W4402單增李斯特氏菌檢驗(yàn)-國標(biāo)解讀與檢驗(yàn)準(zhǔn)備2微

單增李斯特氏菌檢驗(yàn)—國標(biāo)解讀與檢驗(yàn)準(zhǔn)備微生物檢驗(yàn)技術(shù)國標(biāo)解讀1檢驗(yàn)準(zhǔn)備2目錄頁CONTENTSPAGE1國標(biāo)解讀TRANSITIONPAGE一、標(biāo)準(zhǔn)版本二、標(biāo)準(zhǔn)范圍三、標(biāo)準(zhǔn)檢測流程GB/T4789.30-2010標(biāo)準(zhǔn)版本與GB/T4789.30-2008相比，主要變化如下：

——修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱；——?jiǎng)h除“第二法全自動(dòng)酶鏈熒光免疫分析儀篩選法”；——?jiǎng)h除“第三法全自動(dòng)病原菌檢測系統(tǒng)篩選法”。一、標(biāo)準(zhǔn)版本本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的檢驗(yàn)。二、標(biāo)準(zhǔn)范圍2增菌

分離1三、標(biāo)準(zhǔn)檢測流程34初篩鑒定5結(jié)果與報(bào)告綜合生化試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告25g（mL）樣品中檢出或未檢出單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程①增菌培養(yǎng)：無菌取樣品25g(mL)放入滅菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋中加225mLLB1增菌液，充分均質(zhì)。于30℃±1℃培養(yǎng)24h，移取0.1mL，轉(zhuǎn)種于10mLLB2增菌液內(nèi)，于30℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程②分離培養(yǎng)：取LB2二次增菌液劃線接種于PALCAM瓊脂平板和李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上，于36℃±1℃培養(yǎng)24h～48h，觀察各個(gè)平板上生長的菌落。PALCAM瓊脂：三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程PALCAM瓊脂平板培養(yǎng)結(jié)果：空白對(duì)照三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程局部放大的菌落三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程顯色培養(yǎng)基：三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程③初篩：④鑒定：染色鏡檢、動(dòng)力試驗(yàn)、生化鑒定、溶血試驗(yàn)?zāi)咎?、鼠李糖發(fā)酵管TSA-YE平板劃線純化36℃±1℃培養(yǎng)24h30℃±1℃培養(yǎng)24h～48h選擇性瓊脂平板典型運(yùn)動(dòng)李斯特氏菌為革蘭氏陽性短桿菌，挑取25℃培養(yǎng)的TSAYE平板上的菌落，制備水浸片，顯微鏡下觀察李氏菌的翻滾、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。染色鏡檢：三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程動(dòng)力試驗(yàn)：傘狀動(dòng)力挑取TSBYE肉湯培養(yǎng)物穿刺接種SIM或半固體動(dòng)力培養(yǎng)基試管，25℃培養(yǎng)5-7d。李氏菌有動(dòng)力、呈現(xiàn)典型的傘狀生長。三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程生化鑒定：過氧化氫酶試驗(yàn)李氏菌過氧化氫酶陽性三、檢測標(biāo)準(zhǔn)流程溶血試驗(yàn)：1、伊氏李斯特氏菌產(chǎn)生大的透明溶血環(huán)。2-3、單增李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌在羊血瓊脂平板刺種點(diǎn)周圍產(chǎn)生狹小的透明溶血環(huán)4、英諾克李斯特氏菌無溶血環(huán)協(xié)同溶血實(shí)驗(yàn)

兩條豎線與三條橫線：1、馬紅球菌2、金黃色葡萄球菌A.單增李斯特氏菌，在靠近金黃色葡萄球菌接種端溶血增強(qiáng)。B.斯氏李斯特氏菌溶血也增強(qiáng)。C.伊氏李斯特氏菌在靠近馬紅球菌接種端溶血增強(qiáng)。單增李斯特菌馬紅球菌金葡斯氏李斯特氏菌伊氏李斯特氏菌可選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)等對(duì)TSA-YE平板上中3個(gè)～5個(gè)純培養(yǎng)的可疑菌落進(jìn)行鑒定。VIDAS2檢驗(yàn)準(zhǔn)備TRANSITIONPAGE一、設(shè)備和材料二、培養(yǎng)基和試劑實(shí)驗(yàn)設(shè)備天平、均質(zhì)器、生物安全柜、恒溫恒濕培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)用具無菌手術(shù)剪、鑷子、樣品罐、無菌吸管滅菌筒（含1mL、10mL移液管）、無菌試管、接種環(huán)、微量移液器及吸頭、無菌培養(yǎng)皿。培養(yǎng)基及試劑（1）增菌試劑李氏增菌肉湯LB1，主要用于李斯特菌的選擇性增菌培養(yǎng)。單增李斯特氏菌增菌肉湯吖啶黃素萘啶酮酸LB1液（2）二次增菌試劑李氏增菌肉湯LB2，主要用于李斯特菌的選擇性增菌培養(yǎng)。單增李斯特氏菌增菌肉湯吖啶黃素萘啶酮酸LB2液（3）分離純化平板PALCAM瓊脂平板，用于單增李斯特氏菌選擇性分離，要求每100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中無菌加入PALCAM選擇性添加劑1支，勻后鋪平板備用?；A(chǔ)培養(yǎng)基PALCAM瓊脂平板選擇性添加劑還有顯色培養(yǎng)基：配置說明參考顯色培養(yǎng)基說明書含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE）平板，用于單增李斯特氏菌的純培養(yǎng)。（4）鑒定試劑：革蘭氏染液、半固體動(dòng)力培養(yǎng)基、過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)試劑、血平板和干制生化鑒定試劑盒及其輔助試劑（糖發(fā)酵添加劑、甲基紅、VP甲乙液）