檢驗(yàn)中級(jí)考試復(fù)習(xí)要點(diǎn)

臨床免疫學(xué)：

—:免疫球蛋白

免疫球蛋白的酶解片段

在一定條件下，免疫球蛋白分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片

段。木瓜蛋白酶水解IgG的部位是在較鏈區(qū)二硫鍵連接的2條重鏈的近N端，可

將Ig裂解為兩個(gè)完全相同的Fab段和一個(gè)Fc段.一個(gè)Fab片段為單價(jià)，可與抗

原結(jié)合但不形成凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)，F(xiàn)c段無(wú)抗原結(jié)合活性，是Ig與效應(yīng)分子

或細(xì)胞相互作用的部位。胃蛋白酶作用于較鏈區(qū)二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C

端，水解Ig后可獲得一個(gè)F(ab')2片段和一些小片段pFc'。F(ab')2

是可同時(shí)結(jié)合兩個(gè)抗原表位，故與抗原結(jié)合可發(fā)生凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)。pFc'

最終可被降解，無(wú)生物學(xué)作用。

免疫球蛋白的類型

類：Ig重鏈C區(qū)所含抗原表位不同，據(jù)此可將重鏈分為Y、a、口、6、

e鏈5種,與此對(duì)應(yīng)的Ig分為5類,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。

亞類：同一類免疫球蛋白其重鏈的抗原性及二硫鍵數(shù)目和位置不同，據(jù)此可

將Ig又可分為亞類。IgG有IgGl?IgG4四個(gè)亞類;IgA有IgAl和IgA2

兩個(gè)亞類；IgM有IgMl和IgM2兩個(gè)亞類；IgD和IgE尚未發(fā)現(xiàn)亞類。

型：根據(jù)Ig輕鏈C區(qū)所含抗原表位的不同，可將Ig輕鏈分為2種：X和

K,與此對(duì)應(yīng)的免疫球蛋白分為X和K兩型。

亞型：同一型免疫球蛋白中，根據(jù)其輕鏈C區(qū)N端氨基酸排列的差異，又可

分為不同的亞型。

一、IgG

血清含量最高，半衰期最長(zhǎng)；功能最多：結(jié)合抗原、激活補(bǔ)體、調(diào)理吞噬

并介導(dǎo)ADCC、通過(guò)胎盤、結(jié)合SPA0為再次免疫應(yīng)答的主要抗體：抗感染

的主要抗體(抗菌、抗病毒，抗毒素抗體)，并介導(dǎo)II、III型超敏反應(yīng)

二、IgM

分子量最大，不能通過(guò)血管壁，主要存在于血液和粘膜表面。是血管內(nèi)抗感

染的主要抗體。在個(gè)體發(fā)育過(guò)程和體液免疫應(yīng)答中均是最早合成和分泌的

抗體。臍帶血IgM增高提示胎兒有宮內(nèi)感染；感染過(guò)程中血清IgM水平升

高，說(shuō)明有近期感染。天然的血型抗體和類風(fēng)濕因子亦屬IgMo其激活補(bǔ)

體的能力比IgG強(qiáng)。膜表面IgM是B細(xì)胞抗原受體(BCR)的主要成分。只表

達(dá)mlgM是未成熟B細(xì)胞的標(biāo)志，記憶B細(xì)胞表面的mlgM逐漸消失。

三、IgA

血清型IgA：以單體形式存在。分泌型IgA(sIgA)：由J鏈連接的二聚體

和分泌片組成。合成和分泌的部位在腸道、呼吸道、乳腺、唾液腺和淚腺，

主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。是參與粘膜局部

免疫的主要抗體。嬰兒可從母親初乳中獲得分泌型IgA,是一種重要的自然

被動(dòng)免疫。

四、IgD

正常人血清IgD濃度很低，平均約0。03mg/mlo半壽期很短(僅3天)。

血清IgD的確切功能仍不清楚。B細(xì)胞表面的mlgD可作為B細(xì)胞分化發(fā)育

成熟的標(biāo)志，未成熟B細(xì)胞僅表達(dá)mlgM,成熟B細(xì)胞可同時(shí)表達(dá)mlgM和mlg

五、IgE

血清濃度極低，約為5X10-5mg/mloIgE為親細(xì)胞抗體，與肥大細(xì)胞、嗜

堿性粒細(xì)胞上的高親和力FceRI結(jié)合，引起I型超敏反應(yīng)。

含量由高到低:IgGIgMIgAIgDIgE

—：補(bǔ)體

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中有5種成分參與反應(yīng)，分屬3個(gè)系統(tǒng)：

1.反應(yīng)系統(tǒng)；

2.補(bǔ)體系統(tǒng)；

3.指示系統(tǒng)。

其中反應(yīng)系統(tǒng)（抗原與抗體）與指示系統(tǒng)（綿羊紅細(xì)胞與溶血素）爭(zhēng)奪補(bǔ)體

系統(tǒng)。

如先加入反應(yīng)系統(tǒng)和補(bǔ)體，給其以優(yōu)先結(jié)合補(bǔ)體的機(jī)會(huì)，如果反應(yīng)系統(tǒng)中存

在待測(cè)的抗體（或抗原），則抗原、抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補(bǔ)體，再加入指

示系統(tǒng)（SRBL與相應(yīng)溶血素），由于反應(yīng)中無(wú)游離的補(bǔ)體而不出現(xiàn)溶血，

為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽(yáng)性。如待測(cè)系統(tǒng)中不存在待檢的抗體或（抗原），則在液

體中仍有游離的補(bǔ)體存在，當(dāng)加入指示劑時(shí)會(huì)出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰

性。因此補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可用已知抗原來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗體，或用已知抗體來(lái)檢測(cè)

相應(yīng)抗原補(bǔ)體激活過(guò)程依據(jù)其起始順序不同，可分為三條途徑：①?gòu)?/p>

Clq-Clr2-Cls2開始的經(jīng)典途徑，抗原-抗體復(fù)合物為主要激活物；②由病

原微生物等提供接觸表面，從C3開始的旁路途徑，其不依賴于抗體；③通

過(guò)甘露聚糖結(jié)合凝集素MBL醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理糖基識(shí)別的凝集素激活

途。

補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的活化順序?yàn)镃142356789

三：免疫的概念

1.免疫防御（immunologicaldefence）指機(jī)體排斥外源性抗原異物的能力。

這是動(dòng)物藉以自凈、不受外來(lái)物質(zhì)干擾和保持物種純潔的生理機(jī)制。這種

功能一是抗感染，即傳統(tǒng)的免疫概念；二是排斥異種或同種異體的細(xì)胞和

器官，這是器官移植需要克服的主要障礙。這種能力低下時(shí)機(jī)體易出現(xiàn)免

疫缺陷病，而過(guò)高時(shí)易出現(xiàn)超敏反應(yīng)性組織損傷。

2.免疫自穩(wěn)（immunololgicalhomeostasis）指機(jī)體識(shí)別和清除自身衰老殘

損的組織、細(xì)胞的能力，這是機(jī)體藉以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要機(jī)制。

這種自身穩(wěn)定功能失調(diào)時(shí)易導(dǎo)致某些生理平衡的紊亂或者自身免疫病。

3.免疫監(jiān)視（immunologicalsurveillance）指機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞

的能力，機(jī)體藉以監(jiān)視和抑制惡性促瘤在體內(nèi)生長(zhǎng)。一旦功能低下，宿主

易患惡性腫瘤。

四：超敏反應(yīng)

n（溶細(xì)胞型或細(xì)III（免疫復(fù)合物型或

I（速發(fā)型）IV（遲發(fā)型）

胞毒型）血管炎型）

抗體IgEIgG、IgMIgG、IgM無(wú)

補(bǔ)體無(wú)來(lái)源:考試大網(wǎng)有有無(wú)

中性粒、肥大、嗜堿、Thl、CTL、單

細(xì)胞肥大、嗜堿（嗜酸）單核細(xì)胞

血小板核

過(guò)敏性休克（藥物、血清）；輸血反應(yīng)、新生兒Arthus反應(yīng)、血清

代表疾病接觸性皮炎等

皮膚過(guò)敏反應(yīng)（尊麻疹、濕溶血癥、自身免疫病、免疫復(fù)合物型腎

疹、血管神經(jīng)性水腫）；呼性溶貧、藥物過(guò)敏炎、系統(tǒng)性紅斑狼

吸道過(guò)敏反應(yīng)、消化道過(guò)敏性血細(xì)胞減少癥瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

反應(yīng)

五：MHC與HLA

主要組織相容性復(fù)合體（MHC）是一組存在于各種脊椎動(dòng)物某對(duì)染色體特定

區(qū)域的基因。MHC編碼的基因產(chǎn)物為主要組織相容性抗原（MHA）。

人類的MHC即HLA基因復(fù)合體位于人的第6對(duì)染色體的短臂上，是目前已知

最復(fù)雜的人類基因系統(tǒng)。I、II、III三類基因。HLA由400萬(wàn)堿基組成，傳

統(tǒng)上分為I、II、III三類基因。I類：包括經(jīng)典的HLA-A、B、C,非經(jīng)典的

HLA-E、F、G、H、X等；H類:包括經(jīng)典的HLA-DP、DQ、DR,非典型的HLA-DN、

DO、DM等；HI類：位于HLA-I、II類之間，由一些與補(bǔ)體和某些炎癥因子

編碼相關(guān)的基因組成。截止到1999年，已知的HLA等位基因數(shù)已超過(guò)1000

個(gè)，目數(shù)量仍在繼續(xù)增加

HLA基因復(fù)合體所表達(dá)的基因產(chǎn)物，除直接構(gòu)成同種異體移植排斥反應(yīng)的靶

抗原外，在免疫應(yīng)答的過(guò)程中發(fā)揮著重要調(diào)控作用，也反映著自身免疫性疾

病的基因易感性。

MHCI類分子可廣泛地表達(dá)于各種組織的有核細(xì)胞上，其表達(dá)受到多種因素

的調(diào)節(jié)，如IFN-a、8、丫等細(xì)胞因子可促進(jìn)其表達(dá)；

MHCIII類分子不是表達(dá)于細(xì)胞表面的膜分子，而是分布于血清及其他體液中

的可溶性分子

六：移植免疫

排斥反應(yīng)有兩種基本類型：宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR）和移植物抗宿主反應(yīng)

（GVHR）,臨床上多見(jiàn)是前者；根據(jù)發(fā)生的機(jī)制、時(shí)間、速度和臨床表現(xiàn)，

HVGR又可分為3種類型：超急排斥反應(yīng)；急性排斥反應(yīng)；慢性排斥反應(yīng)。

超急性排斥反應(yīng)

超急排斥反應(yīng)發(fā)生在移植物與受者血管接通的數(shù)分鐘到數(shù)小時(shí)內(nèi)，出現(xiàn)壞死

性血管炎表現(xiàn)，移植物功能喪失，患者有全身癥狀。發(fā)生的基本原因是受者體內(nèi)

存有抗供者移植物的預(yù)存抗體，與抗原結(jié)合，激活補(bǔ)體和凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致血管內(nèi)

凝血。常見(jiàn)于下列情況：①ABO血型不符；②由于多次妊娠或反復(fù)輸血等使受者

體內(nèi)存在抗HLA抗體;③移植物保存或處理不當(dāng)?shù)绕渌?。超急排斥發(fā)生迅速，

反應(yīng)強(qiáng)烈，不可逆轉(zhuǎn)；需立即切除移植物，否則會(huì)導(dǎo)致受者死亡。如果事先認(rèn)真

進(jìn)行ABO基至Rh血型檢查和交叉配合試驗(yàn)，多可避免這種現(xiàn)象的發(fā)生。

急性排斥反應(yīng)

急性排斥反應(yīng)是排斥反應(yīng)最常見(jiàn)的一種類型，多發(fā)生在移植后數(shù)周到1年

內(nèi)，發(fā)生迅速，臨床表現(xiàn)多有發(fā)熱、移植部位脹痛和移植器官功能減退等；病理

特點(diǎn)是移植物實(shí)質(zhì)和小血管壁上有以單個(gè)核細(xì)胞為主的細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)水腫與血

管損害，后期在大動(dòng)脈壁上有急性纖維素樣炎癥。急性排斥出現(xiàn)得早晚和反應(yīng)的

輕重與供——受者HLA相容程度有直接的關(guān)系，相容性高則反應(yīng)發(fā)生晚、癥狀輕、

有些可遲至移植后2年才出現(xiàn)。急性排斥反應(yīng)經(jīng)過(guò)及時(shí)恰當(dāng)?shù)拿庖咭种浦委煻嗫?/p>

緩解。

急性排斥反應(yīng)又分為兩種。急性體液排斥反應(yīng)：抗體激活補(bǔ)體，并有CD4+T

細(xì)胞參與，導(dǎo)致急性血管炎。急性細(xì)胞排斥反應(yīng)：CD8'CTL細(xì)胞的細(xì)胞毒作用、

CD4T和巨噬細(xì)胞的作用，導(dǎo)致急性間質(zhì)炎。

慢性排斥反應(yīng)

慢性排斥反應(yīng)屬于遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年之后，表現(xiàn)

為進(jìn)行性移植器官的功能減退直至喪失；病理特點(diǎn)是血管壁細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維

化和瘢痕形成，有時(shí)伴有血管硬化性改變。其機(jī)制可能為急性排斥細(xì)胞壞死的延

續(xù)；炎性細(xì)胞相關(guān)的慢性炎癥；抗體和細(xì)胞介導(dǎo)的內(nèi)皮損傷；管壁增厚和間質(zhì)纖

維化。本型反應(yīng)雖然進(jìn)展緩慢，但用免疫抑制治療無(wú)明顯的臨床效果。

以上屬宿主抗移植物反應(yīng)(HVGR)o移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR)多發(fā)生于同

種骨髓移植者，也可見(jiàn)于脾、胸腺和小腸移植中；此時(shí)患者的免疫狀態(tài)極度低下，

而移植物中豐富的免疫活性細(xì)胞則將受者細(xì)胞視為非己抗原，對(duì)其發(fā)生免疫應(yīng)

答；移植物的T細(xì)胞在受者淋巴組織中增殖并產(chǎn)生一系列損傷性效應(yīng)。GVHR分

為急性與慢性兩型。急性型多見(jiàn)，多發(fā)生于移植后3個(gè)月以內(nèi)，患者出現(xiàn)肝脾腫

大、高熱、皮疹和腹瀉等癥狀；雖是可逆性變化，但死亡率較高；慢性型由急性

型轉(zhuǎn)來(lái)，患者呈現(xiàn)嚴(yán)重的免疫失調(diào)，表現(xiàn)為全身消瘦，多個(gè)器官損害，以皮膚和

黏膜變化最突出，病人往往因嚴(yán)重感染或惡病質(zhì)而死亡。

移植排斥反應(yīng)的機(jī)制和過(guò)程與一般免疫應(yīng)答相似，只是參與細(xì)胞是一種特殊

類型的Tc細(xì)胞，稱為同種反應(yīng)型Tc細(xì)胞。這種Tc細(xì)胞能識(shí)別并殺傷遺傳學(xué)上

無(wú)關(guān)供體表達(dá)外來(lái)抗原分子的移植物中的靶細(xì)胞，從而導(dǎo)致組織不相容移植物的

排斥反應(yīng)。造成排斥反應(yīng)損傷效應(yīng)的機(jī)制除Tc細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用外，尚有

NK細(xì)胞介導(dǎo)的直接細(xì)胞毒作用和ADCC、抗體介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒作用和炎

癥效應(yīng)以及細(xì)胞因子介導(dǎo)的系列炎癥效應(yīng)等。在不同情況下，各種機(jī)制分別參與

的程度有所側(cè)重，所以不同類型排斥反應(yīng)的表現(xiàn)也不盡相同。

七：自身抗體的檢測(cè)

常見(jiàn)ANA熒光圖形及臨床意義如下：

1.均質(zhì)型：多是由抗DNP抗體所引起。也可由核小體抗體和抗雙鏈DNA抗體

引起。主要見(jiàn)于SLE,藥物性狼瘡。

2.斑點(diǎn)型：是由抗ENA抗體所引起。主要見(jiàn)于SLE、MCTD、PSS、SS等。高

滴度的斑點(diǎn)型常見(jiàn)于MCTDo

3.周邊型(又稱核膜型)：主要由抗dsDNA的抗體所引起。主要見(jiàn)于SLE。

特別是活動(dòng)期患者。

4.核仁型：主要見(jiàn)于硬皮病。相關(guān)抗體是抗核仁特異的低分子量RNA等。

5.著絲點(diǎn)型：主要見(jiàn)于局限性硬皮病及CREST綜合征。主要的靶抗原是著絲

點(diǎn)B抗原。

抗ENA抗體譜的臨床意義

1.抗Sm抗體

抗Sm抗體僅發(fā)現(xiàn)于SLE患者中，是SLE的血清標(biāo)志抗體，已列入SLE的診

斷標(biāo)

準(zhǔn)。約30%?40%的SLE患者抗Sm抗體陽(yáng)性，此抗體陰性不能排除SLE的診

斷。相對(duì)抗dsDNA抗體而言，抗Sm抗體水平不與SLE疾病的活動(dòng)性相關(guān)，

亦不與SLE的任何臨床表現(xiàn)相關(guān)，治療后的SLE患者也可存在抗Sm抗體陽(yáng)

性?？筍m抗體的檢測(cè)對(duì)早期、不典型的SLE或治療后的回顧性診斷具有很

大幫助。

2.抗核RNP抗體

抗核RNP（nuclearRNP,nRNP）抗體是診斷MCTD的重要血清學(xué)依據(jù)，列入

MCTD的診斷標(biāo)準(zhǔn)。因其抗原為含有U1RNA的核蛋白復(fù)合物，故而稱為U1RNP.

其在MCTD患者的陽(yáng)性檢出率可高達(dá)95%o無(wú)論在疾病的活動(dòng)期或是緩解期，

高滴度的抗RNP抗體均可持續(xù)存在。

抗nRNP抗體無(wú)疾病特異性，在其他自身免疫性疾病中陽(yáng)性檢出率如下：

SLE30%?40%,SS20%,進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化（PSS）10%?15%,皮肌炎（PM）

/多發(fā)性肌炎（DM）10%,偶爾也可見(jiàn)于RA和藥物誘發(fā)的狼瘡，不過(guò)滴度

均較MCTD患者低。

由于Sm和RNP是同一分子復(fù)合物（RNA一蛋白質(zhì)顆粒）中的不同抗原位點(diǎn)，

兩種抗原具有相關(guān)性，故抗Sm抗體陽(yáng)性常伴有抗RNP抗體陽(yáng)性，單一的抗

Sm抗體或抗RNP抗體陽(yáng)性較少見(jiàn)。

3.抗SSA/Ro抗體和抗SSB/La抗體

抗SSA/Bo抗體和抗SSB/La抗體是SS患者最常見(jiàn)的自身抗體。其陽(yáng)性檢

出率分別是70%?8096和40%,而抗SSB/La抗體的特異性高于抗SSA/Ro

抗體，可達(dá)50%X60%。該兩個(gè)抗體的同時(shí)檢測(cè)可提高對(duì)SS的診斷率。

部分SLE患者也有抗SSA/Ro抗體和抗SSB/La抗體的檢出，其陽(yáng)性率分別

為35%和15%左右。約60%的亞急性紅斑狼瘡（SCLE）患者，補(bǔ)體缺陷的SLE

患者和新生兒狼瘡患者可出現(xiàn)抗SSA/Ro抗體陽(yáng)性?？筍SA抗體可通過(guò)胎盤

進(jìn)入胎兒，引起新生兒狼瘡綜合征，出現(xiàn)典型的SLE皮損和不完全性心臟傳

導(dǎo)阻滯。另外，單獨(dú)出現(xiàn)抗SSA/Ro抗體陽(yáng)性的SLE患者，其腎炎或血管炎

的發(fā)生率較單獨(dú)出現(xiàn)抗SSB/La抗體陽(yáng)性的SLE患者高。因抗SSA/Ro抗體

與SSA/Ro抗原形成的免疫復(fù)合物，更易沉積于腎臟和血管壁，造成腎臟損

傷及血管炎。

4.抗Jo—1抗體

該抗體最常見(jiàn)于多發(fā)性肌炎（polymyositis,PM）,故又稱為PM—1抗體。

具有抗Jo—1抗體特性的是分子量110kD和戴）80kD的多肽（核仁蛋白）。

抗Jo—l抗體在PM的陽(yáng)性檢出率可達(dá)40%~50%,在PM/DM患者的陽(yáng)性檢

出率為25%,單獨(dú)皮肌炎中的檢出率不足10%,在其他自身免疫性疾病中抗

Jo—1抗體為陰性，因而抗Jo—l抗體對(duì)診斷PM具有特異性。PM與硬皮病

重疊的患者，抗Jo-1抗體的陽(yáng)性率可高達(dá)85%,PSS/PM中為25%,PM

伴肺間質(zhì)纖維化者抗Jo-l抗體陽(yáng)性率可達(dá)60%?

5.抗Scl—70抗體

抗Scl—70抗體幾乎僅在進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮病（PSS）患者中檢出，抗體相

對(duì)應(yīng)的抗原分子量為70kD.故該抗體是PSS的特征抗體。在系統(tǒng)性硬化癥的

陽(yáng)性檢出率為20%?40%,在PSS的陽(yáng)性檢出率為40%?60%。在其他自身免

疫性疾病患者中極少有陽(yáng)性檢出，正常人均為陰性。

八：酶免疫技術(shù)

酷免疫技術(shù)的分類

酶免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物而

分為均相和異相兩種類型，實(shí)際上所有的標(biāo)記免疫測(cè)定均可分成這兩類。以

標(biāo)記抗體檢測(cè)標(biāo)本中的抗原為例，按照簡(jiǎn)單的形式是在試劑抗體過(guò)量的情況

下進(jìn)行，其反應(yīng)式如下：

Ab*+Ag---Ab*Ag+Ab*

Ab*Ag代表結(jié)合的標(biāo)記物，Ab*為游離的標(biāo)記物。如在抗原反應(yīng)后，先把

Ab*Ag與Ab*分離；然后測(cè)定Ab*Ag或Ab*中的標(biāo)記物的量，從而推算出標(biāo)

本中的抗原量，這種方法稱為異相法。如在抗原抗體反應(yīng)后Ab*Ag中的標(biāo)記

物*失去其特性，例如酶失去其活力，熒光物質(zhì)不顯熒光，則不需要進(jìn)行

Ab*Ag與Ab*的分離，可以直接測(cè)定游離的Ab*量，從而推算出標(biāo)本中的

Ag含量，這種方法稱為均相法。

在異相法中，抗原和抗體如在液體中反應(yīng)，分離游離和結(jié)合的標(biāo)記物的方法

有許多種。與放射免疫測(cè)定相類似的液相異相酶免疫技測(cè)定，在某些激素等

定量測(cè)定中也有應(yīng)用。但常用的酶免疫測(cè)定法為固相酶免疫測(cè)定。其特點(diǎn)是

將抗原或抗體制成固相制劑，這樣在與標(biāo)本中抗體或抗原反應(yīng)后，只需經(jīng)過(guò)

固相的洗滌，就可以達(dá)到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)的分離，大大簡(jiǎn)化了操

作步驟。這種被稱為EL1SA的檢測(cè)技術(shù)成為目前臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣的免

疫測(cè)定方法。

方法類型和操作步驟

ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要

的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標(biāo)記的抗原或抗體，③酶作用的底

物，根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型

的檢測(cè)方法。

（一）雙抗體夾心法：

雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原最常用的方法，操作步驟如下：

（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗

體及雜質(zhì)。

（2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與

同相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合

的物質(zhì)。

（3）加酶標(biāo)抗體：使同相免疫復(fù)合物上的抗原與腋標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌

未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的

LF相關(guān)o

（4）加晟物：酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原

的定性或定量。

根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，

即可雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。

（二）雙位點(diǎn)一步法：

在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的

單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶

標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步法不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反

應(yīng)時(shí)間，如果使用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提

高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。

在…步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后滯現(xiàn)象。

當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)

合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚

至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

（三）間接法測(cè)抗體：

間接法是檢測(cè)抗體時(shí)最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗-抗體檢測(cè)已

與固相結(jié)合的受檢抗體。故稱為間接法。操作步驟如下：

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗

原及雜質(zhì)。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體

復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及

血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過(guò)程中被洗去。

（3）加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)

記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如：欲

測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。本法只要更換不同

的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。

（四）競(jìng)爭(zhēng)法：

競(jìng)爭(zhēng)法可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，受檢抗原

和醐標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與同相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗

原的量呈反比。操作步驟如下：

（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌。

（2）待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體

反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無(wú)抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如

受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合，競(jìng)

爭(zhēng)性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相載體

的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫后，酶標(biāo)抗原與同相抗體

的結(jié)合可達(dá)最充分的量。洗滌。

（3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原最多，故顏色最深，參考

管顏色深度與待測(cè)管顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管

顏色越淡，表于標(biāo)本中抗原含量越多。

（五）捕獲法測(cè)IgM抗體

血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG伺時(shí)存在，后者會(huì)干擾

IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗體多用捕獲法。先將所有血清IgM（包括

異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在除去IgG后再測(cè)定特異性IgMo

操作步驟如下：

（1）將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgMo

（2）加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。

洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。

（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。

（4）加入針對(duì)特異性的酶標(biāo)抗體，使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。

（5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存

在，為陽(yáng)性反應(yīng)。

（六）親和素和生物素的EL1SA：親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。

分子量60kD,每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成，可以和4個(gè)生物素分子親密結(jié)合。

現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。生物素

（biotin）又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制

成的衍生物，生物素一羥基玻璃亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide,

BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。

親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強(qiáng)，親和力大，兩者

一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個(gè)親和素分子有4個(gè)生物素分子的結(jié)合位置，

可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親

和素和生物素與ELIS偶聯(lián)起來(lái)，就可大大提高檢測(cè)的靈敏度。

早早孕膠體金標(biāo)試條檢測(cè)測(cè)HCG原理

本檢測(cè)試條以雙抗體夾心法為基礎(chǔ)，采用免疫層析金標(biāo)記技術(shù)，快速檢測(cè)尿

液中的HCG。兩個(gè)抗人B-hCG單克隆抗體，?個(gè)抗體吸附于硝酸纖維素薄

膜(NC)上，另一個(gè)抗體結(jié)合于金溶膠顆粒表面。尿液中hCG先與NC膜上

的抗體結(jié)合，然后再與金標(biāo)單抗溶液反應(yīng)，于是形成抗體-hCG-金標(biāo)抗體的

夾心式復(fù)合物，顯現(xiàn)出紅色的沉淀線。多余的金標(biāo)記抗HCG移行至C區(qū)時(shí)被

抗小鼠IgG抗體捕獲，而顯示出紅色對(duì)照線條

I-：生物素-親和素系統(tǒng)基本類型及原理：

基本類型有兩種，一類以游離親和素為中間物，分別連接包含生物素大分子

的待檢反應(yīng)體系和標(biāo)記生物素，稱為BAB法；后來(lái)又在此基礎(chǔ)上發(fā)展了親和

素-生物素化酶復(fù)合物技術(shù)(ABC)。另一類是直接用標(biāo)記親和素連接生物素

化大分子反應(yīng)體系進(jìn)行檢測(cè)的BA法，或稱標(biāo)記親和素-生物素法(LAB)。

此外，依據(jù)待檢反應(yīng)體系中所用的是生物素化第一抗體或生物素化第二抗

體，又分為醫(yī)I學(xué)教育網(wǎng)搜集整理直接法BAS和間接法BASo

臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)：

一：血漿脂蛋白：

1：分類：電泳法a,pre-B,B,CM(幾乎停留在原點(diǎn))

正極____________?負(fù)極(原點(diǎn))

超速離心法：CM,VLDL(pre-P),LDLIDL(P),HDL(a)

2：人血漿脂蛋白的特征

VariablCMVLDLIDLLDLHDLLp(a)

e

密度<0.950.95?1.0061.019?1.063?1.040?

(g/ml)1.0061.0191.0631.2101.130

原點(diǎn)前P廠和前B之a(chǎn)-前廠

電泳位置

間

分子量0.4—305-10X3.9~4.82.75X1.8~3.62.9~3.7

(daitons)X109106X106106X103X106

顆粒直徑>7025?7022-2419-234~1025?30

(nm)

脂質(zhì)：蛋白99:199:1085:1580:2050:5075:25?

質(zhì)比64:36

外源性內(nèi)源性內(nèi)源性TG、C'l:PLCE、PL

主要脂質(zhì)

TGTGCE

主要栽脂AIB100B100B100AI(a)

蛋白B48CIEAllB100

CICIID

CIIcm

cmE

小腸粘肝細(xì)胞血漿血漿肝、腸、肝細(xì)胞

合成部位

膜細(xì)胞血漿

轉(zhuǎn)運(yùn)外轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源逆向轉(zhuǎn)運(yùn)未知

功能

源性TG源性TG性TG、CE性CECE

3：

人高脂蛋白血癥分型及其特征

n型

I型HI型W型V型

Ila11b

增加的CMftLDLtLDLtIDLtVLDLtCMt

脂蛋白VLDLtVLDLt

血漿脂質(zhì)TC正?；騎CtttTCttTCttTC正?；騎C正?；騮

tTG正常TGtfTGftTGttt

Ch/TGTGttt>1.6>1.0TGtt<0.6

<0.2>0.6~1.6

病因LPL缺失LDL受體不明ApoE異不明（內(nèi)因LPL缺失（雜

ApoCII缺失異常常性高脂血合子，部

（外因性高(E2/2)癥）分）（外因性和

脂血癥）內(nèi)因性混合型

高脂血癥）

臨床所見(jiàn)

發(fā)病時(shí)期兒童期兒童期?成人成人成人兒童期?成人

癥狀肝、脾大、肝、脾大、角膜環(huán)肝、脾大肥胖、腹痛、肥胖、肝、脾

腹痛、胰腺（少見(jiàn)）、脾大大、腹痛、胰

炎、網(wǎng)膜止角膜環(huán)腺炎、網(wǎng)膜止

血癥血癥

冠狀動(dòng)脈發(fā)病率最高發(fā)病率中等發(fā)病率

疾患稀少高比較稀少

合并黃色瘤黃色斑塊、結(jié)節(jié)狀、

丘疹腱黃色瘤手掌條發(fā)疹

狀、結(jié)節(jié)

糖耐量正常狀發(fā)疹異常（多見(jiàn)）

正常異常異常（多見(jiàn)）

高尿酸血癥無(wú)（多見(jiàn)）多見(jiàn)

無(wú)少見(jiàn)多見(jiàn)

遺傳隱性遺傳顯性遺傳隱性遺顯性遺傳不明

傳

出現(xiàn)頻率稀少多見(jiàn)少見(jiàn)最多見(jiàn)稀少

混E

血清靜置試驗(yàn)上層混濁透明少有混濁混濁上層乳濁

偶

下層透明下層混濁

濁

4：人血漿主要載脂蛋白的結(jié)構(gòu)、功能、及含量

分子量

載脂蛋氨基酸血漿濃度

(dalton脂蛋白載體功能合成部位

白殘基數(shù)

s)(g/D

AI28300243HDL,CM穩(wěn)定HDL結(jié)構(gòu)，LCAT輔因

1.00^1.6

子，肝、腸

0

識(shí)別HDL受體

All17500*77X2HDL激活HTGL,抑制LCAT,

0.30~0.4

參與識(shí)肝、腸

0

別HDL受體

AIV46000371CM,HDL參與脂肪吸收，膽固醇酯

0.10~0.1

逆向轉(zhuǎn)腸

8

運(yùn)，活化LCAT

B1005127234536VLDL,IDL,轉(zhuǎn)運(yùn)TG、TC,識(shí)別LDL受0.60^1.1

肝

LDL體2

B482640002152CM促進(jìn)腸CM形成，轉(zhuǎn)運(yùn)外

腸

源TG

CI650057CM,VLDL,HDL0.03~0.0

激活LCAT(?)肝

7

CII880079CM,VLDL,HDL0.03~0.0

LPL輔因子肝

5

cnio~2890079CM,VLDL,HDL0.08~0.1

抑制ApoCiI激活LPL肝

2

D22000169HDL0.02~0.0

轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇酯肝

4

E34145299CM,VLDL,HDL促進(jìn)CM殘粒和IDL的攝0.03~0.0

肝

取6

H36281326CM,VLDL,IDL激活LPL,抑制內(nèi)源凝血

旁路激活?

HDL

J70000127IIDL,VHDL溶解和轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)肝

(a)1870004529Lp(a)抑制纖維蛋白溶解酶活UI-0~0.3

性

662000

-：糖代謝：

1：血糖的來(lái)源和去路

人體血糖的水平受到什么因素的影響呢？從上游的來(lái)源到下游的去路，我們

分析一下。

血液中的葡萄糖稱為血糖?？崭箷r(shí)血糖濃度為3.61~6.llmmol/Lo

血糖恒定的主要意義是保證中樞神經(jīng)的供能。腦細(xì)胞所需的能量幾乎完全直

接來(lái)自血糖。

血糖濃度之所以能維持相對(duì)恒定，是由于其來(lái)源與去路能保持動(dòng)態(tài)平衡的結(jié)

果。

1.血糖來(lái)源

(1)糖類消化吸收：食物中的糖類消化吸收入血，這是血糖最主要的來(lái)源。

(2)肝糖原分解：短期饑餓后，肝中儲(chǔ)存的糖原分解成葡萄糖進(jìn)入血液，

(3)糖異生作用：在較長(zhǎng)時(shí)間饑餓后，氨基酸、甘油等非糖物質(zhì)在肝內(nèi)合

成葡萄糖。

(4)其他單糖的轉(zhuǎn)化。

2.血糖去路

(1)氧化分解：葡萄糖在組織細(xì)胞中通過(guò)有氧氧化和無(wú)氧酵解產(chǎn)生ATP,

為細(xì)胞代謝供給能量，此為血糖的主要去路。

(2)合成糖原：進(jìn)食后，肝和肌肉等組織將葡萄糖合成糖原以儲(chǔ)存。

(3)轉(zhuǎn)化成非糖物質(zhì)：轉(zhuǎn)化為甘油、脂肪酸以合成脂肪；轉(zhuǎn)化為氨基酸以

合成蛋白質(zhì)。

(4)轉(zhuǎn)變成其他糖或糖衍生物，如核糖、脫氧核糖、氨基多糖等。

(5)血糖濃度高于腎閾(8.9~9.9mmol/L,160~180mg/dl)時(shí)可隨尿排

出一部分。

2：糖尿病的分型

糖尿病分1型糖尿病和2型糖尿病。在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的

比例約為95%。

其中1型糖尿病多發(fā)生于青少年，因胰島素分泌缺乏，必須依賴外源性胰島

素補(bǔ)充以維持生命；

2型糖尿病多見(jiàn)于中、老年人，其胰島素的分泌量并不低，甚至還偏高，臨

床表現(xiàn)為機(jī)體對(duì)胰島素不夠敏感，即胰島素抵抗。

I型特點(diǎn)：常見(jiàn)于青少年；起病較急；血漿胰島素及C肽含量低，糖耐量曲線呈

低平狀態(tài)；8細(xì)胞的自身免疫性損傷是重要的發(fā)病機(jī)制，多可檢出自身抗體;

治療依賴胰島素為主；易發(fā)生酮癥酸中毒；遺傳因素在發(fā)病中起重要作用，與

HLA相關(guān)

H型特點(diǎn)：典型病例常見(jiàn)于肥胖的中老年成人；起病較慢；血漿中胰島素含量絕

對(duì)值并不降低，但在糖刺激后呈延遲釋放；ICA等自身抗體呈陰性；單用口服

降糖藥一般可以控制血糖；發(fā)生酮癥酸中毒的比例不如I型；有遺傳傾向，但

與HLA基因型無(wú)關(guān)

尿拄出

尿中極融

3：OGTT試驗(yàn)

葡萄糖耐量試驗(yàn)的方法

1.做OGTT試驗(yàn)前3天,停止胰島素治療，可正常飲食，每天飲食中碳水化

合物含量不應(yīng)低于150克（但要控制在250-300克范圍），并且維持正

?；顒?dòng)。

2.次日晨空腹抽取血液2ml,抗凝，測(cè)定血漿葡萄糖，此為空腹血糖。

3.在5分鐘之內(nèi)飲入300毫升含75克葡萄糖的糖水（對(duì)于兒童則中按每

千克體重給L75克葡萄糖，計(jì)算口服葡萄糖用量，直至達(dá)到75克葡萄糖

時(shí)止），喝糖水后30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)分別靜脈取血一次，并留取尿

液做尿糖定性試驗(yàn)。整個(gè)試驗(yàn)中不可吸煙、喝咖啡、喝茶或進(jìn)食，應(yīng)安靜

地坐在椅子上。

4.測(cè)定血糖濃度，并繪制耐糖曲線：將各次所測(cè)得的血糖濃度與對(duì)應(yīng)的時(shí)

間作圖，繪制糖耐量曲線。

正常參考值：見(jiàn)下表。

不同年齡段糖耐量結(jié)果的血糖值上限（mmol/L）

年齡

時(shí)限（分）

40歲以下40?49歲50?59歲60?69歲70歲以上

空腹6.96.96.96.96.9

3011.111.111.411.5511.9

6010.5410.5411.111.5512.2

1208.338.338.68.889.16

1806.96.96.96.96.9

結(jié)果判斷

服葡萄糖后各時(shí)限血糖或空腹血糖、高峰值與2小時(shí)血糖值大于相應(yīng)年齡的

正常上限者可診斷為糖尿病。如一點(diǎn)或一點(diǎn)以上血糖值超過(guò)正常上限，而未達(dá)到

糖尿病標(biāo)準(zhǔn)，則為糖耐量異常。各時(shí)限血糖均在正常上限內(nèi)，屬正常。

臨床意義

1.OGTT對(duì)隱性糖尿病診斷有幫助，在實(shí)際應(yīng)用中亦可簡(jiǎn)化OGTT,即只取空

腹和服糖后2小時(shí)標(biāo)本測(cè)定血糖值，一般認(rèn)為2小時(shí)值是關(guān)鍵性的。

2.內(nèi)分泌疾病，如腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)疾病（如柯興綜合征），有70獷80%

病人有糖耐量降低；反之腎上腺皮質(zhì)功能減退，垂體前葉功能不全等，

都可呈現(xiàn)低平糖耐量曲線。

3.慢性胰腺炎患者常呈現(xiàn)糖尿病曲線。

4.肝臟疾病，慢性肝炎患者可出現(xiàn)糖耐量降低。

5.心肌梗塞的急性期可能出現(xiàn)糖耐量降低，這可能與病人處于應(yīng)激狀態(tài)有

關(guān)。

6.肥胖癥可出現(xiàn)糖耐量曲線異常，由于醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)脂肪細(xì)胞對(duì)胰島

素不敏感，糖耐量常可降低。單純性肥胖糖耐量亦可正?；虺实推角€。

7.腎性糖尿：由于腎小管重吸收機(jī)能減低，腎糖閾下降，以致腎小球?yàn)V液

中正常濃度的葡萄糖也不能完全重吸收，此時(shí)出現(xiàn)的糖尿，稱為腎性糖

尿。

8.急性肝炎患者服用葡萄糖后在0.5?1.5小時(shí)之間血糖急劇增高，可超過(guò)

正常。

四：三竣酸循環(huán)

三竣酸循環(huán)-基本介紹

真核生物的線粒體和原核生物的

細(xì)胞質(zhì)是三竣酸循環(huán)的場(chǎng)所。它

是呼吸作用過(guò)程中的一步，但在

需氧型生物中，它先于呼吸鏈發(fā)

生。厭氧型生物則首先遵循同樣

的途徑分解高能有機(jī)化合物，例

如糖酵解，但之后并不進(jìn)行三竣

酸循環(huán)，而是進(jìn)行不需要氧氣參

與的發(fā)酵過(guò)程。

三殘酸循環(huán)-生理意義

1、三竣酸循環(huán)是機(jī)體獲取能量的

主要方式。1個(gè)分子葡萄糖經(jīng)無(wú)氧

三較酸循環(huán)

酵解僅凈生成2個(gè)分子ATP,崎

氧氧化可凈生成38個(gè)ATP,其中

三竣酸循環(huán)生成24個(gè)