標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 40183-2021 DNA甲基化的測(cè)定 焦磷酸測(cè)序法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為使用焦磷酸測(cè)序技術(shù)檢測(cè)DNA甲基化狀態(tài)提供規(guī)范性指導(dǎo)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域內(nèi)對(duì)特定基因區(qū)域或全基因組范圍內(nèi)CpG位點(diǎn)的甲基化水平進(jìn)行定量分析。

標(biāo)準(zhǔn)中詳細(xì)規(guī)定了從樣本準(zhǔn)備到數(shù)據(jù)解讀的整個(gè)流程，包括但不限于：

  • 樣品采集與處理：描述了如何正確收集生物樣品（如血液、組織等），以及如何通過(guò)提取DNA來(lái)獲得適合后續(xù)步驟使用的高質(zhì)量核酸。
  • DNA片段化與純化：介紹了將長(zhǎng)鏈DNA打斷成適合焦磷酸測(cè)序所需長(zhǎng)度的方法，并強(qiáng)調(diào)了去除RNA和蛋白質(zhì)雜質(zhì)的重要性。
  • 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化：這是整個(gè)過(guò)程中非常關(guān)鍵的一環(huán)，利用化學(xué)方法將未被甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變，從而在后續(xù)測(cè)序時(shí)能夠區(qū)分兩者。
  • PCR擴(kuò)增及文庫(kù)構(gòu)建：說(shuō)明了如何選擇合適的引物對(duì)目標(biāo)序列進(jìn)行擴(kuò)增，并介紹了一種有效的文庫(kù)制備策略以確保高通量測(cè)序的成功率。
  • 焦磷酸測(cè)序操作指南：提供了關(guān)于儀器設(shè)置、試劑配比等方面的建議，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。
  • 數(shù)據(jù)分析與報(bào)告撰寫(xiě)：指出了在完成測(cè)序后，應(yīng)采用哪些軟件工具來(lái)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并給出了編寫(xiě)正式研究報(bào)告時(shí)需包含的信息類(lèi)型。


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....

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  • 現(xiàn)行
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  • 2021-05-21 頒布
  • 2021-12-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
GB/T 40183-2021DNA甲基化的測(cè)定焦磷酸測(cè)序法_第1頁(yè)
GB/T 40183-2021DNA甲基化的測(cè)定焦磷酸測(cè)序法_第2頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

ICS07080

A21.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T40183—2021

DNA甲基化的測(cè)定焦磷酸測(cè)序法

DeterminationofDNAmethylation—Pyrosequencing

2021-05-21發(fā)布2021-12-01實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T40183—2021

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位河北醫(yī)科大學(xué)中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院河北省食品檢驗(yàn)研究院中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)

:、、、

育生物學(xué)研究所農(nóng)業(yè)資源研究中心河北師范大學(xué)

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人呂品馬愛(ài)進(jìn)張巖林浩李永鵬李東明黃蕓楊宏超

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T40183—2021

DNA甲基化的測(cè)定焦磷酸測(cè)序法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用焦磷酸測(cè)序法測(cè)定甲基化的方法

DNA。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)植物組織或體外培養(yǎng)細(xì)胞甲基化測(cè)定

DNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語(yǔ)和定義縮略語(yǔ)

、

31術(shù)語(yǔ)和定義

.

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

311

..

DNA甲基化DNAmethylation

在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下以腺苷甲硫氨酸為甲基供體將甲基轉(zhuǎn)移至堿基特定結(jié)構(gòu)上的

DNA,S-,

過(guò)程

。

32縮略語(yǔ)

.

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(polymerasechainreaction)

4原理

經(jīng)重硫酸鹽硫化處理后雙鏈中未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶通過(guò)將尿嘧啶

DNA,DNA,PCR

轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶根據(jù)產(chǎn)物中相應(yīng)甲基化位點(diǎn)的胞嘧啶和胸腺嘧啶的比例進(jìn)行定量

,PCR。

5試劑或材料

除非另有規(guī)定僅使用分析純?cè)噭?/p>

,。

51水二級(jí)水

.:GB/T6682,。

52動(dòng)物基因組提取試劑盒

.DNA。

53植物基因組提取試劑盒

.DNA。

54焦磷酸

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