課題1微生物的實驗室培養(yǎng)

腸黏膜上分布的細菌專題2微生物的培養(yǎng)與應用微生物是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱．定義：種類：病毒非細胞結(jié)構(gòu)特點：個體微小、結(jié)構(gòu)簡單、代謝速度快酵母菌、霉菌、蘑菇草履蟲、變形蟲原核生物-“衣藍支細線”真核生物真菌原生生物微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物。葡萄球菌大腸桿菌放線菌酵母菌霉菌螺旋菌變形蟲課題1

微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)基可以分為哪幾類？培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？一、培養(yǎng)基自主學習什么是培養(yǎng)基？一、培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識定義：是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)。分類：①液體培養(yǎng)基：②固體培養(yǎng)基：凝固劑瓊脂菌

落基本成分：①碳源、氮源、無機鹽、水牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨

10.0gNaCl5.0g瓊脂

20.0g蒸餾水

定容至1000ml。碳源、氮源、維生素氮源、維生素碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-葡萄糖、脂肪酸等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、尿素等1.關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是()A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量練一練②還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)（生長因子）以及氧氣的要求．二、無菌技術(shù)避免雜菌污染的方法包括哪四個方面？什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？防止外來雜菌的入侵對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。避免周圍環(huán)境中微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸主要內(nèi)容：消毒：使用較溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。①定義：②常用方法：煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min?；瘜W藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。紫外線消毒滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，（包括芽胞和孢子）。①定義：②常用方法：灼燒滅菌：干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.（最常用的）實驗操作制備培養(yǎng)基接種培養(yǎng)觀察、記錄結(jié)果用什么方法滅菌？滅菌過程中為什么要包牛皮紙？制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基有哪些步驟？倒平板有哪些步驟？一、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：

2.稱量：牛肉膏3.溶化：整個過程不斷用玻棒攪拌--防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。4.滅菌:(先調(diào)pH)高壓蒸汽滅菌，干熱滅菌5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時--在酒精燈附近倒平板--平板倒置--（培養(yǎng)基為液體，不燙手）（防止污染）（培養(yǎng)基表面水分更好揮發(fā)，防止皿蓋水珠落入培養(yǎng)基）練習1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是（）A

將用于微生物培養(yǎng)的器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵2.下列操作與無菌技術(shù)無關(guān)的是（）A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成二、純化大腸桿菌最常用的接種方法：平板劃線法稀釋涂布平板法平板劃線法：（殺死接種環(huán)上原有的微生物）通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面---分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體稱菌落（避免高溫殺死菌種）一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)則的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。（接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種的數(shù)目減少，最后得到菌落。）（為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種）劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)：殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。注意：微量移液器稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。①系列稀釋操作②涂布平板操作稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍三、培養(yǎng)37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h結(jié)果分析與評價1、培養(yǎng)基的制作是否合格？2、接種操作是否符合無菌要求？3、是否進行了及時細致地觀察與記錄？如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。觀察培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存2、長期保存：甘油冷凍管藏法菌種的保存課題延伸目的：保持菌種的純凈方法：微生物的培養(yǎng)基礎(chǔ)知識實驗操作結(jié)果分