“體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓課程-分析性能評價”精彩回顧之100問

8/8“體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓課程—分析性能評價”精彩回顧之100問（4）2022年11月17日，由中國醫(yī)學裝備協會應用評價分會主辦、北京水木濟衡生物技術有限公司承辦的《體外診斷試劑研發(fā)全流程管理培訓課》第三期分析性能評價課程正式開課，培訓課程持續(xù)三天，邀請了多位行業(yè)資深專家授課，吸引了上百家企業(yè)參加。培訓的最后一天，設置了討論環(huán)節(jié)，多位專家就學員提出的問題進行了詳細的解答，現將部分問題及專家回復整理如下。本節(jié)主要針對參考物質相關問題。31咨詢問題國家參考品和國家標準品，對于產品需要執(zhí)行的強度是不是可以理解為推薦性標準和強制性標準？專家答復：個人理解國家標準品和國家參考品，只要適用，注冊檢驗時都應使用。32咨詢問題定性體外診斷試劑產品，已經買到國家標準品，國家標準品附帶的說明書中描述不能用于溯源，原因是什么呢？專家答復：國家標準品和國家參考品，主要用途是用于體外診斷試劑質量評價，在原材料選擇、制備方法、標定方法、標定結果、定值準確性、量值溯源、穩(wěn)定性及分裝與包裝條件等方面都對其有相應的要求。定性試劑國家標準品或參考品，通常由陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品及精密性參考品等組成，分別用于對IVD試劑敏感性、特異性、檢出限、精密度等性能的評價。計量溯源性目前主要針對定量測定，定性測定目前還無法做到溯源，國家標準品或參考品主要用途還是評價結果的一致性。33咨詢問題關于正確度，有國家標準品，但是是人工重組的，和企業(yè)的檢測系統(tǒng)不匹配，該怎么處理？專家答復：國家標準品說明書的“用途”一欄注明了標準品的來源和適用范圍。如確實不適用，建議企業(yè)可向注冊審評審批部門提交說明，充分詳述不適用的理由。34咨詢問題定量檢測試劑沒有標準品，可以用重組抗原或天然抗原做企業(yè)標準品嗎？需要溯源到哪里？專家答復：這種情況下，可參考ISO17511：2020版模式6“被測量由制造商內部自定義的參考物質定義，沒有一級參考物質和有證參考物質，也沒有參考測量程序和一致化方案，不能溯源到SI單位”。簡單地說，企業(yè)要自行建立標準。模式6溯源的終點在于企業(yè)自定義的參考物質（m3），被測量由這個參考物質定義。m3通常是一些純品，例如針對抗原檢測，m3往往是純化的重組抗原，采用重量法或免疫分析方法（p4，制造商選定的測量程序）得到制造商工作校準物。35咨詢問題定量體外診斷試劑產品，沒有標準品，采用外購化學合成的標準品，需要提供哪些材料，才可以做溯源用呢？專家答復：量值溯源如何做，以及需要提供哪些文件，在ISO17511：2020版有詳細要求。36咨詢問題產品研制過程中，無國家標準品，采用臨床樣本制備參考品的注意事項有哪些？具體參考文獻有哪些？專家答復：企業(yè)參考品的用途是全面評價和確認產品的各項性能，發(fā)揮“標尺”、“砝碼”作用，是IVD研發(fā)、生產及應用全過程中進行產品安全有效性評價的必備核心耗材，因此企業(yè)參考品設計時應客觀合理，應能充分評價產品的質量，幫助發(fā)現產品在設計或者生產中的一些缺陷和問題。采用臨床樣本制備參考品的注意事項：1）陽性參考品主要評估產品的敏感性，應具有代表性、滿足臨床樣本的分布類型、遺傳標記代表性，應包括強陽性參考品、中等陽性參考品、弱陽性參考品，其中應以中等陽性參考品為主。如被測物包括不同的型別及亞型，一般情況下應覆蓋；2）陰性參考品主要評估產品的特異性，陰性參考品除了有不含被測物的正?；颊邩颖就?，還應設置一定數量的含有可能會產生交叉反應物質的樣本，包括分析物的結構類似物、具有同源性序列的核酸片段、易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物等。建議還應設置干擾評價的參考品，如常見的內源性干擾物質、常用藥物及其代謝物、樣本添加劑等；3）在企業(yè)參考品的基質選擇上，企業(yè)參考品的基質應可能與臨床被檢樣本相同或接近（例如血清、血漿、組織切片）。例如，檢測血漿中基因突變的試劑評價參考品的設置應根據血漿樣本中突變類型分布、片段長度、濃度等進行模擬；4）企業(yè)要建立自己的參考品，并固定化下來。舉例來講，對于定性試劑盒而言，檢出限這個指標非常關鍵，因此檢出限參考品的合理設置也就顯得尤為重要，但在實際工作中，我們會發(fā)現有的企業(yè)設置該參考品時不太科學，往往隨意選擇一個臨床的強陽性樣本，然后進行倍比稀釋，對系列稀釋的參考品進行檢測，直至檢測到結果為陰性，并將上一個稀釋度參考品設置為檢出限參考品，這樣并不能清楚的確定參考品中的被測物的具體濃度（或滴度、效價等），從而也無法保持參考品批次間的一致性?？蓞⒖嫉奈墨I包括相應審評指導原則的要求、國家標準品和參考品的研制相關論文等。37咨詢問題體外診斷試劑盒的不同的基因位點的參考品必須都是相同的嗎？比如全部都得是來自陽性細胞系或者全部都是陽性病人血樣？專家答復：要視情況而定。參考品的原材料應盡可能與臨床樣本相一致或接近，主要來源于臨床樣本，但也可來源于永生化細胞系、基因編輯細胞系，甚至也可來自基因工程構建產品、重組質粒等。一般情況下建議陽性參考品中常見基因突變位點采用臨床樣本提取的DNA儲備液或細胞系作為原料，其他突變位點可采用DNA儲備液、細胞系或突變擴增產物模擬樣本作為原料。38咨詢問題要檢測病人中的基因突變位點，盡量用臨床樣本來進行性能分析，如果臨床樣本比較難獲得可否用帶有突變位點的細胞系來作為參考品？專家答復：可以。39咨詢問題基因突變位點檢測中設置的強陽性參考品中關于強陽應如何定義，濃度如何界定？專家答復：強陽性在突變位點的檢測中一般是指突變頻率比較高的陽性樣本，與臨床中患者檢測出的群體突變頻率相關，沒有準確的定義，可以根據不同疾病查閱文獻來設定。一般情況是直接選擇臨床樣本，不進行人為稀釋。40咨詢問題關于流產物組織染色體拷貝數變異檢測試劑盒企業(yè)參考品建立中，關于微缺失微重復參考品，只要不影響相關疾病診斷，微缺失微重復的DNA區(qū)段和大小不用和國家參考品panel的相應疾病的微缺失微重復的區(qū)段完全一致？專家答復：一般情況下，需要和國家參考品保持一致。這個項目，還應充分考慮判斷依據和臨床是否常見的等綜合因素，建議咨詢相關老師。41咨詢問題體外診斷定性試劑產品，臨床存在了不同耐藥類型，有一種藥物耐藥，也有兩種和多種耐藥類型，參考品需要包含所有臨床耐藥類型還是只包含耐藥基因突變類型就可以？專家答復：一個基因位點發(fā)生不同的堿基突變，臨床指征相同的耐藥，參考品不能只選擇1種突變型來代表，還是需要盡可能多的選擇。42咨詢問題對于罕見的型別可以使用細胞株（人類基因檢測），怎么定義這個罕見？有可量化的指標來定義