在液相色譜實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題以及解決辦法

常見(jiàn)問(wèn)題-基線漂移/噪音-峰型-保留漂移第1頁(yè)/共12頁(yè)第一頁(yè)，共13頁(yè)?；€噪音可能的原因：流通池臟檢測(cè)器燈有問(wèn)題如果是周期性的，則起源于泵的脈沖溫度對(duì)檢測(cè)器的影響有氣泡經(jīng)過(guò)檢測(cè)器Time(min.)第2頁(yè)/共12頁(yè)第二頁(yè)，共13頁(yè)?；€漂移梯度洗脫流動(dòng)相中有污染物柱中的流動(dòng)相沒(méi)有平衡好體系中有污染物流出可能的原因：第3頁(yè)/共12頁(yè)第三頁(yè)，共13頁(yè)。鬼峰色譜圖上出現(xiàn)的未知的色譜峰，我們稱(chēng)之為“鬼峰”。

出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因包括：1、流動(dòng)相中的雜質(zhì)或是流動(dòng)相中各組分不互溶；2、上一次進(jìn)樣的未流出的組份。3、樣品中的未知組份。第4頁(yè)/共12頁(yè)第四頁(yè)，共13頁(yè)。雙峰正常峰雙峰可能原因：1、柱中有死體積2、過(guò)濾片部分堵塞3、只有一個(gè)雙峰——組分的共洗脫4、樣品與溶劑不匹配第5頁(yè)/共12頁(yè)第五頁(yè)，共13頁(yè)。峰展寬所有的峰都展寬柱效降低——柱死體積進(jìn)樣量過(guò)大，柱子超載流動(dòng)相粘度過(guò)大部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品——蛋白或聚合物樣品與流動(dòng)相不匹配第6頁(yè)/共12頁(yè)第六頁(yè)，共13頁(yè)。拖尾峰NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)——?dú)埩艄璐蓟姆磻?yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱損壞不適當(dāng)?shù)臉悠妨?溶劑第7頁(yè)/共12頁(yè)第七頁(yè)，共13頁(yè)。前伸峰NormalFronting可能的原因柱過(guò)載在大峰前，有小峰流出樣品溶劑不適當(dāng)柱死體積過(guò)濾片部分堵塞第8頁(yè)/共12頁(yè)第八頁(yè)，共13頁(yè)。I.所有峰都向低保留值方向漂移（酸、堿、中性化合物）-鍵合相流失-流動(dòng)相不穩(wěn)定(可能性較小)-溶劑輸送系統(tǒng)(流速變化)II.所有峰都向高保留值方向漂移-在水/有機(jī)溶劑的混合體系中，有機(jī)溶劑含量減少-

柱改變(可能性較小)-溶劑輸送系統(tǒng)(流速變化)III.離子型化合物的色譜峰的保留值漂移-流動(dòng)相中揮發(fā)性組分損失(離子強(qiáng)度,pH漂移)-

柱改變(鍵合相或污染)保留值漂移第9頁(yè)/共12頁(yè)第九頁(yè)，共13頁(yè)。I.與流動(dòng)相有關(guān)的問(wèn)題-使用新鮮的流動(dòng)相

?pH ?電導(dǎo)

?色譜性能測(cè)試II.與色譜柱有關(guān)的問(wèn)題-測(cè)試新柱-

用標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試混合樣測(cè)試新柱-“清洗”色譜柱后再測(cè)-考慮樣品基質(zhì)與使用條件對(duì)柱穩(wěn)定性的影響保留值漂移第10頁(yè)/共12頁(yè)第十頁(yè)，共13頁(yè)。

總結(jié)如果使用時(shí)加以注意，大部分的液相色譜柱的問(wèn)題是可以預(yù)防的

-柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；流動(dòng)相必須是互溶的，無(wú)顆粒要注意流動(dòng)相的脫氣；-使用保護(hù)柱和在線過(guò)濾器，并定期更換-使用恰當(dāng)?shù)臉悠分苽浞椒?使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序-不同類(lèi)型的色譜柱，請(qǐng)選擇不同的操作條件色譜柱需保存在有機(jī)溶劑中(乙腈，甲醇)盡量避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相第11頁(yè)/共12頁(yè)第十一頁(yè)，共13頁(yè)。謝謝您的觀看！第12頁(yè)/共12頁(yè)第十二頁(yè)，共13頁(yè)。內(nèi)容總結(jié)常見(jiàn)問(wèn)題。1、流動(dòng)相中的雜質(zhì)或是流動(dòng)相中各組分不互溶。3、只有一個(gè)雙峰——組分的共洗脫。柱效降低——柱死體積。大分子量樣品——蛋白或聚合物。二次保留效應(yīng)——?dú)埩艄璐蓟姆磻?yīng)。-在水/有機(jī)溶劑的混合體系中，有機(jī)