TZJATA 0011-2022 土壤有機(jī)酸（甲酸、乙酸、丙酸、丙烯酸）的測定 高效液相色譜法

ICS13.080.10CCSZ22 ZJATA浙 江 測 試 團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/ZJATA0011—2022）Soil-Determinationoforganicacids(formicacid,aceticacid,propionicacid,acrylicacid)-Highperformanceliquidchromatography2022-08-08發(fā)布 2022-09-08實(shí)施浙 江 省 分 析 測 試 協(xié) 會 發(fā) 布T/ZJATA0011T/ZJATA0011—2022II前?? 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和HJ168-2020《環(huán)境監(jiān)測分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由浙江省分析測試協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：中煤浙江檢測技術(shù)有限公司（浙江煤炭地質(zhì)勘查院）。（三河江格臨檢測股份有限公司。T/ZJATA0011T/ZJATA0011—2022PAGEPAGE7土壤有機(jī)酸(甲酸、乙酸、丙酸、丙烯酸)的測定高效液相色譜法范圍本文件規(guī)定了測定土壤中有機(jī)酸（甲酸、乙酸、丙酸、丙烯酸）的高效液相色譜法。本文件適用于土壤中甲酸、乙酸、丙酸和丙烯酸的測定。當(dāng)取樣量為10g，浸提液體積為50mL時(shí)，甲酸的方法檢出限為20mg/kg為30mg/kg，丙烯酸的方法檢出限為0.2mg/kg。規(guī)范性引用文件其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ613土壤干物質(zhì)和水分的測定重量法HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范原理（儀進(jìn)行分離檢測，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。試劑或材料4.1 甲酸（CH2O2），純度≥99.5%；4.2 乙酸（C2H4O2），純度≥99.5%；4.3 丙酸（C3H6O2），純度≥99.5%；4.4 丙烯酸（C3H4O2），純度≥99.5%；4.5 磷酸（H3PO4），AR；4.6 磷酸水溶液（v/v=0.04%）；移取0.4mL磷酸（4.5）到1000mL容量瓶中，用水稀釋定容至標(biāo)線。乙腈（CH3CN）:液相色譜純；甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液:ρ（CH2O2）=10000mg/L；準(zhǔn)確稱取溶于少量水后移入100mL乙酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液:ρ（C2H4O2）=10000mg/L；準(zhǔn)確稱取溶于少量水后移入100mL丙酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液:ρ（C3H6O2）=10000mg/L；準(zhǔn)確稱取1.00g（1.01mL）丙酸（4.3），溶于少量水后移入100mL容量瓶中，用水稀釋定容至標(biāo)線，轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，4℃以下冷藏，可保存兩個(gè)月。亦可購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。丙烯酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液:ρ（C3H4O2）=1000mg/L；準(zhǔn)確稱取1.00g（0.950mL）丙烯酸（4.4），溶于少量水后移入1000mL容量瓶中，用水稀釋定容至標(biāo)線，轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，4℃以下冷藏，可保存兩個(gè)月。亦可購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。有機(jī)酸混合標(biāo)準(zhǔn)使用液:甲酸、乙酸、丙酸ρ=1000mg/L，丙烯酸ρ=10mg/L；分別移取10.00mL甲酸(4.8)、乙酸(4.9)和丙酸(4.10)標(biāo)準(zhǔn)貯備液以及1.00mL丙烯酸(4.11)標(biāo)準(zhǔn)貯備液至100mL容量瓶中，用水稀釋定容至標(biāo)線。4.13 石英砂：20目~100目；置于馬弗爐中400℃烘烤4h，冷卻后裝入具塞磨口玻璃瓶中密封保存。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：具備紫外檢測器；色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（C18）5.0μm250mm4.6mmC18反相色譜柱或其他等效色譜柱；0.01g；150~250次/min；0.45μm；提取瓶：250mL，具聚四氟乙烯-硅膠襯墊螺旋蓋的棕色玻璃瓶；一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。樣品按照HJ/T166的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行土壤樣品的采集和保存。樣品應(yīng)于潔凈的具塞磨口棕色玻璃瓶中保存。運(yùn)輸過程中應(yīng)密封、避光、4℃以下冷藏。運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室后，若不能及時(shí)分析，應(yīng)于4℃以下冷藏、避光、密封保存，6d內(nèi)完成提取。提取液4℃以下冷藏、避光、密封保存，20d內(nèi)完成分析。樣品的制備（10g（精確到0.01g）613測定土壤樣品的干物質(zhì)含量。在裝有樣品的提取瓶中，根據(jù)樣品的干物質(zhì)含量，按固液比1:5（kg/L）加入純水，密封，置于水平振蕩器中，以200次/min的頻率振蕩提取30min，靜置約30min自然沉降，用帶有水系微孔濾膜針筒過濾器的一次性注射器將上清液過濾至進(jìn)樣瓶內(nèi)，待測。測定步驟參考色譜條件流動相：5%乙腈+95%磷酸水溶液(v/v=0.04%)，等度洗脫，保持15min。檢測波長：205nm。流動相流速：1.0mL/min。柱溫：40℃。進(jìn)樣量：10μL。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立分別準(zhǔn)確移取0mL、2.00mL、5.00mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL和25.0mL混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（4.12）于一組100mL容量瓶中，用水稀釋定容至標(biāo)線，混勻。標(biāo)準(zhǔn)系列參考質(zhì)量濃度見表1。按照參考色譜條件（7.1），由低濃度到高濃度依次測定。以目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)化合物的峰高或者峰面積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線?？筛鶕?jù)被測樣品中目標(biāo)離子的濃度水平選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度范圍。表1標(biāo)準(zhǔn)系列參考質(zhì)量濃度單位為毫克每升目標(biāo)化合物名稱1234567甲酸020.050.0100150200250乙酸020.050.0100150200250丙酸020.050.0100150200250丙烯酸00.200.501.001.502.002.50參考色譜圖圖1為本文件規(guī)定的色譜條件下，四種有機(jī)酸的標(biāo)準(zhǔn)參考色譜圖。圖1有機(jī)酸（甲酸、乙酸、丙烯酸、丙酸）的標(biāo)準(zhǔn)參考色譜圖按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立（7.2）10μl待測樣品注入高效液相色譜儀中進(jìn)行（或峰面積稀釋后測定，同時(shí)記錄稀釋倍數(shù)D。用石英砂（4.13）代替實(shí)際樣品，按照與樣品制備（6.2）相同的條件和步驟制備空白試樣。結(jié)果計(jì)算與表示根據(jù)目標(biāo)化合物的保留時(shí)間定性，必要時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法輔助定性。土壤中目標(biāo)化合物含量W，按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算。??×??×??W=??×??????

………（1）式中：W——土壤中有機(jī)酸的質(zhì)量濃度，單位為毫克每公斤（mg/kg）；ρ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得試樣中目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V——提取劑總體積，單位為毫升（mL）；D——稀釋倍數(shù)；m——土壤樣品稱樣量，單位為克（g）；Wdm——土壤樣品干物質(zhì)含量，%。100mg/kg100mg/kg時(shí)，保留三位有效數(shù)字。當(dāng)丙烯酸測定結(jié)果小于10mg/kg等于10mg/kg時(shí)，保留三位有效數(shù)字。精密度和準(zhǔn)確度精密度7家實(shí)驗(yàn)室分別對含甲酸（100mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg）、乙酸（100mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg）（100mg/kg500mg/kg和1000mg/kg）和丙烯酸（1.0mg/kg5.0mg/kg和10.0mg/kg）的有機(jī)酸類化合物土壤加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定。甲酸實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%~5.2%、1.2%~6.0%、1.4%~9.9%，實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.%2.2%5.1%7g/kg40/kg19m/g9g/kg46/kg、185mg/kg。0.5%~6.5%0.9%~7.9%別為5.%3.%2.%1m/g52m/g15m/g17/k70/kg、151mg/kg。丙酸實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%~7.3%、0.7%~6.6%、0.5%~9.6%，實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.9%、0.9%、1.2%，重復(fù)性限分別為13mg/kg、40mg/kg、108mg/kg，再現(xiàn)性限分別為13mg/kg、39mg/kg、104mg/kg。0.7%~5.2%1.0%~7.7%分別為3.%1.308%0.08/k0.45m/g1.21/kg0.11/kg、0.45mg/kg、1.13mg/kg。準(zhǔn)確度7家實(shí)驗(yàn)室分別對甲酸（加標(biāo)量為1000μg、5000μg和10000μg）、乙酸（加標(biāo)量為1000μg、5000μg和10000μg）、丙酸（加標(biāo)量為1000μg、5000μg和10000μg）和丙烯酸（加標(biāo)量為10μg、50μg和100μg）的有機(jī)酸類化合物土壤加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定。甲酸的加標(biāo)回收率分別為88.2%~95.3%、88.9%~94.7%、91.2%~104%，加標(biāo)回收率最終值分別為91.3%±5.0%、91.4%±4.4%、94.7%±10.2%。乙酸的加標(biāo)回收率分別為92.7%~107%、96.0%~108%、97.5%~104%，加標(biāo)回收率最終值分別為102%±10.2%、101%±7.4%、101%±4.2%。丙酸的加標(biāo)回收率分別為92.7%~98.0%、99.3%~102%、99.2%~103%，加標(biāo)回收率最終值分別為95.1%±3.8%、101%±1.8%、101%±2.4%。丙烯酸的加標(biāo)回收率分別為88.1%~96.8%、94.7%~98.4、96.8%~99.4%，加標(biāo)回收率最終值分別為92.9%±6.0%、96.9%±2.6%、98.2%±1.6%。質(zhì)量保證與控制空白分析每批樣品至少分析一個(gè)實(shí)驗(yàn)室空白，其目標(biāo)物的測定結(jié)果應(yīng)低于方法檢出限。曲線要求標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.999，否則應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣/批）至少分析1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度點(diǎn)，其測定值與標(biāo)準(zhǔn)值相對誤差應(yīng)為±5%，否則應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。平行樣測定每20（少于20個(gè)樣/批至少測定1≤100mg/kg時(shí)，平行測定結(jié)果的相對偏差不大于20%，土壤中甲酸、乙酸和丙酸的含量>100mg/kg時(shí),平行測定結(jié)果的相對偏差不大于10%;土壤中丙烯酸的含量≤1.0mg/kg時(shí)，平行測定結(jié)果的相對偏差不大于土壤中丙烯酸的含量>1.0mg/kg時(shí),10%。加標(biāo)回收率控制每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣/批）至少測定1個(gè)基體加標(biāo)樣，回收率應(yīng)為80~120%之間。廢物處理實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的廢物應(yīng)集中分類收集保管，粘貼明顯標(biāo)識，委托具有資質(zhì)的單位統(tǒng)一處置。附錄A（資料性附錄）方法的精密度和準(zhǔn)確度匯總表7家實(shí)驗(yàn)室分別對三種不同濃度的加標(biāo)樣品進(jìn)行了測定。精密度和準(zhǔn)確度匯總數(shù)據(jù)見附表A.1和附表A.2。A.1名稱CAS號有機(jī)酸化合物濃度mg/kg實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差%實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差%重復(fù)性限mg/kg再現(xiàn)性限mg/kg甲酸64-18-61000.6~5.22.5795001.2~6.02.2404610001.4~9.95.1139185乙酸64-19-71000.5~6.55.110175000.9~7.93.7527010000.5~132.1152151丙烯酸79-10-71.00.7~5.23.00.080.115.01.0~7.71.30.450.4510.00.7~110.81.211.13丙酸79-09-41000.6~7.31.913135000.7~6.60.9403910000.5~9.61.2108104A.2名稱CAS號標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加標(biāo)量μg有機(jī)酸化合物濃度mg/kg加標(biāo)回收率范圍%加標(biāo)回收率最終值%P2SP甲酸64-18-6100010088.2~95.391.3±5.0500050088.9~94.791.4±4.410000100091