綠原酸提取工藝研究,獸醫(yī)碩士論文

綠原酸提取工藝研究,獸醫(yī)碩士論文本篇論文目錄導(dǎo)航：【第1部分】【第2部分】【第3部分】【第4部分】【第5部分】【第6部分】【第7部分】綠原酸提取工藝研究【第8部分】【第9部分】2.3綠原酸提取工藝研究2.3.1試驗(yàn)材料見附錄表2.36，2.37。2.3.2試驗(yàn)方式方法2.3.2.1超聲提取法工藝流程稱取杜仲葉粉末若干份，每份0.5g，于20mL試管中，參加一定量30%乙醇溶液調(diào)節(jié)pH值室溫避光浸泡1.5h，放入超聲波洗滌器中在一定功率下超聲提取一定時(shí)間后過濾、濾液離心，定容到10mL，取上清液250L，加水定容到10mL。4℃避光保存?zhèn)溆谩?.3.2.2超聲提取法單因素與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)上述提取流程中，在pH=4，40KHz功率下，提取時(shí)間60min，液固比為20的基礎(chǔ)條件下，分別改變這四個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)。詳細(xì)因素水平如表2.13。正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)，見表2.14。2.3.2.3微波提取法工藝流程稱取杜仲葉粉末若干份，每份0.5g，于20mL試管中，參加一定量30%乙醇溶液調(diào)節(jié)pH值室溫避光浸泡1.5h，放入微波爐中在一定火力下輻射一定時(shí)間后，參加30%乙醇溶液定容到10mL，過濾、濾液離心，冷卻后再定容到10mL，取上清液250L，加水定溶至10mL。4℃避光保存?zhèn)溆谩?.3.2.4微波提取法單因素與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)上述提取工藝流程中，在pH=4，微波火力為中火，微波輻射時(shí)間90s，液固比為20的基礎(chǔ)條件下，分別改變這四個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，因素水平如表2.15。正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見表2.16。2.3.2.5酶法提取工藝流程稱取杜仲葉粉末若干份，每份0.5g，于20mL試管中，參加一定量體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇溶液調(diào)節(jié)pH值，室溫避光浸泡1.5h，參加一定量40℃活化10min的酶液，40℃水浴酶解反響一定時(shí)間后過濾、濾液離心。冷卻后定容到10mL，取上清液250L，加水定容至10mL。4℃避光保存?zhèn)溆谩?.3.2.6酶法提取單因素與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)上述提取工藝流程中，在pH=5，酶用量0.4%，酶解反響時(shí)間1h，液固比20的基礎(chǔ)條件下，分別改變這四個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，詳細(xì)因素水平如表2.17。正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見表2.18。2.3.2.7熱浸提取法工藝流程稱取杜仲葉粉末若干份，每份0.5g，于20mL試管中，參加一定量體積分?jǐn)?shù)的30%乙醇溶液，調(diào)節(jié)pH值，室溫避光浸泡1.5h，置于一定溫度水浴鍋中提取一定時(shí)間后過濾、濾液離心。冷卻后定容到10mL，取上清液250L，加水定容至10mL。4℃避光保存?zhèn)溆谩?.3.2.8熱浸提取法單因素與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)上述提取工藝流程，在pH=4，提取溫度70℃，提取時(shí)間0.5h，液固比為20的基礎(chǔ)條件下。分別改變這四個(gè)因素，進(jìn)行單因素試驗(yàn)，詳細(xì)因素水平如表2.19。正交試驗(yàn)見表2.20。2.3.2.9四種工藝綠原酸提取液色譜圖比擬通過對(duì)四種工藝最佳條件下綠原酸得率及提取液色譜圖分析，確定綠原酸提取的最適工藝。2.3.3結(jié)果與分析2.3.3.1超聲提取法單因素試驗(yàn)結(jié)果由圖2.7可知，當(dāng)溶劑PH值不斷增大時(shí)，綠原酸得率呈先增大后減小趨勢，PH=4時(shí)綠原酸得率最大為0.9008%。由圖2.8可知，當(dāng)超聲頻率不斷增大時(shí)，綠原酸得率呈先增大后減小趨勢，40KHz時(shí)時(shí)綠原酸得率最大為0.9020%。圖2.9可知，綠原酸得率隨超聲處理時(shí)間延長，表現(xiàn)先增大后緩慢下降的趨勢，在超聲80min時(shí)綠原酸得率最大，為0.9013%。由圖2.10可知，綠原酸得率隨液料比的增大表現(xiàn)出先逐步上升后緩慢下降的趨勢，當(dāng)液料比為16時(shí)綠原酸得率最大，為0.9170%。2.3.3.2超聲提取法正交試驗(yàn)結(jié)果由上表可知，超聲功率40KHz，超聲時(shí)間80min，料液體積質(zhì)量比14，此時(shí)綠原酸得率最高為0.9032%。正交試驗(yàn)結(jié)果表示清楚，綠原酸超聲提取試驗(yàn)中，各因素對(duì)綠原酸得率影響從大到小順序?yàn)椋撼暪β?A)＞時(shí)間(B)＞液料比(C)，即超聲功率對(duì)綠原酸得率影響最大。2.3.3.3微波提取法單因素試驗(yàn)結(jié)果由圖2.11可知，隨著微波火力的加大，綠原酸得率呈現(xiàn)先增大后減小趨勢，中火時(shí)綠原酸得率最大為0.9174%。圖2.12可知，當(dāng)微波輻射時(shí)間不斷延長，綠原酸得率表現(xiàn)先緩慢增大后快速下降的趨勢，在輻射時(shí)間為90S時(shí)綠原酸得率最大，為0.9288%。由圖2.13可知，綠原酸得率隨液料比的增大表現(xiàn)出逐步上升的趨勢，當(dāng)液料比為16時(shí)上升趨勢變得緩慢，此時(shí)綠原酸得率為0.9170%。2.3.3.4微波提取法正交試驗(yàn)結(jié)果由上表可知，微波火力為中火，輻射時(shí)間60s，液料體積質(zhì)量比18，此時(shí)綠原酸得率最高為0.9313%。正交試驗(yàn)結(jié)果表示清楚各因素對(duì)綠原酸得率影響從大到小順序?yàn)椋何⒉ɑ鹆?A)＞輻射時(shí)間(C)＞液料比(B)，即微波火力對(duì)綠原酸得率影響最大。2.3.3.5酶法提取單因素試驗(yàn)結(jié)果由圖2.14可知，隨著pH增大，綠原酸得率呈先增大后減小趨勢，pH=5時(shí)綠原酸得率最大為0.9471%。圖2.15可知，隨酶用量增加綠原酸得率先增大，在酶用量0.4%以后綠原酸得率變化幅度微小，酶用量0.4%時(shí)綠原酸得率為0.9435%。由圖2.16可知，綠原酸得率隨酶解時(shí)延長表現(xiàn)先增大，后趨于平穩(wěn)狀態(tài)，酶解時(shí)間1.5h時(shí)綠原酸得率最大，為0.9358%。由圖2.17可知，綠原酸得率隨液料比的增大呈現(xiàn)先增大后緩慢降低的狀態(tài)，液料比為16時(shí)綠原酸得率最大，為0.9374%。由圖2.18結(jié)果，能夠看出，當(dāng)酶促反響處于不斷升溫時(shí)，綠原酸產(chǎn)率呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，酶解溫度為40℃時(shí)綠原酸得率最大，為0.9276%。2.3.3.6酶法提取正交試驗(yàn)結(jié)果由上表可知，酶解pH=4.5，酶解溫度40℃，酶用量0.35%，此時(shí)綠原酸得率最高為0.9508%。正交試驗(yàn)結(jié)果表示清楚，酶解各因素對(duì)綠原酸得率影響從大到小的順序?yàn)椋好附鈖H(A)＞反響溫度(B)＞酶用量(C)，即酶解pH值對(duì)綠原酸得率影響最大。2.3.3.7熱浸法提取單因素試驗(yàn)結(jié)果由圖2.19可知，隨著浸出環(huán)境不斷升溫，綠原酸得率呈先增大后減小趨勢，70℃時(shí)得率最大為0.9618%。由圖2.20可知，70℃水浴浸提半小時(shí)綠原酸得率最大，為0.9630%，而后逐步減小。由圖2.21可知，綠原酸得率隨液料比的增大，先增大后趨于穩(wěn)定，液固比16時(shí)綠原酸得率最大，為0.9618%。2.3.3.8熱浸法正交試驗(yàn)結(jié)果由上表分析可得，熱浸溫度為70℃、熱浸時(shí)間0.5h、液料體積質(zhì)量比18，此時(shí)綠原酸得率最高為0.9654%。正交試驗(yàn)結(jié)果表示清楚，熱浸提取各因素對(duì)提取結(jié)果影響從大到小順序?yàn)椋阂毫媳?C)＞熱浸溫度(A)＞熱浸時(shí)間(B)。2.3.3.9四種工藝綠原酸提取液色譜圖比擬由前面各工藝提取結(jié)果可知，杜仲葉綠原酸不同提取工藝最佳條件下，綠原酸得率從高到低依次為：熱浸提取0.9654%＞酶法提取0.9508%＞微波提取0.9313%＞超聲提取0.9032%。對(duì)應(yīng)色譜圖如下：從色譜圖比照分析可知，四種提取方式方法的色譜峰出峰時(shí)間、順序、整體峰形基本一致，且在300nm檢測綠原酸峰面積所占總峰面積比例基本一致分別為82.755%、81.722%、82.574%、83.202%，結(jié)合四種不同提取方式方法，綠原酸提取液的定量結(jié)果及色譜圖分析，得出杜仲葉綠原酸提取的最適工藝為熱浸提取。2.3.4討論2.3.4.1超聲提取技術(shù)試驗(yàn)超聲發(fā)生裝置為超聲清洗儀，操作簡單，利用超聲空化作用對(duì)植物細(xì)胞進(jìn)行破碎，促進(jìn)綠原酸更好的擴(kuò)散到提取溶劑中，超聲提取法由于不需加熱便可到達(dá)破碎植物細(xì)胞的目的，因而對(duì)于植物熱敏性成分的提取不失為一種理想的方式方法；超聲提取也存在弊端，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)超聲法提取植物有效成分，原料投入量較少，合適實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，若應(yīng)用到工業(yè)化生產(chǎn)中，生產(chǎn)原料投料量將受限制；當(dāng)超聲頻率低于40KHz時(shí)，噪聲明顯，因而超聲提取若用于工業(yè)化生產(chǎn)還可能造成聲波污染。2.3.4.2微波提取技術(shù)試驗(yàn)中使用的微波發(fā)生裝置為家用微波爐，單因素試驗(yàn)可知液料比一定的情況下，中高火時(shí)隨著輻射時(shí)間的延長，綠原酸得率先升高后下降。這可能由于綠原酸存在不穩(wěn)定的構(gòu)造有關(guān)，假如加以持續(xù)較高的溫度，這種構(gòu)造會(huì)分解，最終造成，綠原酸產(chǎn)率下降。除此之外，由于微波具有選擇性加熱而且升溫速度很快的的特點(diǎn)，所以對(duì)于不同組織加熱要控制好微波輻射時(shí)間。對(duì)于一些易破碎的目的組織，需處理的時(shí)間較短，此時(shí)溶劑還沒有開場升溫，這樣不但提高了中藥提取效率還節(jié)省了溶劑；而對(duì)于較難處理的目的組織，需要加熱較長時(shí)間，此時(shí)溶劑也開場升溫且速度很快，造成溶劑損失。2.3.4.3酶法提取技術(shù)根據(jù)植物細(xì)胞壁組成特點(diǎn)〔主要成分為纖維素〕，及其對(duì)中藥有效成分提取的影響〔細(xì)胞內(nèi)藥效成分溶出的障礙〕，又結(jié)合了酶具有專一性的特點(diǎn)，試驗(yàn)選用纖維素酶水解杜仲葉細(xì)胞壁。試驗(yàn)中酶解反響條件溫和，酶解試驗(yàn)在恒溫水浴鍋中即可進(jìn)行，對(duì)設(shè)備要求不高，甚至有些酶解反響在室溫即可進(jìn)行，大大節(jié)約了藥效成分提取的儀器成本；除此之外，酶具有高效性特點(diǎn)，很少量的酶就能夠到達(dá)很好的酶解效果。但是，酶法提取容易使酶在藥材提取液中殘留，給產(chǎn)品的后期處理帶來困難。因而，假如解決酶后期去除的問題，酶法提取中藥有效成分，有著廣闊的應(yīng)用前景。2.3.4.4熱浸提取技術(shù)分析此方式方法提取設(shè)備簡單，只需恒溫水浴鍋即可。與超聲提取及微波提取相比，熱浸提取能夠大量投料；與酶法提取相比不需要外加催化劑，簡化了后續(xù)除雜工作。綜合考慮，適于工業(yè)生產(chǎn)推廣。2.3.4.5四種工藝綠原酸提取液色譜圖分析四種提取方式方法的色