GB/T 31805-2015豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31805—2015

豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofCowpeaseveremosaicvirus

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T31805—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任

。。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局中華人民共和國(guó)江蘇出入境檢驗(yàn)檢

:、

疫局

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人陳青李彬方志鵬黃峰廖富榮陳紅運(yùn)林石明

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31805—2015

豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豇豆重花葉病毒檢疫鑒定的血清學(xué)生物學(xué)和分子檢測(cè)方法

、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能攜帶有豇豆重花葉病毒的植物繁殖材料種子植株和產(chǎn)品的檢疫鑒定

(、)。

2儀器設(shè)備和主要試劑

21儀器設(shè)備

.

儀定量?jī)x滅菌鍋制冰機(jī)超低溫冰箱常規(guī)冰箱旋渦震蕩器電泳儀凝膠成像系

PCR、PCR、、、、、、、

統(tǒng)微量研磨儀酶標(biāo)儀洗板機(jī)微量天平感量水平電泳槽高速冷凍臺(tái)式離心機(jī)水浴槽

、、、、(:0.001g)、、、、

計(jì)移液器孔酶標(biāo)板研缽等防蟲溫室

pH、(1000μL、200μL、20μL、2μL)、96、;。

22主要試劑

.

除另有規(guī)定外所有試劑均為分析純緩沖液

,。PCR、dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、DNA

聚合酶引物和探針瓊脂酶聯(lián)檢測(cè)試劑見附錄

、、,B。

3檢測(cè)樣品的制備

31種子

.

挑取畸形種子播于滅菌土中待長(zhǎng)出片片葉后將表現(xiàn)癥狀的植株編號(hào)未表現(xiàn)癥狀的植株

,3~4,,

分組株為組并編號(hào)采集的葉片分成份根據(jù)需要分別用于酶聯(lián)測(cè)定和分子檢測(cè)

(101)。2,。

32植株

.

有癥狀如葉片畸形花葉斑駁等的植株編號(hào)單獨(dú)檢測(cè)沒有癥狀的分組并編號(hào)檢測(cè)分組方法

(、、)。,

和檢測(cè)方法同雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定

3.1。。

4檢測(cè)與鑒定

41雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定

.

把制備的樣品上清液加入已包被抗體的酶聯(lián)板中進(jìn)行每個(gè)樣品平行加到

CPSMV,DAS-ELISA。

兩個(gè)孔中設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照健康的植物組織作陰性對(duì)照感染了的植物組織作陽(yáng)性對(duì)

。[,CPSMV

照其中陰性對(duì)照種類和材料如種子或葉片應(yīng)盡量與檢測(cè)樣品一致樣品提取緩沖液作空白對(duì)照不

,()],,

同的檢測(cè)試劑或試劑盒按說(shuō)明操作具體操作見附錄

。B。

42RT-PCR

.

分別提取樣品和對(duì)照的總反轉(zhuǎn)錄合成后進(jìn)行擴(kuò)增健康的植物組織作陰性對(duì)

RNA,cDNA,PCR。

照感染的植物組織作陽(yáng)性對(duì)照