GB/T 35515-2017化學品魚類雌激素、雄激素和芳香酶抑制活性試驗方法

ICS133001302040

;

A80...

中華人民共和國國家標準

GB/T35515—2017

化學品魚類雌激素雄激素和芳香酶

、

抑制活性試驗方法

Chemicals—Fishassaforoestroenicandandroenicactivit

yggy,

andaromataseinhibition

2017-12-29發(fā)布2018-07-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T35515—2017

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

術語定義和縮略語

2、………………………1

方法概述

3…………………1

質量保證與質量控制

4……………………2

儀器設備

5…………………2

試驗準備

6…………………2

試驗用水

6.1……………2

魚的馴養(yǎng)

6.2……………2

預暴露和魚的選擇

6.3…………………3

試驗程序

7…………………3

一般說明

7.1……………3

試驗濃度的選擇

7.2……………………3

試驗過程

8…………………3

受試魚的選擇與稱重

8.1………………3

暴露條件

8.2……………3

時間

8.2.1……………3

馴養(yǎng)

8.2.2……………3

燈光和溫度

8.2.3……………………4

測試頻率

8.3……………4

觀察

8.4…………………4

死亡率

8.4.1…………………………4

行為和表觀

8.4.2……………………4

魚的安樂死

8.4.3……………………4

第二性征的觀察

8.4.4………………4

卵黃蛋白原測定

8.4.5………………5

數(shù)據(jù)和報告

9………………5

采用方差分析對生物標志物響應進行評價

9.1(ANOVA)…………5

試驗結果報告

9.2………………………5

附錄資料性附錄進行卵黃蛋白原分析的樣品收集推薦程序

A()……7

附錄資料性附錄檢測特定內分泌活性物質對黑頭呆魚和青鳉的第二性征的評估

B()……………16

附錄資料性附錄魚類內分泌篩選試驗的實驗條件

C()………………21

附錄資料性附錄斑馬魚和黑頭呆魚的產卵基板

D()…………………23

附錄資料性附錄可接受的稀釋水的一些化學特性

E()………………25

Ⅰ

GB/T35515—2017

附錄資料性附錄卵黃蛋白原加標和批間標準品分析

F()……………26

附錄資料性附錄統(tǒng)計分析流程

G()……………………27

附錄規(guī)范性附錄試驗結果闡釋和可接受性的標準

H()………………28

參考文獻

……………………29

圖用剪刀沿著胸鰭前剪開

A.1……………8

圖用剪刀沿著腹部中線伸入腹部離肛門頭部大約處

A.22mm………9

圖采用手術鉗撐開腹壁暴露肝臟以及其他內部器官或者將腹壁橫向固定

A.3,()…9

圖采用手術鉗緩慢分離和切除肝臟

A.4………………10

圖采用手術鉗緩慢摘取腸道

A.5………………………10

圖腸道以及任何腸系膜的附屬物的終端采用剪刀切割

A.6…………11

圖雌魚對于雌魚過程相同

A.7()………………………11

圖完成整個過程

A.8……………………12

圖斑馬魚魚頭魚尾的切分

A.9…………15

圖黑頭呆魚珠星的數(shù)目和尺寸

B.1……………………17

圖臀鰭形狀和尺寸的性別差異

B.2……………………19

圖臀鰭線的結合板上的突起過程

B.3…………………20

圖帶有切割點的魚身照片

B.4…………20

圖斑馬魚產卵基板

D.1…………………23

圖黑頭呆魚產卵基板

D.2………………24

圖統(tǒng)計分析流程圖

G.1…………………27

表黑頭呆魚珠星模板

B.1………………18

表魚類內分泌篩選試驗的實驗條件

C.1………………21

表可接受的稀釋水的一些化學特性

E.1………………25

Ⅱ

GB/T35515—2017

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準技術內容與經(jīng)濟合作與發(fā)展組織

(OrganizationforEconomicCooperationandDevelopment,

測試導則年魚試驗雌激素雄激素和芳香酶抑制活性短期篩選試驗英文版

OECD)230(2009)《21d:、》()

一致

。

本標準由全國危險化學品管理標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標準起草單位中國檢驗檢疫科學研究院廣東省微生物分析檢測中心上海市檢測中心寧波出

:、、、

入境檢驗檢疫局

。

本標準主要起草人崔媛陳會明曾國驅李海山謝文平梅承芳殷浩文梁藝懷陳小青

:、、、、、、、、。

Ⅲ

GB/T35515—2017

引言

本試驗方法描述了一種體內篩選試驗方法將性成熟的雄魚和處于產卵期的雌魚一起暴露于化學

,

品中在暴露期結束時對雄魚和雌魚的生物標志物終點進行測定作為測試化學品的雌激

21d。21d,,

素芳香酶抑制或雄激素活性指標這些測試終點包括卵黃蛋白原和第二性征對黑頭呆魚日本青鳉

、。。、

和斑馬魚可進行卵黃蛋白原測定而第二性征只能在黑頭呆魚和日本青鳉上測定

,。

卵黃蛋白原通常受循環(huán)的內源性雌激素的刺激由雌性卵生脊椎動物的肝臟產生卵黃蛋白原是

,。

卵黃蛋白的前體一旦在肝臟中產生由血流進入卵巢被發(fā)育中的卵吸收并修飾卵黃蛋白原在未成

,,,。

熟的雌魚和雄魚的血漿中幾乎檢測不到因為它們缺乏足夠的循環(huán)雌激素但在受外源性的雌激素的刺

,,

激下肝臟能夠合成并分泌卵黃蛋白原

,。

卵黃蛋白原的測定能夠檢測不同雌激素作用模式的化學品對雌激素類化學品的檢測有可能通過

,,

測量雄魚的卵黃蛋白原的產生在雌性體內的雌激素循環(huán)水平的降低例如通過抑制轉化內源性雄激

。,

素為天然雌激素雌二醇的芳香酶會引起卵黃蛋白原水平的降低這一點被用來檢測具有芳香酶

17β-,,

抑制性質的化學品

。

采用已建立標準化的常規(guī)檢測方法采用免疫化學的物種特異性的酶聯(lián)免疫吸收分析方

。(ELISA)

法收集黑頭呆魚的血液斑馬魚的血液或頭尾的勻漿以及青鳉的肝臟作為測定的樣品對于

,、/,VTG。

青鳉在血液中測量的與肝臟中所測具有良好的相關性附錄提供了對于卵黃蛋白原分析的

,VTG。A

樣品收集的推薦程序卵黃蛋白原可采用不同的試驗方法但都得基于驗證的物種特異性

。,ELISA

方法

。

特定物種雄魚的第二性征是可觀察的與內源性雄激素循環(huán)水平呈定量響應性這些特性在黑頭呆

,,

魚和青鳉上能體現(xiàn)但斑馬魚沒有體現(xiàn)因為斑馬魚不具備可定量的第二性征

,,。

對于黑頭呆魚外源受試物暴露的主要指標是位于雌魚唇部珠星的數(shù)量對于青鳉乳突物的數(shù)目

,。,

組成了雌魚的外源性暴露于雄激素受試物的主要標志物附錄分別說明了對于黑頭呆魚和青鳉的

。B

性特征評價的過程

。

Ⅳ

GB/T35515—2017

化學品魚類雌激素雄激素和芳香酶

、

抑制活性試驗方法

1范圍

本標準規(guī)定了化學品魚類雌激素雄激素和芳香酶抑制活性試驗方法的方法概述質量保證與質量

、、

控制儀器設備試驗準備試驗程序試驗過程數(shù)據(jù)和報告

、、、、、。

本標準適用于化學品魚類雌激素雄激素和芳香酶抑制活性試驗

、。

2術語定義和縮略語

、

21術語和定義

.

下列術語和定義適用于本文件

。

211

..

承載率loadingrate

單位體積水中魚的濕重

。

212

..

承載密度stockingdensity

單位體積水中魚的數(shù)目

。

213

..

卵黃蛋白原vitellogeninVTG

;

一種磷脂糖蛋白蛋黃蛋白的前體一般出現(xiàn)于所有卵生動物的性成熟雌性個體

,,。

214

..

最大耐受濃度maximumtoleratedconcentrationMTC

;

受試物引起小于死亡率的最高試驗濃度

10%