結(jié)核桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)監(jiān)測2014.6.5楊峻山科室講課

結(jié)核桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測A.TBTM（瑅碧）——準確、快速、簡便的結(jié)核感染檢測2結(jié)核病疫情感染人數(shù)：全球人口的1/3，中國的感染率為44.5%；感染者一生中會有約10%的風險發(fā)展成為結(jié)核??；年新發(fā)病例數(shù)：全球每年報告新病例約800-1000萬；中國每年報告新病例約150萬；死亡人數(shù)：全球每年死亡病例約300萬；其中中國約13萬；中國是全球22個結(jié)核病高負擔國家之一。3影像學(xué)方法：特異性較差，與醫(yī)師的經(jīng)驗有關(guān)，主觀性強。培養(yǎng)：結(jié)核病診斷金標準，敏感性為30-50%且耗時2-8周；抗酸染色法（俗稱涂片）：敏感性為30-40%；血清結(jié)核抗體定性檢測：敏感性在0-100%，特異性約為47-100%；分子診斷方法（如PCR）：重復(fù)性較差，需要痰標本；結(jié)核菌素試驗（TST）：受卡介苗干擾，特異性差，在肺結(jié)核病人中存在10-25%的假陰性。結(jié)核病診斷和輔助診斷方法現(xiàn)狀4應(yīng)用現(xiàn)狀：IGRA技術(shù)是國際最新的用于結(jié)核桿菌感染的體外免疫診斷方法；在北美、歐洲和日本已被廣泛應(yīng)用于結(jié)核桿菌感染的檢測，包括結(jié)核病輔助診斷；高危人群篩查；公共衛(wèi)生突發(fā)事件；健康人群體檢等；美國和日本已經(jīng)將該技術(shù)寫入該國用于結(jié)核防治的指導(dǎo)原則中。 -干擾素釋放分析技術(shù)（Interferon-gammaReleaseAssay,簡稱IGRA）5全球現(xiàn)有的三個IGRA產(chǎn)品T.SPOT-TB

細胞IGRA；QuantiFERONTBGold(intube)：簡稱QFT-IT

全血IGRA；

尚未獲得中國SFDA批準進入中國；A.TB：國內(nèi)第一家

全血IGRA；結(jié)核桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測2011年7月6日，獲中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）批準上市生產(chǎn)企業(yè)：?？诰S瑅璦生物研究院注冊號：國食藥監(jiān)械（準）字2011第3400801；產(chǎn)品標準編號：YZB/國2442-2011，項目類別：體外三類診斷試劑

原理與技術(shù)背景γ-干擾素釋放實驗（IGRA）

（IGRA，interferon-gammareleaseassay）酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA）

（ELISA，Enzyme-LinkedImmunoAssay）結(jié)核桿菌特異抗原

早期抗原靶6（ESAT-6）

earlysecretedantigenictarget6

培養(yǎng)濾液蛋白10（CFP10）（culturefiltrateprotein10）基本原理1

機體感染結(jié)核桿菌后產(chǎn)生的T淋巴細胞在體外受到特異性抗原刺激時會釋放γ-干擾素，通過對γ-干擾素的定量分析可判斷是否具有結(jié)核桿菌的特異性T細胞反應(yīng)。γ-干擾素釋放實驗（IGRA）Proteosome蛋白酶體exocytosis-干擾素結(jié)核桿菌特異性T細胞抗原呈遞細胞脫毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子注射器的作用LFnESAT6/LFnCFP10產(chǎn)品特點2高靈敏度

○結(jié)核感染引起的細胞免疫反應(yīng)早于細菌學(xué)及影像學(xué)表現(xiàn)；

○無需帶菌標本，適用于“菌陰肺結(jié)核”及“肺外結(jié)核”的鑒別

○受個體免疫功能低下影響?。?/p>

高特異性

不受卡介苗與絕大多數(shù)環(huán)境非結(jié)核分枝桿菌影響

安全快速只需患者提供3ml靜脈全血，次日可出報告A.TB臨床性能指標國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)——1085例樣本

●

試驗組472例：

菌陽結(jié)核菌陰結(jié)核

●對照組613例：

健康志愿者非結(jié)核其它肺部疾病

臨床診斷性能診斷性能指標結(jié)果（95%CI）敏感性83.3%[79.9%-86.7%]特異性85.6%[82.8%-88.4%]準確度84.6%[82.5%-86.7%]陽性預(yù)測值81.7%[78.2%-85.2%]陰性預(yù)測值86.9%[84.2%-89.6%]陽性似然比5.8[4.8-7.1]陰性似然比0.2[0.16-0.24]疾病類型例數(shù)A.TB

陽性陰性艾滋病感染者合并活動性結(jié)核88(100%)

0(0%)

糖尿病合并活動性結(jié)核1312(92.3%)

1(7.7%)

類風濕合并活動性結(jié)核54(80%)

1(20%)

結(jié)核性胸膜炎同時服用免疫抑制劑97(77.8%)

2(22.2%)

合計3531(88.6%)

4(11.4%)

A.TB臨床診斷數(shù)據(jù)-2樣本要求新鮮采集的肝素鈉抗凝全血每份樣本不得少于3ml樣本常溫（15-25℃）保存，不得冷凍或冷藏樣本采集后

16小時內(nèi)進行前處理（抗原刺激）A.TBTM操作過程陰性刺激劑陽性刺激劑A.TB刺激劑樣本采集：3ml新鮮全血，肝素鈉抗凝37℃16小時內(nèi)運輸常溫22-24小時血漿收獲標準曲線制備、樣品檢測450nm讀數(shù)37℃第一步：樣本的刺激第二步：ELISA定量IFN-γNPTNPT0.5小時約3小時樣本的刺激和孵育A.TBTM報告單姓名年齡性別ID號科別診斷樣本

樣本號檢測項目測定結(jié)果單位計算公式T/P參考范圍提示混合淋巴細胞培養(yǎng)+干擾素（P）9.86IU/ml0.24

＜0.6陰性（-）混合淋巴細胞培養(yǎng)+干擾素（T）2.34IU/ml備注：患者樣本經(jīng)結(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)編碼的全抗原刺激后，特異性釋放的γ-干擾素水平為

2.34IU/ml；非特異釋放的γ-干擾素水平為

9.86IU/ml；兩者的比值為：

0.24；是否為活動性結(jié)核，請結(jié)合臨床進行判斷。N值體現(xiàn)的是機體的本底干擾素水平P值體現(xiàn)的是整體的機體免疫水平是否正常T值體現(xiàn)的是機體內(nèi)T淋巴細胞對結(jié)核桿菌特異性抗原刺激的反應(yīng)

交叉反應(yīng)性

以IL-1β，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，GM-CSF等

9種細胞因子作為干擾物在反應(yīng)體系中的濃度與-干擾素的濃度相當或為-干擾素濃度的2-4倍時，無明顯交叉反應(yīng)性。

干擾樣本對檢測的影響溶血：游離血紅蛋白濃度達156.6-683.9μg/ml時，對本產(chǎn)品的檢測結(jié)果未見顯著影響脂血：甘油三酯水平最高達9.35mmol/L對本產(chǎn)品的檢測結(jié)果沒有顯著影響類風濕：類風濕因子11.3-79.6U/ml，C反應(yīng)蛋白為96.3-245.9mg/L時對檢測結(jié)果沒有明顯影響免疫抑制劑：腎上腺皮質(zhì)激素類免疫抑制劑強的松（血藥濃度32.1-75.1ng/ml）對本產(chǎn)品的檢測結(jié)果沒有影響；大環(huán)內(nèi)脂類免疫抑制劑FK506患者的樣本不推薦用本產(chǎn)品檢測

20應(yīng)用前景公共