12綜合實(shí)訓(xùn)配套牛肉中環(huán)丙沙星獸藥殘留檢測(cè)

牛肉中環(huán)丙沙星獸藥殘留檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)

綜合實(shí)訓(xùn)1實(shí)訓(xùn)背景、目的1材料、儀器與設(shè)備2實(shí)訓(xùn)任務(wù)3實(shí)訓(xùn)考核4目錄頁(yè)CONTENTSPAGE實(shí)訓(xùn)背景、目的我國(guó)絕大多數(shù)的動(dòng)物在其一生中或多或少的均使用過獸藥抗生素，而殘留在動(dòng)物性食品中的獸藥抗生素，將隨著食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人類的健康構(gòu)成潛在的威脅。為了確保食品安全和國(guó)民身體健康，促進(jìn)畜禽產(chǎn)品的發(fā)展，本實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目參照農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告《動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)-高效液相色譜法》對(duì)市售牛肉進(jìn)行環(huán)丙沙星獸藥殘留檢測(cè)。1.實(shí)訓(xùn)背景2.實(shí)訓(xùn)目的實(shí)訓(xùn)背景、目的鞏固高效液相色譜儀器使用；全面熟悉畜禽肉中獸藥殘留檢測(cè)要求與方法；熟悉樣品預(yù)處理、檢測(cè)和數(shù)據(jù)處理各環(huán)節(jié)關(guān)鍵操作；能獨(dú)立運(yùn)用高效液相色譜技術(shù)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行獸藥殘留檢測(cè)實(shí)訓(xùn)目的1.實(shí)訓(xùn)背景2.實(shí)訓(xùn)目的材料、儀器與設(shè)備材料（每小組）：新鮮市售牛肉儀器設(shè)備：高效液相色譜儀（配熒光檢測(cè)器）托盤天平（感量0.01g）分析天平（感量0.00001g）漩渦振蕩器、組織勻漿機(jī)離心機(jī)、30mL勻漿杯50mL離心管固相萃取柱（C18，100mg/mL）微孔濾膜（0.45μm）實(shí)訓(xùn)任務(wù)試劑配制樣品預(yù)處理樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)處理過渡頁(yè)TRANSITIONPAGE任務(wù)一：試劑配制請(qǐng)參照實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)，完成下列試劑的配制。（1）5.0mol/L氫氧化鈉溶液（2）0.3mol/L氫氧化鈉溶液（3）0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液（4）磷酸鹽緩沖溶液（5）環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（6）環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液任務(wù)二：樣品預(yù)處理1、試樣制備取絞碎后的供試樣品，作為供試試樣；取絞碎后的空白樣品，作為空白試樣；取絞碎后空白樣品，添加適宜濃度的對(duì)照溶液，作為空白添加試樣。準(zhǔn)確稱取牛肉樣品2±0.05g于30mL勻漿杯中，記錄數(shù)據(jù)。任務(wù)二：樣品預(yù)處理2、樣品提取取2±0.05g試樣，置30mL勻漿杯中，加磷酸鹽緩沖溶液10.0mL，10000r/min勻漿1min。將勻漿液轉(zhuǎn)入離心管中，中速振蕩5min，10000r/min，離心5min，取上清液，待用。任務(wù)二：樣品預(yù)處理2、樣品提取用磷酸鹽緩沖溶液10.0mL清洗刀頭及勻漿杯，轉(zhuǎn)入離心管，洗殘?jiān)?，混勻后，再中速振?min，10000r/min離心5min，取上清液。合并兩次上清液，混勻，備用。任務(wù)二：樣品預(yù)處理3、樣品凈化用固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2mL預(yù)洗。取上清液5.0mL過柱，用水1mL淋洗，擠干。用流動(dòng)相1.0mL洗脫，擠干，收集洗脫液。經(jīng)濾膜過濾后作為試樣溶液，供高效液相色譜法測(cè)定。任務(wù)三：樣品檢測(cè)1、色譜條件色譜柱：C18250mm4.6mm(i.d)，粒徑5μm，或相當(dāng)者；流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙睛(82+18，v/v)，使用前經(jīng)微孔濾膜過濾；流速：0.8mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)280nm；發(fā)射波長(zhǎng)450nm；柱溫：室溫進(jìn)樣量：20μL任務(wù)三：樣品檢測(cè)2、測(cè)定方法取試樣溶液和相應(yīng)的對(duì)照溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。對(duì)照溶液及試樣溶液中環(huán)丙沙星響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，對(duì)照溶液和試樣溶液的高效液相色譜圖分別見附錄A中圖A.1、圖A.2。任務(wù)三：樣品檢測(cè)2、測(cè)定方法任務(wù)四：數(shù)據(jù)處理1、抗生素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X——試料中抗生素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每克（ng/g）；A——試樣溶液中抗生素的峰面積；AS——對(duì)照溶液中抗生素的峰面積；CS——對(duì)照溶液中抗生素的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸鹽緩沖液的總體積，單位為毫升（mL）；V2——過固相萃取柱所用備用液體積，單位為毫升（mL）；V3——洗脫用流動(dòng)相體積，單位為毫升（mL）；M——供試試料的質(zhì)量，單位為克（g）。注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，平均值保留三位有效數(shù)字。任務(wù)四：數(shù)據(jù)處理2、加標(biāo)回收率P——加標(biāo)回收率，（%）；m——每個(gè)加標(biāo)樣，經(jīng)預(yù)處理以后所剩余抗生素的總質(zhì)量，單位為納克（ng）；m0——空白樣中抗生素的總質(zhì)量，單位為納克（ng）；ms——所加標(biāo)準(zhǔn)樣中抗生素的總質(zhì)量，單位為納克（ng）。數(shù)據(jù)結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后2位。任務(wù)四：數(shù)據(jù)處理3、RSD值

——三個(gè)平行加標(biāo)樣中抗生素質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值，單位為納克每克（ng/g）；n——平行樣品個(gè)數(shù)，為3；xi——每個(gè)平行樣品加標(biāo)樣中抗生素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每克（ng/g）。數(shù)據(jù)結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后2位。實(shí)訓(xùn)考核任務(wù)1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備-試劑配制

10%任務(wù)2