項(xiàng)目十一 抗生素效價(jià)測(cè)定技術(shù)

抗生素效價(jià)測(cè)定技術(shù)一、發(fā)酵技術(shù)1.定義原始定義發(fā)泡、產(chǎn)生二氧化碳的過(guò)程；生物化學(xué)中定義有機(jī)物進(jìn)行分解代謝釋放能量的過(guò)程；工業(yè)微生物中發(fā)酵定義通過(guò)微生物或其他生物細(xì)胞或經(jīng)過(guò)生物工程改造的工程菌的培養(yǎng)來(lái)制備工業(yè)產(chǎn)品或轉(zhuǎn)化某些物質(zhì)的過(guò)程。2.發(fā)酵分類(lèi)（1）按氧氣需要量（2）按工藝不同AMET01需氧發(fā)酵（大多數(shù)藥品）、厭氧發(fā)酵。AMET02淺層發(fā)酵（薄層培養(yǎng)基）、深層發(fā)酵（在液體深層中進(jìn)行發(fā)酵）液體深層發(fā)酵分類(lèi)分批發(fā)酵：營(yíng)養(yǎng)物和菌種一次加入進(jìn)行培養(yǎng)，直到結(jié)束放出。廣泛應(yīng)用。01特點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少；微生物增多；環(huán)境非穩(wěn)態(tài)；微生物生長(zhǎng)四個(gè)時(shí)期明顯。連續(xù)發(fā)酵02以一定的速度向發(fā)酵罐內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)基，同時(shí)流出培養(yǎng)液，微生物在穩(wěn)定狀態(tài)下生長(zhǎng)，可以有效延長(zhǎng)微生物生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期。特點(diǎn)：操作穩(wěn)定，利于設(shè)備機(jī)械化、自動(dòng)化；減少滅菌次數(shù)、易于過(guò)程優(yōu)化；易染菌、微生物與易變異、設(shè)備要求高；微生物生長(zhǎng)四個(gè)時(shí)期不明顯。常用于廢水處理、酒精、氨基酸等發(fā)酵工業(yè)。補(bǔ)料分批發(fā)酵或半連續(xù)發(fā)酵03介于分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的一種方式?？梢越獬孜镆种?，產(chǎn)物抑制或客服微生物過(guò)度生長(zhǎng)，提高有用產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化率。應(yīng)用廣泛，如面包酵母、氨基酸、抗生素等。（3）按培養(yǎng)基狀態(tài)分類(lèi)（4）按發(fā)酵產(chǎn)品類(lèi)型分類(lèi)（141頁(yè)4min）菌體發(fā)酵（蟲(chóng)草頭孢菌）A轉(zhuǎn)化發(fā)酵D酶發(fā)酵B生物細(xì)胞發(fā)酵E代謝產(chǎn)物發(fā)酵C利用微生物細(xì)胞中的酶將一種化合物轉(zhuǎn)化為另一種，如乙醇到乙酸。（5）單一或混合菌種發(fā)酵（6）菌種狀態(tài)游離發(fā)酵、固定化發(fā)酵。固定化發(fā)酵是指固定在水不溶性載體上，在一定的空間范圍進(jìn)行生命活動(dòng)(生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖、遺傳和新陳代謝等)的細(xì)胞。3.發(fā)酵工藝流程一般發(fā)酵工藝簡(jiǎn)圖典型的分批微生物反應(yīng)工藝流程圖二、抗生素效價(jià)測(cè)定1.抗生素定義生物在生命活動(dòng)中產(chǎn)生的極微量能選擇性的抑制或影響其他生物機(jī)能的一類(lèi)天然有機(jī)化合物?？梢杂晌⑸铮ㄖ饕?、動(dòng)物。植物產(chǎn)生?？股氐纳餀z定是以抗生素對(duì)微生物的抗菌效力作為效價(jià)的衡量標(biāo)準(zhǔn)。差異毒力較大A抗菌活性強(qiáng)B有不同抗菌譜C2.醫(yī)用抗生素特點(diǎn)濫用抗生素的原因有哪些？3.抗生素單位和效價(jià)（１）質(zhì)量單位以抗生素的生物活性部分重量作單位

1微克（ｕｇ）＝１U，１毫克＝1000U。（２）類(lèi)似質(zhì)量單位以特定的純粹抗生素類(lèi)的重量作為１單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環(huán)素鹽酸鹽（包括無(wú)生物活性的鹽酸根在內(nèi)）。（3）質(zhì)量折算單位以原始的活性單位相當(dāng)?shù)脑噭┵|(zhì)量為1U進(jìn)行折算。如青霉素的單位是以50ml肉湯培養(yǎng)基內(nèi)能完全抑制金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的青霉素量為1U。（4）特定單位（5）抗生素效價(jià)效價(jià)是指抗生素有效成分的含量，即在同一條件下比較抗生素和標(biāo)準(zhǔn)品的抗菌活性，常用百分?jǐn)?shù)表示。

效價(jià)=檢品的抗菌活性/標(biāo)準(zhǔn)品的抗菌活性4.抗生素效價(jià)的微生物測(cè)定方法稀釋法、比濁法、管碟法（1）管碟法：

是利用抗生素在含敏感試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基中的球面擴(kuò)散滲透作用，從而形成一定的抑菌圈。通過(guò)瓊脂培養(yǎng)基，可觀察并測(cè)量出抑菌圈的大小。管碟法原理

在一定的抗生素濃度范圍內(nèi)，對(duì)數(shù)劑量(濃度)與抑菌圈的表面積或直徑成正比，可以得出一條曲線。

抗生素濃度換算成對(duì)數(shù)，則抑菌圈直徑與抗生素對(duì)數(shù)成直線關(guān)系1.實(shí)驗(yàn)菌株的培養(yǎng)；2.pH6.0磷酸鹽緩沖液的配制；3.青霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制；稀釋成2U/ml或0.5U/ml的兩種濃度；4.待檢樣品溶液的配制；5.平板制備；6.效價(jià)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟（143頁(yè)）在平板底部四邊，分別對(duì)角注明“SH”、“SL”和“UH”、“UL”標(biāo)記將不銹鋼小管(俗稱(chēng)為牛津杯)放置在含敏感試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基上。SLULSHUH以無(wú)菌滴管分別在每個(gè)牛津杯內(nèi)加入相應(yīng)的抗生素溶液至滿(mǎn)但不溢出管外且四杯內(nèi)液面高度相同，蓋上平皿蓋，靜置30分鐘。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。抑