運動生物化學實驗：血糖測定-葡萄糖氧化酶法

1血糖的定量測定

葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）生物化學與分子生物學教研室實驗目的2掌握葡萄糖氧化酶法測定血糖的基本原理掌握葡萄糖氧化酶法測定血糖的操作技術掌握分光光度計標準管計算方法了解不同類型運動中血糖的變化規(guī)律了解血糖的臨床意義肌糖原（350~400g）肝糖原（70~100g)

血糖（6g）人體內糖的分布與含量3血糖的來源與去路4食物中的糖類肝糖原分解糖異生作用其他單糖轉化血糖3.9~6.7mmol/L有氧氧化無氧酵解合成糖原轉化為甘油、脂肪酸、氨基酸和其他糖類去路來源血糖濃度測定口服糖耐量試驗糖化血紅蛋白測定糖化血清白蛋白測定胰島素測定C-肽測定糖代謝紊亂的試驗5血糖測定方法分類6無機化學法Folin-Wu法特異性差已淘汰有機化學法鄰甲苯胺聯(lián)苯胺法法氨基聯(lián)苯法酶法已糖激酶法葡萄糖氧化酶法葡萄糖脫氫酶法7GOD-POD法測定血清葡萄糖原理Trinder反應

紅色醌類化合物的生成量即其色澤的深淺在一定范圍內與葡萄糖含量成正比。8試劑與器材標本：新鮮成牛血清（無溶血、無脂濁)試劑：葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）試劑盒R試劑（酶酚混合液）

1.磷酸鹽緩沖液（100mmol/L)2.葡萄糖氧化酶（10KU/L）

3.4-氨基氨替比林（1.0mmol/L)4.苯酚（2.0mmol/L）

5.過氧化物酶（8KU/L）6.氯化鎂（3.5mmol/L）葡萄糖標準液（5.55mmol/L）：放置2小時或過夜后使用器材：加樣槍、刻度吸管、試管、試管架、水浴箱、721、723型和V-1100型分光光度計9加入物B

SU蒸餾水30μl——標準液—30μl—血清——30μlR試劑3ml3ml3ml取3支試管編號民，按下表加入試劑 操作步驟各管混勻，置37℃水浴中保溫15分鐘，在波長505nm處比色，以B管調零讀取各管吸光度（A）。10結果計算濃度計算公式：11實驗數(shù)據(jù)記錄表格

吸光值A505測定次數(shù)標準管As

測定管Au12

3各管平均值記錄各管在505nm波長測得的吸光值：參考值血清或血漿：3.89～6.11mmol/L（70～110mg/dl）全血：3.6～5.28mmol/L（65～95mg/dl）

12生理性高血糖攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺分泌增加時生理性低血糖饑餓和劇烈運動后病理性高血糖糖尿病、內分泌功能障礙、顱內壓增高、脫水引起的高血糖病理生低血糖胰島素分泌過多，對抗胰島素的激素分泌不足、嚴重肝病患者臨床意義13運動類型血糖變化規(guī)律1~2分鐘短時間大強度運動（例如400米跑、100米游泳）血糖濃度基本不變。4~10分鐘全力運動（例如800米、1500米；200、400與800米游泳）血糖濃度明顯上升，可超過腎糖閾，達到10~11.1mmol/L。15~30分鐘全力運動（例如5000米與10000米跑）消耗血糖的速率達到或超過肝臟釋放葡萄糖的速率，造成血糖濃度開始出現(xiàn)下降。1~2小時長時間運動（例如馬拉松）骨骼肌對于血糖攝取與利用的速率接近最大值。肝臟釋放葡萄糖的速率低于血糖利用速率，血糖處于正常范圍的低限。超過2~3小時的運動（例如鐵人三項）血糖被大量消耗，如果不補糖則會出現(xiàn)低血糖癥狀。不同類型運動中血糖變化的規(guī)律1415注意事項1.用無溶血的標本，以防紅細胞內葡萄糖-6-磷酸在溶血時進入血清；2.必須在30min內分離血清，防止糖酵解使結果降低。因為血液離體后每小時葡萄可下降5~10%。用草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑可抑制糖分解；3.新配制的葡萄糖標準液，須放置2h以上（最好過夜），方可使用；4.本法用量甚微，操作中應該直接先加R試劑于試管中，再加樣品，并吸試劑反復沖洗吸管，以保證結果可靠。5.嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清應先制備