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文檔簡(jiǎn)介
目的與要求了解病毒的診斷,抗病毒治療,病毒感染的預(yù)防。第一節(jié)病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類:如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡干脆視察光鏡檢查包涵體分別培育一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相像,但應(yīng)留意:1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理2.低溫保存,盡快送檢3.血清學(xué)診斷采雙份血清二、病毒的分別與鑒定(一)病毒的分別培育細(xì)胞培育(cellculture)雞胚接種(egginoculation)動(dòng)物接種(animalinoculation)1.雞胚培育接受孵化9~14天的雞胚絨毛尿囊膜痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔流感病毒的初次分別卵黃囊嗜神經(jīng)病毒1、雞胚培育優(yōu)點(diǎn):易管理,不帶微生物,成本較低缺點(diǎn):操作程序困難2.動(dòng)物接種應(yīng)用:尚無敏感細(xì)胞的病毒培育動(dòng)物:兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn):結(jié)果易視察,可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn):有飼養(yǎng)條件要求,費(fèi)用高,動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛藏病毒病毒的分別培育3.細(xì)胞培育單層細(xì)胞培育(monolayercellculture)分類懸浮細(xì)胞培育(suspendedcellculture)原代細(xì)胞(primarycell)細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞(diploidcell)傳代細(xì)胞系(continuouscellline)病毒的細(xì)胞培育細(xì)胞培育瓶單層細(xì)胞1.病毒增殖鑒定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等(多數(shù)病毒);②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等);③在培育細(xì)胞中形成包涵體(狂犬病病毒、麻疹病毒等)。(二)病毒的鑒定
①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附(hemadsorption)病毒囊膜表面血凝素(HA)+紅細(xì)胞表面HA受體(3)干擾現(xiàn)象(interference)風(fēng)疹病毒+人胚腎細(xì)胞病毒增殖,CPE(-)埃可病毒+人胚腎細(xì)胞病毒增殖,CPE(+)+人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒???刹《綜PE(-)—風(fēng)疹病毒(+)
埃可病毒(-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)
??刹《?+)2.病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.蝕斑形成試驗(yàn)
(plaqueformationtest)
2.50%組織細(xì)胞感染量(50%tissueculture
infectiousdose,TCID50)感染性病毒量2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡:設(shè)備、操作困難,應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡:可見大病毒(痘類病毒),對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大3.病毒血清學(xué)鑒定
用已知的抗體,鑒定病毒種、型、亞型
(1)血凝抑制試驗(yàn)--—正粘病毒型與亞型鑒定病毒+雞紅細(xì)胞=凝集(血凝試驗(yàn))病毒+特異性抗體+雞紅細(xì)胞=不凝集
(血凝抑制試驗(yàn))
(2)免疫標(biāo)記法(FIA、EIA、RIA)
——多種病毒鑒定三、病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測(cè)序四、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用:①實(shí)行標(biāo)本分別病毒為時(shí)已晚②目前尚無分別此病毒的方法或難以分別的病毒③為證明所分別的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等1.中和試驗(yàn)(neutralizingtest)病毒+中和抗體病毒失去感染性
特點(diǎn):特異性高,抗體維持時(shí)間長應(yīng)用:人群免疫狀況的調(diào)查臨床診斷少用五、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分(抗原或核酸)早期抗體檢測(cè)(IgM)病毒的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交SouthernblotPCRNorthernblot其次節(jié)病毒感染的防治原則滅活疫苗(inactivatedvaccine)活疫苗(livingvaccine)重組載體疫苗(recombinantcarriervaccine
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