蛋白質(zhì)的性質(zhì)分類及研究方法

第四章蛋白質(zhì)的性質(zhì)分類及研究方法提綱一、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的研究方法三、蛋白質(zhì)的分類蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)紫外吸收：最大吸收峰為280nm兩性解離：蛋白質(zhì)的pI值不能直接計(jì)算，只能使用等電聚焦等方法進(jìn)行測定膠體性質(zhì)沉淀反應(yīng)：鹽析、pI沉淀、有機(jī)溶劑引起的沉淀和重金屬鹽作用造成的沉淀變性、復(fù)性水解顏色反應(yīng)蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)受到某些理化因素的作用，其高級結(jié)構(gòu)受到破壞、生物活性隨之喪失的現(xiàn)象。導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的物理因素有：加熱、冷卻、機(jī)械作用、流體壓力和輻射；化學(xué)因素有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高濃度鹽、尿素、重金屬鹽、疏水分子和有機(jī)溶劑。蛋白質(zhì)變性以后，其理化性質(zhì)發(fā)生一系列的變化。這些變化可以作為檢測蛋白質(zhì)變性的指標(biāo)。主要的變化包括：（1）溶解度降低。（2）黏度增加。（3）生物活性喪失。（4）更容易被水解。（5）結(jié)晶行為發(fā)生變化。蛋白質(zhì)的水解蛋白質(zhì)在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或蛋白酶的催化下均能夠發(fā)生水解。但需要注意的是，酸水解會破壞幾種氨基酸，特別是Trp幾乎全部被破壞，其次是三種羥基氨基酸。另外Gln和Asn在酸性條件下，容易水解成Glu和Asp；堿水解會導(dǎo)致多數(shù)氨基酸遭到不同程度的破壞，并且產(chǎn)生消旋現(xiàn)象，但不會破壞Trp；酶水解效率高、不產(chǎn)生消旋作用，也不破壞氨基酸，但不同的蛋白酶對肽鍵特異性不一樣。四種羧肽酶來源和特異性幾種蛋白酶特異性的比較蛋白質(zhì)的各種顏色反應(yīng)蛋白質(zhì)研究方法假定你發(fā)現(xiàn)一種新的蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)X1.如何得到這種蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)的分離、純化技術(shù)2.這種蛋白質(zhì)的大??？（SDS）3.它的pI是多少？（等電聚焦）4.其他細(xì)胞或其他生物體內(nèi)是否存在？

（Western印跡）5.其一級結(jié)構(gòu)如何？

（序列分析）6.其三維結(jié)構(gòu)又如何？

X-射線衍射和核磁共振蛋白質(zhì)純化準(zhǔn)備工作要解決三個(gè)問題：（1）純化蛋白質(zhì)的目的；（2）目標(biāo)蛋白的測活方法；（3）純化蛋白質(zhì)的原料。純化步驟：

（1）破碎細(xì)胞或組織（混合和勻漿）；（2）去除殘?jiān)x心）；（3）沉淀/濃縮（硫酸銨或聚乙二醇）；（4）純化（層析）；（5）鑒定蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳

等電聚焦電泳蛋白質(zhì)的雙向電泳W(wǎng)estern印跡蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定直接測定法

化學(xué)測定法質(zhì)譜間接測定法。

先得到某一種蛋白質(zhì)基因的核苷酸序列，然