(21q；21q)如果雙親之一為21q21q平衡易位攜帶者，就沒有可能出生表型正常胎兒，因為只能產(chǎn)生三體或單體的合子、注意事項1、胰蛋白酶濃度和處理時間隨氣溫高低有所不同。一般規(guī)律是標本存放時間越長，在胰蛋白酶當中處理時間越長。太新鮮的標本，染色體會出現(xiàn)毛絨現(xiàn)象，片齡很長的染色體往往導致斑點狀染色體。2、胰蛋白酶溫度：溫度越高，反應速