第3節(jié) 固定相與流動相_第1頁
第3節(jié) 固定相與流動相_第2頁
第3節(jié) 固定相與流動相_第3頁
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第3節(jié) 固定相與流動相_第5頁
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第三章

液相色譜分析一、液相色譜固定相stationaryphaseofHPLC二、液相色譜流動相

mobilephaseofHPLC第三節(jié)

液相色譜的固定相與流動相highperformanceliquidchromatographstationaryphaseandmobilephaseofHPLC2023/2/5一、液相色譜固定相

stationaryphasesofLC

1.液-液分配及離子對分離固定相(1)全多孔型擔(dān)體由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體;早期采用100μm的大顆粒,表面涂漬固定液,性能不佳已不多見;現(xiàn)采用10μm以下的小顆粒,化學(xué)鍵合制備柱填料;(2)表面多孔型擔(dān)體

(薄殼型微珠擔(dān)體)30~40μm的玻璃微球,表面附著一層厚度為1~2μm的多孔硅膠。表面積小,柱容量底;2023/2/5(3)化學(xué)鍵合固定相

化學(xué)鍵合固定相:目前應(yīng)用最廣、性能最佳的固定相;

a.硅氧碳鍵型:≡Si—O—C

b.硅氧硅碳鍵型:≡Si—O—Si

C

穩(wěn)定,耐水、耐光、耐有機溶劑,應(yīng)用最廣;

c.硅碳鍵型:≡Si—C

d.硅氮鍵型:≡Si—N2023/2/5化學(xué)鍵合固定相的特點(1)傳質(zhì)快,表面無深凹陷,比一般液體固定相傳質(zhì)快;(2)壽命長,化學(xué)鍵合,無固定液流失,耐流動相沖擊;耐水、耐光、耐有機溶劑,穩(wěn)定;(4)選擇性好,可鍵合不同官能團,提高選擇性;(5)有利于梯度洗脫;存在著雙重分離機制:(鍵合基團的覆蓋率決定分離機理)高覆蓋率:分配為主;低覆蓋率:吸附為主;

2023/2/52.液-固吸附分離固定相

種類:硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等;結(jié)構(gòu)類型:全多孔型和薄殼型;粒度:5~10μm;

2023/2/53.離子交換色譜分離固定相

結(jié)構(gòu)類別:(1)薄膜型離子交換樹脂

薄殼玻璃珠為擔(dān)體,表面涂約1%的離子交換樹脂;(2)離子交換鍵合固定相

薄殼鍵合型;微粒硅膠鍵合型(鍵合離子交換基團)

樹脂類別:(1)陽離子交換樹脂(強酸性、弱酸性)(2)陰離子交換樹脂(強堿性、弱堿性)2023/2/54.空間排阻分離固定相(1)軟質(zhì)凝膠

葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);水為流動相。適用于常壓排阻分離。(2)半硬質(zhì)凝膠

苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物,有機凝膠;非極性有機溶劑為流動相,不能用丙酮、乙醇等極性溶劑(3)硬質(zhì)凝膠

多孔硅膠、多孔玻珠等;化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機械強度大,流動相性質(zhì)影響小,可在較高流速下使用??煽乜讖讲A⑶?,具有恒定孔徑和窄粒度分布。2023/2/5二、液相色譜的流動相

mobilephasesofLC1.流動相特性

(1)液相色譜的流動相又稱為:淋洗液,洗脫劑。流動相組成改變,極性改變,可顯著改變組分分離狀況;(2)親水性固定液常采用疏水性流動相,即流動相的極性小于固定相的極性,稱為正相液液色譜法,極性柱也稱正相柱。(3)若流動相的極性大于固定液的極性,則稱為反相液液色譜,非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。2023/2/52.流動相類別

按流動相組成分:單組分和多組分;按極性分:極性、弱極性、非極性;按使用方式分:固定組成淋洗和梯度淋洗。常用溶劑:己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性,以改進分離或調(diào)整出峰時間。2023/2/53.流動相選擇

在選擇溶劑時,溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。

采用正相液-液分配分離時:首先選擇中等極性溶劑,若組分的保留時間太短,降低溶劑極性,反之增加。也可在低極性溶劑中,逐漸增加其中的極性溶劑,使保留時間縮短。

常用溶劑的極性順序:

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)2023/2/54.選擇流動相時應(yīng)注意的幾個問題(1)盡量使用高純度試劑作流動相,防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。(2)避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失;酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。(3)試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度,防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。(4)流動相同時還應(yīng)滿足檢測器的要求。當(dāng)使用紫外檢測器時,流動相不應(yīng)有紫外吸收。2023/2/5請選擇內(nèi)容第一節(jié)高效液相色譜的特點與儀器featureandinstrumentofHPLC第二節(jié)基本原理與主要分離類型basicprincipleandmainseparatingtypes第三節(jié)固定相與流動相stationaryphaseandmobilephase第四節(jié)影響分離的因素與操作條件選擇factorsinfluen

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