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放散試驗(yàn)原理紅細(xì)胞上抗原與血清中抗體在適合條件下發(fā)生凝集或致敏,這種結(jié)合是可逆。如改變一些物理?xiàng)l件,抗體又可從結(jié)合細(xì)胞上放散,再以對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞判定放散液內(nèi)抗體種類(lèi)并測(cè)定其強(qiáng)度,用以判定原來(lái)紅細(xì)胞上抗原型別。這種方法慣用于ABO亞型判定、全凝集或多凝集紅細(xì)胞定型、類(lèi)B判定以及新生兒溶血病診療等放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第1頁(yè)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第2頁(yè)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第3頁(yè)放散試驗(yàn)方法放散試驗(yàn)方法很多,ABO血型IgM抗體以熱放散法為慣用。Rh血型IgG抗體以乙醚放散法為慣用。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第4頁(yè)加熱放散法試劑操作注意事項(xiàng)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第5頁(yè)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第6頁(yè)加熱放散法試劑抗A和抗B分型血清。2%A型和B型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。受檢紅細(xì)胞。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第7頁(yè)加熱放散法操作1.將受檢紅細(xì)胞以大量生理鹽水洗滌3次,末次洗滌后,將鹽水除盡,取壓實(shí)紅細(xì)胞l份,分別與2份抗A和抗B分型血清混合。置4℃lh,每隔10min將試管振搖1次,使充分混合。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第8頁(yè)加熱放散法操作2.離心去除上清液,以4℃冷鹽水洗滌紅細(xì)胞3-4次,傾去洗滌液,留取壓實(shí)紅細(xì)胞,加1/2容積生理鹽水(如放散液不立刻進(jìn)行檢驗(yàn),應(yīng)以AB型血清代理生理鹽水),置56℃水浴中10min,每隔15s振搖l次,使吸附在紅細(xì)胞上抗體充分放散。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第9頁(yè)加熱放散法操作3.立刻以3000r/min離心,離心時(shí)套管內(nèi)放溫水,使溫度盡可能保持在56℃,分離得上清液即為放散液。4.將放散液用2%A型和B型試劑紅細(xì)胞判定抗體,即可檢出受檢紅細(xì)胞血型。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第10頁(yè)加熱放散法操作如試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)判定A亞型,則可用已知A亞型紅細(xì)胞同時(shí)作放散試驗(yàn),按放散液抗體強(qiáng)度A1﹤A2﹤A3﹤Ax﹤Am,判定受檢紅細(xì)胞亞型型別,B亞型放散液判定方法相同。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第11頁(yè)加熱放散法注意事項(xiàng)1.為了使放散液內(nèi)含有最多抗體,吸收血清量應(yīng)加大。2.放散時(shí),應(yīng)嚴(yán)格注意溫度和時(shí)間。溫度過(guò)高紅細(xì)胞易溶解;溫度過(guò)低,抗體從紅細(xì)胞上放散不完全。3.直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性紅細(xì)胞,如新生兒溶血病患兒或本身免疫性溶血性貧血患者,經(jīng)洗滌后即可作抗體放散試驗(yàn)。4.放散液中抗體易變性,故應(yīng)立刻進(jìn)行判定。若需保留,應(yīng)將抗體放散于選定AB型血清或牛白蛋白液中。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第12頁(yè)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第13頁(yè)乙醚放散法試劑操作特點(diǎn)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第14頁(yè)乙醚放散法試劑受檢者血清對(duì)應(yīng)抗原紅細(xì)胞(抗凝血)乙醚(分析試劑)AB血清放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第15頁(yè)乙醚放散法操作取含有對(duì)應(yīng)抗抗原抗凝血,離心后吸去血漿,加大量生理鹽水,洗滌1次,離心,取壓實(shí)紅細(xì)胞備用。取受檢者血清5ml,加壓實(shí)紅細(xì)胞1ml,混勻后放在適當(dāng)溫度中1小時(shí),在此期間要搖勻1-2次。離心。離心后取出,將上清液吸出另放1管,判定上清液中抗體。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第16頁(yè)乙醚放散法操作將紅細(xì)胞用鹽水洗滌3次,離心壓實(shí)紅細(xì)胞。取1體積壓實(shí)紅細(xì)胞,加1體積AB型血清或生理鹽水和2體積乙醚,顛倒搖勻10min,然后以3000r/min離心5min.離心后即分成3層,最上層是乙醚,中層是細(xì)胞基質(zhì),下層是含有抗體放散液,其色深紅。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第17頁(yè)放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第18頁(yè)乙醚放散法操作用清潔吸管吸出放散液,若有混濁,可再離心1次。將放散液放置37℃水浴中30min,除盡乙醚,然后判定抗體。放散試驗(yàn)專(zhuān)題知識(shí)專(zhuān)家講座第19頁(yè)乙醚放散法特點(diǎn)本試驗(yàn)適合用于判定Rh抗體。最大優(yōu)點(diǎn)
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