中藥制劑中各類化學(xué)成分分析

章

中藥制劑中各類化學(xué)成分分析

藥物分析教研室2020/12/181第一節(jié)生物堿類成分分析生物堿是生物界除生物體必須的含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和B族維生素等）之外的所有含氮有機(jī)化合物，因其結(jié)構(gòu)中氮原子上的未共享電子對而大多具有堿性。生物堿絕大多數(shù)具有顯著的生物活性,因此中藥制劑中有含有生物堿類成分的中藥時，常選擇該中藥含有的生物堿成分作為定性定量的依據(jù)。2020/12/182一、生物堿類成分的主要性質(zhì)及分析特征1、結(jié)構(gòu)特征生物堿大多由C、H、N、O元素組成，極少數(shù)分子中尚含有其他元素；大多結(jié)構(gòu)復(fù)雜，結(jié)構(gòu)類型較多.結(jié)構(gòu)中的氮原子有多種形式：脂氮、芳氮；季胺、叔胺、仲胺及伯胺；游離狀態(tài)和與酸結(jié)合狀態(tài)；還有以氮氧配位鍵形式存在的。此外，結(jié)構(gòu)中除烷烴、羥基取代外還有羧基、酚羥基等酸性官能團(tuán)及酯鍵的取代。2020/12/1832、理化性質(zhì)（1）物理性狀多數(shù)生物堿為結(jié)晶型固體，少數(shù)為無定型粉末，還有一些小分子生物堿為液體，例如檳榔堿、菸堿等；液體狀的生物堿及個別小分子生物堿尚有揮發(fā)性甚至升華性，如麻黃堿具有揮發(fā)性、咖啡因具有升華性等。一般生物堿為無色或白色，但結(jié)構(gòu)中具有較長共軛體系，并有助色團(tuán)的，可顯不同顏色。生物堿結(jié)構(gòu)中如有手性碳原子或為手性分子的具有旋光性，并大多與生物堿的生理活性有關(guān)，通常左旋體比右旋體生理活性強(qiáng)。

2020/12/184（2）溶解性由于生物堿結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生物堿的溶解性也是多樣化。大多數(shù)生物堿成分極性較小，游離狀態(tài)下難溶于水，易溶氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有機(jī)溶劑，與酸結(jié)合生成生物堿鹽后水溶性增加，但與生物堿結(jié)合的酸不同，生成的鹽水溶性也有差異，一般含氧無機(jī)酸及小分子有機(jī)酸的生物堿鹽水溶性較大。2020/12/185季銨型生物堿、有氮氧配位鍵的生物堿易溶于水，液體生物堿及一些小分子固體生物堿則既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑。含有酸性官能團(tuán)或酯鍵的生物堿還可溶于一些堿液或熱苛性堿液。2020/12/186（3）沉淀反應(yīng)大多數(shù)生物堿在酸性水溶液中可以與某些試劑生成不溶于水的復(fù)鹽或分子復(fù)合物，這些試劑稱生物堿沉淀試劑。生物堿的沉淀試劑根據(jù)其組成有碘化物復(fù)鹽、重金屬鹽和大分子酸三大類。生物堿的沉淀反應(yīng)可以檢查中藥制劑中生物堿的存在，當(dāng)某些沉淀試劑與生物堿生成的沉淀組成恒定時，還可以用于中藥制劑中生物堿成分的含量測定。2020/12/187（4）顯色反應(yīng)生物堿與一些濃無機(jī)酸為主的試劑反應(yīng)產(chǎn)生不同的顏色，這些呈色反應(yīng)多用于檢識和區(qū)別純品生物堿，而較少用于中藥制劑中生物堿成分的分析。生物堿在一定pH條件下可與一些酸性染料（多為磺酸肽類）生成有色絡(luò)合物，可被氯仿等有機(jī)溶劑定量提出.還有些結(jié)構(gòu)中具有酯鍵的酯堿如烏頭堿等可與異羥肟酸鐵試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色，這些特點可用于中藥制劑中生物堿成分的分析。2020/12/188（5）堿性大多數(shù)生物堿呈堿性反應(yīng)，能使紅色石蕊試紙變藍(lán)。生物堿之所以能顯堿性，是因為它們分子中氮原子上的孤電子對對質(zhì)子有一定程度的親和力，因而表現(xiàn)出堿性。（6）紫外光譜特征結(jié)構(gòu)中具有共軛體系的生物堿均有紫外吸收，其中包括結(jié)構(gòu)母核即為共軛體系的和只有部分結(jié)構(gòu)為共軛系統(tǒng)的。紫外光譜的吸收峰位置除與其他化合物一樣與共軛系統(tǒng)中助色團(tuán)的種類、位置、數(shù)量有關(guān)外，需要特別指出的是，結(jié)構(gòu)中的氮原子與發(fā)色團(tuán)直接連接或參與發(fā)色團(tuán)的生物堿，其吸收峰位置還與測定時溶劑的pH有關(guān)。2020/12/189二、生物堿類成分分析方法1、單體生物堿分析（1）定性鑒別沉淀反應(yīng)是生物堿理化鑒別常用方法，主要利用生物堿能與一些試劑生成沉淀這一特性。此反應(yīng)一般在酸性水溶液中進(jìn)行。2020/12/1810（2）單體生物堿的含量測定①薄層色譜法此法簡便、快捷。選用的吸附劑、展開劑及顯色方法與鑒別嚴(yán)格，但比鑒別嚴(yán)格。

②高效液相色譜法可用液-液分配色譜法、液-固吸附色譜法以及離子交換色譜法。

③氣相色譜法2020/12/18112、中藥中生物堿分析

（1）總堿分析①定性鑒別由于中藥制劑中成分復(fù)雜，有些成分如蛋白質(zhì)、多肽和鞣質(zhì)等也可與試劑生成沉淀而造成假陽性結(jié)果，因此，制備樣品供試液時必須凈化處理，除去干擾成分，方能用沉淀反應(yīng)進(jìn)行中藥制劑中生物堿類成分的鑒別.②總生物堿的含量測定化學(xué)分析法化學(xué)分析法包括重量分析法和容量分析法。目前主要使用酸堿滴定法。

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強(qiáng)堿滴定生物堿鹽時,在70%-90%的乙醇介質(zhì)中終點比在水中明顯,因此常將生物堿鹽溶于90%乙醇,再用標(biāo)準(zhǔn)堿乙醇液滴定.

酸堿滴定法指示反應(yīng)終點可用指示劑和各種電位法。分光光度法目前多用單波長光度法，測定波長可選用待測生物堿成分本身的吸收波長，也可加入某些試劑如亞硝酸鈉試劑、雷氏鹽試劑及酸性染料等反應(yīng)顯色后用可見光波測定。常用方法：直接測定、離子對萃取比色法2020/12/1813直接測定不經(jīng)過化學(xué)反應(yīng),利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)行比色測定的方法;

一般用于藥味較少、干擾不大的中藥制劑中總生物堿的含量測定;離子對萃取比色法酸性染料比色法應(yīng)用本法的關(guān)鍵在于介質(zhì)的pH、酸性染料的種類和有機(jī)溶劑的選擇;

常用的酸性染料有甲基橙、溴麝香草酚蘭（BTB）和溴甲酚綠等；

PH的選擇要根據(jù)染料的性質(zhì)及生物堿的堿性(pKa)大小來確定;

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選擇有機(jī)溶劑的原則是根據(jù)離子對與有機(jī)相能否形成氫鍵以及形成氫鍵能力的強(qiáng)弱而定.

氯仿、二氯甲烷與離子對形成氫鍵,有中等程度的提取率,且選擇性也較好,故是常用的提取溶劑.高效液相色譜法以反相高效液相色譜應(yīng)用較多。在反相高效液相色譜中,由于硅膠表面殘留硅醇基的影響,使生物堿分析易產(chǎn)生保留時間延長、峰形變寬、拖尾.可采取改進(jìn)流動相、固定相等措施以克服游離硅醇基的影響,滿足定量定量分析的要求.

中藥制劑中生物堿成分時行高效液相色譜法測定時,使用較多的是紫外檢測器.2020/12/1815氣相色譜法只適用于有揮發(fā)性的、遇熱不分解的生物堿類;

生物堿鹽在急速加熱過程中產(chǎn)生的酸對色譜柱和檢測器不利,應(yīng)該注意;

制備供試品溶液時一般應(yīng)采用冷提取,凈化過程也要避免加熱,以防成分流失,最后需用氯仿等低極性有機(jī)溶劑為溶媒制備成供試液.2020/12/1816（2）各生物堿組分分析根據(jù)總生物堿中各生物堿的性質(zhì)差異，如堿性差異、極性差異。通常采用色譜法對每種生物堿進(jìn)行分離后分析2020/12/18173、應(yīng)用示例戊已丸中生物堿的含量測定處方組成：黃連、吳茱萸（制）、白芍（炒）。取本品粉末（過三號篩）0.7-0.9g，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100）適量，加熱回流至提取液無色，提取液濃縮后移至25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml，置氧化鋁柱（內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用乙醇30ml預(yù)洗）上，用乙醇35ml洗脫。收集洗脫液，置50ml量瓶中，加乙醇稀釋到刻度，搖勻，照分光光度法，在345nm處測定吸收度，按鹽酸小糪堿的吸收系數(shù)728計算，即得。本品按干燥品計算，每1g含生物堿以鹽酸小糪堿(C20H18ClNO4)計，不得少于30mg。

2020/12/1818第二節(jié)蒽醌類成分分析一、概述中藥中醌類化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類型。其中以蒽醌類化合物最為多見，包括蒽醌及其不同還原程度的產(chǎn)物和二聚物，如蒽酚、氧化蒽酚、蒽酮、二蒽酮、二蒽醌等。這些化合物在中藥中可游離存在，也可與糖結(jié)合成苷，稱為蒽苷。2020/12/1819二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)1、結(jié)構(gòu)類型及特征苯醌類苯醌類化合物從結(jié)構(gòu)上可分為鄰苯醌及對苯醌兩大類。因前者不穩(wěn)定，故天然存在的苯醌化合物多為對苯醌的衍生物，且在醌核上多有-OH、-OCH3、-CH3等基團(tuán)或更長的烴類側(cè)鏈。

對苯醌鄰苯醌2020/12/1820萘醌類萘醌化合物從結(jié)構(gòu)上考慮可以有α(1,4)、β(1,2)及amphi(2,6)三種類型。但迄今為止從自然界得到的幾乎均為α-萘醌類。

α-（1，4）萘醌β-（1，2）萘醌amphi-(2,6)萘醌菲醌類天然菲醌衍生物包括鄰醌（A）及對醌（B）兩種類型。（A）（B）2020/12/1821蒽醌類蒽醌類成分包括蒽醌衍生物及其不同還原程度的產(chǎn)物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚物等。蒽醌氧化蒽酚蒽酮蒽酚2020/12/18222、理化性質(zhì)（1）溶解性苯醌及萘醌多以游離狀態(tài)存在；而蒽醌類則往往結(jié)合成苷存在于植物體中；游離的醌類多具有升華性；小分子的苯醌及萘醌類具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾，可據(jù)此進(jìn)行提取、精制工作。游離醌類多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有機(jī)溶劑，微溶于或不溶于水。結(jié)合成苷后極性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在熱水中也可溶解，幾乎不溶于乙醚、苯、氯仿等非極性溶劑中。2020/12/1823（2）酸堿性蒽醌類化合物分子中多具有酚羥基，故具有一定酸性，在堿性水溶液中易溶，但加酸酸化時又可重新沉淀析出，所謂堿提取—酸沉淀即是根據(jù)這個道理進(jìn)行的。根據(jù)以上性質(zhì)，醌類化合物的提取可采用堿提取-酸沉淀法。

2020/12/1824（3）顯色反應(yīng)醌類的顏色反應(yīng)主要取決于其氧化還原性質(zhì)以及存在的酚羥基的性質(zhì)。堿性條件下的呈色反應(yīng)：羥基蒽醌類在堿性溶液中會引起顏色改變并加深。與金屬離子的反應(yīng)：在蒽醌類化合物結(jié)構(gòu)中，如果有α-酚羥基或具有鄰位二酚羥基時，則可與Pb2+、Mg2+等金屬離子形成絡(luò)合物。與Pb2+形成的絡(luò)合物在一定pH條件下能沉淀析出，故可用于該化合物的精制。與對亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)：9位或10位未取代的羥基蒽酮類化合物，尤其是1，8-二羥基衍生物，酮基對位的亞甲基上的氫很活潑，可與對亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)，縮合產(chǎn)生各種顏色。2020/12/1825三、定性鑒別1、顯色反應(yīng)將中藥制劑用適當(dāng)方法提取分離，制成供試品液，利用堿性條件下的呈色反應(yīng)或醋酸鎂顯色反應(yīng)等可對羥基蒽醌類成分進(jìn)行鑒別。2、升華法游離的蒽醌及其他醌類衍生物多具有升華性。中藥制劑中如含有這類成分量較大，可采用升華法得到升華物，可見光下觀察或加堿性試液顯色定性。如大黃流浸膏的鑒別。2020/12/18263、薄層鑒別（1）吸附劑：多用硅膠（2）展開劑：A：乙酸乙酯-甲醇-水（100：16.5：13.5或相近的比例），適于他離蒽醌苷元和蒽醌苷。B：正丙醇-乙酸乙酯-水（4：4：3）和異丙醇-乙酸乙酯-水（9：9：4），適于分離番瀉苷和二蒽酮苷C：不含水或甲醇的混合溶媒適合于他離蒽醌類的苷元。（3）顯色方法：主要有噴堿性試劑或醋酸鎂甲醇液、氨氣熏及在紫外燈下觀察熒光，亦可在可見光下直接觀察色斑。2020/12/1827四、含量測定蒽醌類成分含量測定1、游離蒽醌的測定中藥中含有游離蒽醌的量一般不高，且為脂溶性的，故此部分另用弱極性溶劑如乙醚、氯仿等提取后加堿比色測定。2、結(jié)合蒽醌的測定通常是取游離蒽醌測定項下的藥渣將苷提出，水解成苷元后再測定；將藥渣先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定；取待測樣品先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定，其結(jié)果為總蒽醌含量，從中減去游離蒽醌含量，即得結(jié)合蒽醌的含量。2020/12/18283、蒽醌類單體成分的測定中藥制劑中蒽醌類單體成分的測定一般要將樣品水解后再進(jìn)行測定，測定方法主要有薄層掃描法和高效液相色譜法。薄層掃描法為蒽醌類成分常用定量分析方法，經(jīng)層析分離后，可在可見光、紫外光及熒光下掃描測定。蒽醌類成分在紫外及可見光下均有強(qiáng)吸收，利用高效液相色譜-紫外可見光檢測器測定蒽醌類單體成分，具有靈敏、準(zhǔn)確、簡便等特點。在含蒽醌類化合物的中藥制劑分析中應(yīng)用日趨增多。2020/12/1829第三節(jié)黃酮類成分分析一、概述黃酮類化合物（flavonoids）是廣泛存在于自然界的一大類化合物。多具有顏色，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。黃酮類化合物最集中的是被子植物，類型最全，結(jié)構(gòu)最復(fù)雜，含量也高。由這些中藥參與配伍的中藥制劑也較多見。2020/12/1830二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)1、結(jié)構(gòu)特征黃酮類化合物是指基本母核為2-苯基色原酮類化合物，現(xiàn)在則是泛指兩苯環(huán)通過中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。根據(jù)基本結(jié)構(gòu)又可分為黃酮、黃酮醇、雙黃酮、異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇、查耳酮、橙酮、花青素、黃烷等類型。多數(shù)黃酮結(jié)構(gòu)中存在有桂皮?；氨郊柞；M成的交叉共軛體系，故在200-400nm波長區(qū)域內(nèi)有強(qiáng)烈的吸收帶，此是光譜法及色譜—光譜法分析的基礎(chǔ)。大多黃酮及其苷類含有游離酚羥基，可與聚酰胺形成氫鍵，可用聚酰胺色譜法進(jìn)行分析。

2020/12/18312、理化性質(zhì)（1）物理性狀黃酮類化合物多為晶性固體，少數(shù)（如黃酮苷）為無定形粉末。

游離的苷元中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷及黃烷醇有旋光性外，其余則無。苷類由于在結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，故均有旋光性，且多為左旋。2020/12/1832（2）溶解度黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或苷元，單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差異。游離苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中。黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑中，但難溶或不溶于苯、氯仿等。2020/12/1833（3）酸堿性酸性：黃酮類化合物因分子中多有酚羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。堿性氧原子的性質(zhì)黃酮類化合物分子中γ-吡喃酮環(huán)上的1-位氧原子，因有未共用的電子對，故表現(xiàn)出微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸，如濃硫酸、鹽酸等生成鹽，常表現(xiàn)出特殊的顏色，可用于鑒別。生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。

2020/12/1834（4）顯色反應(yīng)還原反應(yīng)：與鹽酸—鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)，金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)：黃酮類化合物分子中多有下列結(jié)構(gòu)，故常可與鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物。

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鋁鹽：常用試劑為1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液。生成的絡(luò)合物多為黃色（λmax=415nm）,并有熒光，可用于定性及定量分析。鉛鹽：常用1%醋酸鉛及堿式醋酸鉛水溶液，可生成黃至紅色沉淀。據(jù)此不僅可用于鑒定，也可用于提取及分離工作。鋯鹽：多用2%二氯氧化鋯甲醇溶液。黃酮類化合物分子中有游離的3-或5-OH存在時，均可反應(yīng)生成黃色的鋯絡(luò)合物。但兩種鋯絡(luò)合物對酸的穩(wěn)定性不同，當(dāng)反應(yīng)液中接著加入枸櫞酸后，5-羥基黃酮的黃色溶液顯著褪色，而3-羥基黃酮溶液的呈鮮黃色（鋯—枸櫞酸反應(yīng)）。2020/12/1836（5）紫外光譜特征黃酮類由于具有2-苯基色原酮的基本結(jié)構(gòu)，具有特定的紫外吸收峰，常有兩個較強(qiáng)的吸收帶，I帶在300—400nm范圍內(nèi)，它是由于B環(huán)桂皮?；鸬?，Ⅱ帶為240—285nm范圍內(nèi)，它是由于A環(huán)上的苯甲?；鸬?。黃酮類化合物當(dāng)加入一些位移試劑如甲醇鈉、醋酸鈉、氯化鋁等，可使最大吸收波長發(fā)生位移，選擇性提高，還可消除雜質(zhì)的干擾，有利于含量測定。2020/12/1837三、定性鑒別1、顯色反應(yīng)黃酮類化合物的顏色反應(yīng)多與分子中的酚羥基及γ-吡喃酮環(huán)有關(guān)。常用鹽酸-鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)與金屬鹽類試劑的配合反應(yīng)黃酮類化合物分子中有游離的3-OH、5-OH或鄰二酚羥基時可與Al3+、Zr4+、Pb2+、Sr2+等形成絡(luò)合物，這些絡(luò)合物有的產(chǎn)生熒光或顏色加深（如Al3+、Zr4+），有的產(chǎn)生沉淀（如Pb2+、Sr2+）

2020/12/18382、色譜鑒別

吸附劑：硅膠、聚酰胺；硅膠色譜分離弱極性化合物較好；聚酰胺色譜他離含游離酚羥游離羥基的黃酮及其苷為佳；纖維素薄層則適用于分離多糖苷混合物；顯色反應(yīng)：采用在紫外光下觀察熒光和噴顯色劑相配合的方法。2020/12/1839

四、黃酮類成分定量分析 中藥制劑中如含有黃酮類成分，可根據(jù)要求測定制劑中的總黃酮含量、黃酮類單體成分的含量或二者同時測定。直接測定:

黃酮類化合物具有特定的紫外吸收峰,含黃酮類化合物的原料藥及部分制劑經(jīng)一定的提取純化后,可直接于最大吸收波長處測定其吸收度,以蘆丁等為對照品計算其含量.

顯色測定:

黃酮類化合物顯色以后顯色物與背景最大吸收波長差別較大,可消除背景(即陰性空白)的干擾,以提高本法的選擇性及靈敏度.常用鋁鹽作顯色試劑.2020/12/1840五、黃酮類單體成分的含量測定1、薄層色譜法樣品經(jīng)有機(jī)溶劑或水提取后，可用硅膠、纖維素或聚酰胺進(jìn)行層析，達(dá)到分離目的。層析后可將含有待測組分的色斑刮下，再用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摵?，用紫?可見分光光度法測定。更常用的是薄層掃描儀（單波長或雙波長法）直接在薄層板上掃描測定。

2020/12/18412、高效液相色譜法由于黃酮類化合物在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，使用HPLC法檢測靈敏度較高，故該法在黃酮類單體成分的定量分析中最常用。黃酮類成分的HPLC條件他為正相和反相色譜兩類，反相色譜應(yīng)用較多。反相色譜測定多有C18鍵合相固定液，流動相常用甲醇-水-乙酸（或磷酸緩沖液）及乙腈-水。檢測器主要采用紫外檢測器或熒光檢測器。2020/12/1842應(yīng)用示例雙黃連口服液中黃芩苷的含量測定處方組成：金銀花、黃芩、連翹1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（50：50：1）為流動相；檢測波長274nm。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1500.2、對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含黃芩苷0.1mg）。2020/12/18433、供試品溶液的制備：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20min，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。4、測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每支含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計，不得少于80mg。2020/12/1844第四節(jié)皂苷類成分分析

一、概述三萜是由30個碳原子組成的萜類化合物，大多數(shù)三萜化合物均可看作由6個異戊二烯單位聯(lián)結(jié)而成。游離三萜類化合物通常多不溶于水，而與糖結(jié)合成苷后，則大多可溶于水，振搖后可生成膠體溶液，并有持久性似肥皂溶液的泡沫，故有三萜皂苷之稱。

2020/12/1845二、理化性質(zhì)溶解度可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇、熱甲醇和熱乙醇中，幾乎不溶于或難溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑。在含水丁醇或戊醇中溶解度較好，且又能與水分成二相，可利用此性質(zhì)從水溶液中用正丁醇或戊醇提取皂苷，借以與親水性的糖、蛋白質(zhì)等分離。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑，而不溶于水。2020/12/1846顯色反應(yīng)醋酐-濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）；五氯化銻反應(yīng)(Kahlenberg反應(yīng))；三氯醋酸反應(yīng)(Rosen-Heimer反應(yīng))；冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)(Tschugaeff反應(yīng))；氯仿-濃硫酸反應(yīng)(Salkowski反應(yīng))。2020/12/1847三、定性鑒別：理化鑒別泡沫反應(yīng)：多用于檢驗含有皂苷的原料藥；化學(xué)顯色反應(yīng)：僅在組成藥物較少的中藥制劑中使用。薄層色譜法由于皂苷類成分大多無明顯的紫外吸收，故經(jīng)薄層色譜分離，然后選用適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色觀察，是皂苷定性鑒別中最常用的方法。三萜皂苷類成分進(jìn)行薄層層析時通常采用硅膠為吸附劑，也有采用氧化鋁、硅藻土等為吸附劑。薄層層析后，可選用三氯醋酸、氯磺酸-醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、三氯化銻、磷鉬酸、濃硫酸-醋酸酐、碘蒸氣等顯色劑進(jìn)行顯色，其中以不同濃度的硫酸乙醇液為最常用。2020/12/1848四、三萜皂苷類成分的定量分析中藥制劑中皂苷類成分的定量分析可分為總皂苷測定、皂苷元測定和單體皂苷測定。1、總皂苷的含量測定（1）提取分離總皂苷的含量測定一般需要用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛?。由于皂苷在極性溶劑中溶解度較大，因此提取溶劑可為各種濃度的甲醇（70%-95%）、乙醇、異丙醇、丁醇、戊醇。提取后經(jīng)分離得到總皂苷成分，分離可用有機(jī)溶劑，如水飽和的正丁醇萃取，也可用大孔吸附樹脂處理后溶劑洗脫。2020/12/1849（2）測定方法重量法該方法主要用于含皂苷的原料藥質(zhì)量控制。在中藥制劑中，如處方中藥味含皂苷類成分較多時，常用正丁醇作溶劑，測定正丁醇浸出物。比色法常用三萜皂苷顯色劑有香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、濃硫酸以及亞甲藍(lán)等。用比色法測定中藥制劑中總皂苷或總苷元的含量時，可選用單體皂苷或皂苷元作對照品，但要注意測定單體皂苷或皂苷元與總皂苷的換算系數(shù)。2020/12/18502、皂苷元的含量測定皂苷元的獲得：得到總皂苷后，加酸（如硫酸、鹽酸）加熱水解，得到皂苷元；將樣品先行水解，再用有機(jī)溶劑從水解后的溶液中提取皂苷元。測定方法：主要有薄層色譜法、高效液相色譜法和比色法。2020/12/18513、三萜皂苷類單體成分含量測定（1）薄層色譜法樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)奶崛?、純化后，用薄層色譜法分離，可排除其他組分的干擾，常用于測定中藥制劑中的皂苷元或單體皂苷，定量方法可采用薄層洗脫—比色法或薄層掃描法。（2）高效液相色譜法大多數(shù)三萜皂苷類成分，如人參皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外區(qū)的末端吸收來檢測，但靈敏度相對要低。若中藥制劑中所含三萜皂苷類成分本身具有較強(qiáng)的紫外吸收，如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷等，可用HPLC分離并用紫外檢測器檢測。蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）用于高效液相色譜法檢測三萜皂苷類成分的應(yīng)用日漸廣泛。

2020/12/1852第五節(jié)揮發(fā)性成分分析

一、概述揮發(fā)性成分是指中藥中一類具有芳香氣并易揮發(fā)的成分，其化學(xué)組成復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油類成分和其他分子量較小、易揮發(fā)的化合物。揮發(fā)油為易流動的油狀液體，具香味和揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾。2020/12/1853二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)1、結(jié)構(gòu)特征揮發(fā)油中成分按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類，可分為萜類化合物、脂肪族化合物及芳香族化合物等。顯色反應(yīng)揮發(fā)油中若含有酚類成分，加入三氯化鐵的乙醇溶液，可產(chǎn)生藍(lán)色、藍(lán)紫色或綠色反應(yīng)；若含有羰基化合物，加入苯肼或苯肼衍生物、羥胺等試劑，可生成結(jié)晶性的衍生物；若含有醛類化合物，加入硝酸銀氨試液，可發(fā)生銀鏡反應(yīng)；若含有內(nèi)酯類化合物，于樣品的吡啶溶液中加入亞硝酰鐵氰化鈉及氫氧化鈉溶液，出現(xiàn)紅色并逐漸消失；若含有不飽和化合物，于樣品中加入溴，紅棕色褪去；若含有奧類衍生物，加入濃硫酸，可產(chǎn)生藍(lán)色或紫色反應(yīng)。

2020/12/18542、薄層色譜法揮發(fā)油成分薄層色譜的條件主要是根據(jù)極性大小加以分離的。油中所含各類化合物的極性順序為：烴（萜）＜醚＜酯＜醛、酮＜醇、酚＜酸因此可試用不同極性的展開劑進(jìn)行分離常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等，其中以硅膠常用常用展開劑為石油醚或正己烷，可使不含氧的烴類成分展開，而含氧化合物一般留在原點。2020/12/1855三、含量測定含量測定可分為總揮發(fā)油和單一成分的測定?？倱]發(fā)油的測定，采用揮發(fā)油測定器，用蒸餾法測定，可分別測定相對密度在1.0以下和1.0以上的揮發(fā)油含量。單一成分測定：主要采用氣相色譜法和薄層色譜法。2020/12/1856第六節(jié)、多糖、有機(jī)酸類成分分析一、多糖的鑒別與含量測定1、多糖的鑒別（1）薄層色譜法多糖可采用酸水解法將其水解成較小片段，然后進(jìn)行薄層色譜鑒別。硅膠色譜，纖維素色譜，硅藻土色譜及氧化鋁色譜。由于糖是多羥基化合物，極性強(qiáng)容易吸附。2020/12/1857采用含有無機(jī)鹽水溶液，如0.3mol/L磷酸二氫鈉水溶液制備硅膠薄層板，使硅膠薄層吸附能力降低，斑點集中，對分離有所改善，樣品承載量顯著提高。

（2）紙色譜法多糖可采用酸水解法將其水解成單糖，然后進(jìn)行紙色譜；也可用某些系統(tǒng)直接將多糖展開。2020/12/18582、多糖的含量測定（1）單體多糖的含量測定單體多糖多采用高效凝膠液相色譜法，以已知分子量的多糖對照品作對照，確定其分子量。再將其酸水解后進(jìn)行高效液相色譜法測定，確定其組成（單糖的種類及比例），以單糖的量推算多糖的量。檢測器多為示差折光檢測器，通常用氨基鍵合硅膠柱分離，但其穩(wěn)定性差，用硅膠柱動態(tài)改性，可避免這一問題。2020/12/1859（2）總多糖的含量測定3.5-二硝基水楊酸（DNS）比色法在堿性溶液中，3.5-二硝基水楊酸與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度呈比例關(guān)系，利用比色法可測定樣品中糖含量。苯酚-硫酸法苯酚-硫酸試劑可與游離的或多糖中的已糖，糖醛酸起顯色反應(yīng)，已糖在490nm波長處，戊糖及糖醛酸在480nm波長處有最大吸收，吸收度與糖含量呈線性關(guān)系。蒽酮-硫酸法糖類與硫酸發(fā)生脫水反應(yīng)，生成糠醛或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生顏色物質(zhì)，反應(yīng)后溶液呈藍(lán)綠色，于620nm波長處有最大吸收，吸收度與多糖含量呈線性關(guān)系。2020/12/1860第七節(jié)其他類型成分分析

一、概述概念：有機(jī)酸按結(jié)構(gòu)可分為三類，即脂肪類、芳香族類和萜類。按羧基數(shù)目可分為單羧基酸、二羧基酸和三羧基酸。二、定性鑒別薄層色譜法吸附劑：常用硅膠、聚酰胺等。展開劑：常用極性較大的溶劑，為防有機(jī)酸展開過程中發(fā)生離解，常在展開劑中加入一定比例的甲酸或乙酸等以消除因解離而產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。顯色劑：常用pH指示劑，如溴甲酚綠、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)、磷鉬酸試劑等。具有熒光的物質(zhì)如綠原酸、阿魏酸等，可不必顯色，在熒光燈下觀察熒光。2020/12/1861三、含量測定酸堿滴定法本法適合于測定總有機(jī)酸類成分，由于中藥中有機(jī)酸類成分酸性弱，在水溶液中滴定突躍不明顯，可用非水溶液滴定法。滴定液顏色較深時，影響觀察滴定終點，采用電位法指示終點。高效液相色譜法芳香族酸類和其他具有紫外吸收的酸類，可用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，如綠原酸、沒食子酸、桂皮酸、丹參素、阿魏酸等。分光光度法可用單波長法、雙波長法、導(dǎo)數(shù)分光光度法測定有機(jī)酸的含量。2020/12/1862四、環(huán)烯醚萜類成分分析1、概述環(huán)烯醚萜：一類特殊的單萜，由二個異戊二烯構(gòu)成，含有10個碳原子，其母核都為環(huán)狀，具有烯鍵和醚鍵，常與糖結(jié)合成苷。溶解性：大多易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇。對酸敏感：成苷后苷鍵易被水解斷裂，苷元結(jié)構(gòu)中C1的羥基和C2位的氧是一個半縮醛結(jié)構(gòu)，化學(xué)性質(zhì)活潑，易發(fā)生進(jìn)一步氧氣化聚合等反應(yīng)，尤其在酸堿作用下更易變化。2020/12/18632、定性鑒別利用薄層色譜可對環(huán)烯醚萜苷類成分進(jìn)行定性鑒別。薄層板：（1）硅膠G；（2）硅膠GF254；（3）聚酰胺薄膜。顯色劑：（1）硫酸乙醇溶液；（2）茴香醛試液；（3）香草醛硫酸試液；（4）對二甲氨基苯甲醛-硫酸溶液。3、含量測定高效液相色譜法：對于有紫外吸收的環(huán)烯醚萜苷類成分可用該項法進(jìn)行分析。薄層掃描法：可用硅膠GF254薄層，檢測熒光熄滅斑點；也可用硅膠G薄層，用顯色劑顯色后測定。分光光度法：利用環(huán)烯醚萜苷與某些試劑的呈色反應(yīng)，于分光光度計上測定吸收度進(jìn)行定量分析。2020/12/1864五、香豆素類成分分析1、概述概念：香豆素是一類內(nèi)酯衍生物，具有芳香氣，分子中苯環(huán)或吡喃酮環(huán)上常有取代基存在，按其基本的環(huán)狀結(jié)構(gòu)形式，分為簡單香豆類、呋喃香豆素類、吡喃香豆素類、其他香豆素類。2、理化性質(zhì)顯色反應(yīng)（1）異羥肟酸鐵反應(yīng)內(nèi)酯環(huán)在堿性條件下開環(huán)，與鹽酸羥胺縮合成異羥肟酸，然后再在酸性條件下與三價鐵離子配合成鹽而顯紅色。2020/12/1865（2）與酚羥基反應(yīng)具有酚羥基取代的香豆素類在水溶液中可與FeCl3試劑產(chǎn)生顏色。若香豆素化合物的C6位上（即酚羥基的對位）沒有取代基，則能與Gibbs試劑反應(yīng)顯藍(lán)色。香豆素類成分在堿性溶液中加熱，使內(nèi)酯環(huán)開裂，若酚羥基對位無取代基，則可與重氮化試劑反應(yīng)生成紅色偶氮染料。2020/12/1866紫外光譜特征化合物的結(jié)構(gòu)中羰基和芳環(huán)形成較強(qiáng)的共軛體系，因此在紫外光區(qū)具有很強(qiáng)的特征吸收，紫外吸收光譜一般在300nm左右（lgε為4左右）有最大吸收，吸收峰的位置與取代基有很大關(guān)系。香豆素母核本身無熒光，而羥基香豆素在紫外光下大多數(shù)能顯藍(lán)色熒光，這是因為羥基能增強(qiáng)分子熒光的緣故。香豆素類熒光的有無或強(qiáng)弱與分子中取代基的種類和位置有關(guān)。香豆素的熒光性質(zhì)在薄層色譜中可用于定性鑒別和定量分析。2020/12/18673、定性鑒別熒光法羥基香豆素大多能產(chǎn)生熒光，利用此性質(zhì)可進(jìn)行定性鑒別。可直接觀察提取溶液的熒光，也可觀察薄層斑點熒光。薄層色譜法具有熒光的香豆素類成分，可用薄層色譜熒光法進(jìn)行鑒別不具熒光或熒光強(qiáng)度較弱的香豆素可用顯色劑或噴灑堿溶液以增強(qiáng)熒光再進(jìn)行觀察。2020/12/18684、含量測定（1）分光光度法利用香豆素類成分的顏色反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，于可見光波長區(qū)域進(jìn)行測定。香豆素類成分都具有紫外吸收，樣品較純凈時，也可于紫外光區(qū)域直接測定。（2）薄層掃描法本法為香豆素類成分常用測定方法之一，樣品經(jīng)薄層分離后，于熒光燈下定位，利用香豆素類成分具有紫外吸收或能產(chǎn)生熒光的特性，不經(jīng)顯色，直接進(jìn)行掃描測定。

2020/12/1869（3）熒光光度法羥基香豆素類成分大多能產(chǎn)生較強(qiáng)烈熒光，用熒光光度法進(jìn)行測定有較高的靈敏度。當(dāng)干擾成分較多時，可先用薄層分離，刮取薄層洗脫被測成分后再用熒光光度法進(jìn)行測定，但本法不及薄層掃描法簡便，刮取薄層洗脫時易引起誤差。2020/12/1870（4）高效液相色譜法香豆素類成分含有芳香環(huán)及其它共軛結(jié)構(gòu)，用HPLC測定時，有較高的靈敏度，常用固定相為C18，流動相為不同比例的甲醇—水（5）氣相色譜法某些分子量小、具有揮發(fā)性的香豆素類成分，可用氣相色譜法測定，如蛇床子素、歐前胡素、香柑內(nèi)酯、異虎耳草素、花椒毒素、花椒毒酚等成分可用GC測定，常用SE-30石英毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測器。2020/12/1871六、單萜及二萜類成分分析

1、含芍藥苷中藥制劑的分析（1）定性鑒別可用硅膠GF254薄層板分離后于紫外光燈（254nm）下直接觀察，但斑點色澤較淺，也可用顯色劑顯色后進(jìn)行鑒別。顯色劑有：10%硫酸乙醇溶液；5%香草醛硫酸溶液；5%茴香醛-5%硫酸乙醇溶液；稀鹽酸；碘蒸氣。（2）含量測定具有紫外吸收，但不能產(chǎn)生熒光，在硅膠GF254薄板上可產(chǎn)生暗色斑點，所以芍藥苷常用的定量方法為高效液相色譜法和薄層掃描法。

2020/12/18722、含穿心蓮中藥制劑的分析結(jié)構(gòu)中含有α、β不飽和內(nèi)酯，其紫外吸收光譜為λmax223nm，可利用此結(jié)構(gòu)特性進(jìn)行鑒別和含量測定。定性鑒別：多采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別具有紫外吸收，在硅膠CF254薄層板上呈現(xiàn)暗斑點，也可用硅膠G薄層，用顯色劑顯色后進(jìn)行觀察。常用的顯色劑：A碘蒸氣；B2%的3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液與7%氫氧化鉀溶液的等量混合液。

2020/12/1873穿心蓮總內(nèi)酯的測定可根據(jù)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)在pH=8以上水解開環(huán)的性質(zhì)，用氫氧化鈉水解，以酸回滴剩余堿間接測定總內(nèi)酯含量；穿心蓮單體內(nèi)酯的測定薄層分離后用紫外分光光度法、薄層掃描、高效液相色譜法測定2020/12/1874應(yīng)用示例桂枝茯苓丸中肉桂酸的含量測定處方組成：桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁1、色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動相；檢測波長為285nm。理論塔板數(shù)按肉桂酸峰計算應(yīng)不低于2000.2、對照品溶液的制備：精密稱取肉桂酸對照品10mg，置100ml棕色量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻、精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得（每1ml含肉桂酸5ug）。2020/12/18753、供試品溶液的制備：取本品10g，切碎，混勻，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。4、測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每丸含桂枝以肉桂酸（C9H8O2）計，不得少于0.072。2020/12/1876第六章

含動物藥、礦物藥的中藥制劑分析2020/12/1877【目的要求】1．掌握牛黃含牛黃制劑及含砷、汞藥物等的定性鑒別、定量分析方法等。2．熟悉熊膽等其他動物藥的定性鑒別、定量分析方法。3．了解含動物藥、礦物藥的中藥制劑分析應(yīng)用實例。藥物分析學(xué)科2020/12/1878§1含動物藥的中藥制劑分析一、牛黃及其制劑分析天然牛黃人工牛黃：由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、膽紅素、膽固醇、無機(jī)鹽等配制而成人工培育牛黃藥物分析學(xué)科2020/12/1879§1含動物藥的中藥制劑分析一、牛黃及其制劑分析（一）牛黃的化學(xué)成分膽色素：膽紅素等膽汁酸類：膽酸、去氧膽酸、鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸等脂類蛋白質(zhì)、肽、氨基酸類無機(jī)元素藥物分析學(xué)科2020/12/1880§1含動物藥的中藥制劑分析一、牛黃及其制劑分析（二）膽汁酸的性質(zhì)和化學(xué)反應(yīng)多以肽（甘氨膽酸、?；悄懰幔┑男问酱嬖谌芙庑猿甥}－－易溶于水游離－－可溶于乙酸、丙酮、堿液，易溶于乙醇、乙醚藥物分析學(xué)科2020/12/1881§1含動物藥的中藥制劑分析一、牛黃及其制劑分析（二）膽汁酸的性質(zhì)和化學(xué)反應(yīng)多以肽（甘氨膽酸、?；悄懰幔┑男问酱嬖谌芙庑猿甥}－－易溶于水游離－－易溶于乙醇、乙醚，可溶于乙酸、丙酮、堿液Pettenkofer反應(yīng)（冰水冷卻）--紫色藥物分析學(xué)科膽酸（CA）2020/12/1882一、牛黃及其制劑分析（三）膽紅素的性質(zhì)及化學(xué)反應(yīng)溶解性：溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳、堿液，微溶于乙醇、乙醚，成鹽后易溶于水不穩(wěn)定性，易被氧化VandenBergh反應(yīng)：（重氮化反應(yīng)）藍(lán)紫色(強(qiáng)酸性)→紅色(pH2-5)→綠色(pH>5.5)

重氮化試劑：對氨基苯磺酸藥物分析學(xué)科§1含動物藥的中藥制劑分析2020/12/1883一、牛黃及其制劑分析（四）定性鑒別藥物分析學(xué)科§1含動物藥的中藥制劑分析2020/12/1884一、牛黃及其制劑分析（五）含量測定1、膽酸的測定分光光度法--去氧膽酸TLCS--膽酸2、膽紅素的測定分光光度法（重氮化反應(yīng)）HPLC藥物分析學(xué)科§1含動物藥的中藥制劑分析2020/12/1885§1含動物藥的中藥制劑分析二、麝香及其制劑分析（一）化學(xué)成分及性質(zhì)大環(huán)化合物甾族化合物膽固醇、酯、蠟蛋白質(zhì)、肽、氨基酸無機(jī)鹽其他成分藥物分析學(xué)科麝香酮2020/12/1886（三）定量分析GCHPLC§1含動物藥的中藥制劑分析二、麝香及其制劑分析（二）定性鑒別GC紫外光譜法乙醇提取液→220nm,270nm乙醚提取液→231nm,265nm正己烷提取液→220nm,265nm薄層色譜法藥物分析學(xué)科麝香保心丸中麝香的氣相色譜鑒別取本品2g，研碎，加乙醚5ml，振搖，超聲處理5分鐘，離心，取上清夜，作為供試品溶液。另取麝香酮對照品，加乙醚制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。照氣相色譜法(附錄VIE)試驗，以聚乙二醇(PRG)-20M和甲基硅橡膠為混合固定相，涂布濃度分別為1.64%和1.32%，柱長為2m，柱溫為180℃。分別取對照品溶液與供試品溶液適量，注入氣相色譜儀。供試品色譜中應(yīng)呈現(xiàn)與對照品色譜保留時間相同的色譜峰。梅花點舌丸中麝香的薄層鑒別取本品3g，研細(xì)，加乙醚10ml，密塞，振搖10分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取麝香酮對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液。薄層條件：硅膠G，石油醚-二氯甲烷(2:3)，二硝基苯肼試液2020/12/1887§1含動物藥的中藥制劑分析三、蟾酥及其制劑分析（一）化學(xué)成分蟾蜍甾二烯游離型--蟾毒配基結(jié)合型—蟾蜍毒素等強(qiáng)心甾烯蟾毒類吲哚堿類藥物分析學(xué)科蟾毒配基2020/12/1888§1含動物藥的中藥制劑分析三、蟾酥及其制劑分析（二）定性鑒別1、顯色反應(yīng)--只針對原料2、PC3、TLC4、UV藥物分析學(xué)科2020/12/1889§1含動物藥的中藥制劑分析三、蟾酥及其制劑分析（三）含量測定1、分光光度法（例題P172）差示分光光度法：不經(jīng)分離直接測定百分吸