啤酒廠化驗(yàn)室設(shè)計(jì)

廣西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院設(shè)計(jì)說(shuō)明書課題名稱：啤酒廠微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)姓名：廖國(guó)旭專業(yè)：食品藥品監(jiān)督管理班級(jí)：藥監(jiān)1031班起止日期：指導(dǎo)教師：韋麗前言設(shè)計(jì)化驗(yàn)室目的在于對(duì)啤酒原輔料及成品進(jìn)行檢驗(yàn)，確保啤酒的質(zhì)量與安全，全面控制和管理生產(chǎn)，保證和監(jiān)督啤酒質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)，提高質(zhì)量安全和達(dá)到食品可接受水平，保證飲品質(zhì)量，維護(hù)消費(fèi)者權(quán)利，為企業(yè)提供有力銷售保障，使企業(yè)強(qiáng)有力的立足于世界市場(chǎng)?；?yàn)室基本任務(wù)是對(duì)啤酒原輔料、半成品及成品進(jìn)行檢驗(yàn)，確保啤酒的質(zhì)量與安全，全面控制和管理生產(chǎn)，保證和監(jiān)督啤酒質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)，提高質(zhì)量安全和達(dá)到食品可接受水平，保證飲品質(zhì)量?；?yàn)室功能是為啤酒的質(zhì)量提供有效的保障，讓啤酒達(dá)到消費(fèi)者可接受水平，保證啤酒質(zhì)量，通過(guò)工作人員運(yùn)用精密的檢測(cè)儀器設(shè)備對(duì)啤酒進(jìn)行檢驗(yàn)與驗(yàn)證，以合格的身份進(jìn)入銷售市場(chǎng)，讓消費(fèi)者買的放心喝得開心?；?yàn)室主要由理化實(shí)驗(yàn)室、微生物室、值班室、辦公室、儀器室、天平室、更衣室、洗涮室、緩沖間、無(wú)菌室、準(zhǔn)備室。摘要對(duì)于啤酒生產(chǎn)來(lái)說(shuō)，質(zhì)量檢驗(yàn)的重要性是不言而寓的?；?yàn)室應(yīng)該擺脫僅僅進(jìn)行化驗(yàn)的狹隘定義，而要為啤酒生產(chǎn)的各個(gè)工序提供指導(dǎo)，對(duì)啤酒質(zhì)量進(jìn)行有效的控制。為保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，就要從多個(gè)方面對(duì)化驗(yàn)室進(jìn)行建造，建立合理完善的管理制度。

本分析化驗(yàn)室主要擔(dān)任本廠所有原料、半成品及成品的檢測(cè),起到控制和管理生產(chǎn),保證和監(jiān)督本廠生產(chǎn)的味精的質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)的作用,也為開發(fā)新產(chǎn)品、制定合理的工藝參數(shù)提供數(shù)據(jù)依據(jù).本分析化驗(yàn)室主要包括:辦公室、儀器室、試劑室、理化實(shí)驗(yàn)室、準(zhǔn)備室、微生物檢驗(yàn)室.

啤酒廠分析化驗(yàn)室的主要任務(wù)是對(duì)原材料分析、半成品化驗(yàn)分析、成品化驗(yàn)分析起到控制和管理生產(chǎn)，保證和監(jiān)督食品質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)作用。在成品成廠時(shí)，必須對(duì)出廠的各規(guī)格啤酒，經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)，各理化指標(biāo)、技術(shù)質(zhì)量均要符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，以保證人民健康和商品信譽(yù)。本分析化驗(yàn)室的整體目標(biāo)是完成對(duì)原料、輔料、半成品及成品的檢測(cè)和質(zhì)量控制，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。并對(duì)新產(chǎn)品、新工藝的開發(fā)。目錄1.啤酒原料、半成品及成品的檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)······················41.2原料的檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)······································41.3半成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)······································41.4成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)········································52.啤酒原料、半成品及成品的檢測(cè)方法····························62.1啤酒原料的檢測(cè)方法········································62.2啤酒半成品的檢測(cè)方法···································72.3啤酒成品的檢測(cè)方法······································7-233.試劑和儀器清單·············································243.1試劑清單·················································253.2玻璃儀器清單············································263.3設(shè)備清單················································273.4化驗(yàn)室的月試劑消耗量······································274.化驗(yàn)室的平面布置圖及設(shè)計(jì)說(shuō)明································284.1化驗(yàn)室設(shè)置···············································294.2化驗(yàn)室的平面布置圖·······································304.3設(shè)計(jì)說(shuō)明（包括水、電、平面布置說(shuō)1明）······················315.化驗(yàn)室人員配制和組織管理····································326.化驗(yàn)室的崗位責(zé)任制··········································347.參考文獻(xiàn)····················································368.謝辭···················································361.啤酒原料、半成品及成品的檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)1.1啤酒半成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)序號(hào)微生物檢驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)1致病菌、厭氧菌不得檢出2乳酸菌數(shù)≥1×106cfu/mL1.2啤酒成品檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)序號(hào)微生物檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)1菌落總數(shù)≤502大腸菌群≤33致病菌不得檢出2.啤酒半成品及成品的檢測(cè)方法2.1半成品2.1.1酵母死活細(xì)胞（死亡率）的測(cè)定活的菌體，由于新陳代謝不停的進(jìn)行著，細(xì)胞內(nèi)氧化還原值（rH）較小，而還原力強(qiáng)。這時(shí)如有像美藍(lán)那樣的無(wú)毒染料進(jìn)入活的細(xì)胞內(nèi)，即被還原脫色：而死的細(xì)胞代謝停止，無(wú)還原力，即被染成藍(lán)色。美藍(lán)無(wú)毒，且能為活細(xì)胞還原成無(wú)色故多用于區(qū)別細(xì)胞的死活。但美藍(lán)濃度、作用時(shí)間等都用影響，因此以制片后五分鐘內(nèi)計(jì)算的死細(xì)胞數(shù)為據(jù)。檢查方法：取0.1%美藍(lán)一滴，置載玻片中央，然后去酒母液少許和入美藍(lán)液中，攪拌均勻，加蓋玻片，在顯微鏡下檢查數(shù)已變藍(lán)的細(xì)胞及未變藍(lán)的細(xì)胞（可數(shù)5~6個(gè)視野的細(xì)胞數(shù)），計(jì)算死細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率。死亡率的計(jì)算：酵母死亡率一般用百分?jǐn)?shù)表示，即死亡細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)，在顯微鏡下數(shù)一定的細(xì)胞數(shù)，并記錄死活細(xì)胞數(shù)，按下式計(jì)算死亡率死亡率=b/a%2.2成品2.2.1志賀氏菌檢驗(yàn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中志賀氏菌(Shigella)的檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中志賀氏菌的檢驗(yàn)。設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：a恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃；b冰箱：2℃～5℃；c膜過(guò)濾系統(tǒng)；d厭氧培養(yǎng)裝置：41.5℃±1℃；e電子天平：感量0.1g；f顯微鏡：10×～100×；g均質(zhì)器；h振蕩器；i無(wú)菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭；j無(wú)菌均質(zhì)杯或無(wú)菌均質(zhì)袋：容量500mL；k無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm；lpH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙；m全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。培養(yǎng)基和試劑a志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素。b麥康凱（MAC）瓊脂。c木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽（XLD）瓊脂。d志賀氏菌顯色培養(yǎng)基。e三糖鐵（TSI）瓊脂。f營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面。g半固體瓊脂。h葡萄糖銨培養(yǎng)基。i尿素瓊脂。jβ-半乳糖苷酶培養(yǎng)基。k氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。l糖發(fā)酵管。m西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基。n粘液酸鹽培養(yǎng)基。o蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑。p志賀氏菌屬診斷血清。q生化鑒定試劑盒。操作步驟增菌以無(wú)菌操作取檢樣25g（mL），加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min～10000r/min均質(zhì)；或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1min～2min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±１℃，厭氧培養(yǎng)16h～20h。分離取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于36℃1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個(gè)菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見(jiàn)表1。表1志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板志賀氏菌的菌落特征MAC瓊脂無(wú)色至淺粉紅色，半透明、光滑、濕潤(rùn)、圓形、邊緣整齊或不齊XLD瓊脂粉紅色至無(wú)色，半透明、光滑、濕潤(rùn)、圓形、邊緣整齊或不齊志賀氏菌顯色培養(yǎng)基按照顯色培養(yǎng)基的說(shuō)明進(jìn)行判定初步生化試驗(yàn)自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面各一管，置36℃1℃培養(yǎng)20h～24h，分別觀察結(jié)果。凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無(wú)動(dòng)力的菌株，挑取其中已培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型。0生化試驗(yàn)及附加生化試驗(yàn)1生化試驗(yàn)用中已培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，進(jìn)行生化試驗(yàn)，即β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗(yàn)。除宋內(nèi)氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌13型的鳥氨酸陽(yáng)性;宋內(nèi)氏菌和痢疾志賀氏菌1型，鮑氏志賀氏菌13型的β-半乳糖苷酶為陽(yáng)性以外，其余生化試驗(yàn)志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。另外由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似，必要時(shí)還需加做靛基質(zhì)、甘露醇、棉子糖、甘油試驗(yàn)，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬。志賀氏菌屬生化特性見(jiàn)表2。表2志賀氏菌屬四個(gè)群的生化特征生化反應(yīng)A群：痢疾志賀氏菌B群：福氏志賀氏菌C群：鮑氏志賀氏菌D群：宋內(nèi)氏志賀氏菌?-半乳糖苷酶－a-－a+尿素－－－－賴氨酸脫羧酶－－－－鳥氨酸脫羧酶－－－b+水楊苷－－－－七葉苷－－－－靛基質(zhì)－/＋(＋)－/＋－甘露醇－＋c＋+棉子糖－＋－＋甘油(＋)－(＋)d注：+表示陽(yáng)性；-表示陰性；-/+表示多數(shù)陰性；+/-表示多數(shù)陽(yáng)性；（+）表示遲緩陽(yáng)性；d表示有不同生化型。a痢疾志賀1型和鮑氏13型為陽(yáng)性。b鮑氏13型為鳥氨酸陽(yáng)性。c福氏4型和6型常見(jiàn)甘露醇陰性變種。2附加生化實(shí)驗(yàn)由于某些不活潑的大腸埃希氏菌（anaerogenicE.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes堿性-異型）菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集；因此前面生化實(shí)驗(yàn)符合志賀氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)(36℃培養(yǎng)24h～48h)。志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D菌的生化特性區(qū)別見(jiàn)表3。表3志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D菌的生化特性區(qū)別生化反應(yīng)A群：痢疾志賀氏菌B群：福氏志賀氏菌C群：鮑氏志賀氏菌D群：宋內(nèi)氏志賀氏菌大腸埃希氏菌A-D菌葡萄糖銨－－－－＋＋西蒙氏檸檬酸鹽－－－－dd粘液酸鹽－－－d＋d注1：+表示陽(yáng)性；-表示陰性；d表示有不同生化型。注2：在葡萄糖銨、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)三項(xiàng)反應(yīng)中志賀氏菌一般為陰性，而不活潑的大腸埃希氏菌、A-D（堿性-異型）菌至少有一項(xiàng)反應(yīng)為陽(yáng)性。3如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)表3的初步判斷結(jié)果，用4.3.1中已培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。4結(jié)果報(bào)告綜合以上生化試驗(yàn)的結(jié)果，報(bào)告25g（mL）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。2.2.3沙門氏菌檢驗(yàn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中沙門氏菌（Salmonella）的檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)。設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1）冰箱：2℃～5℃。2）恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃，42℃±1℃。3）均質(zhì)器。4）振蕩器。5）電子天平：感量0.1g。6）無(wú)菌錐形瓶:容量500mL，250mL。7）無(wú)菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭。8）無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。9）無(wú)菌試管：3mm×50mm、10mm×75mm。10）無(wú)菌毛細(xì)管。11）pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙。12）全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。培養(yǎng)基和試劑1）緩沖蛋白胨水（BPW）。2）四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液。3）亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液。4）亞硫酸鉍（BS）瓊脂。5）HE瓊脂。6）木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂。7）沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。8）三糖鐵（TSI）瓊脂。9）蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑。10）尿素瓊脂（pH7.2）。11）氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基。12）賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。13）糖發(fā)酵管。14）鄰硝基酚β-D半乳糖苷（ONΜG）培養(yǎng)基。15）半固體瓊脂。16）丙二酸鈉培養(yǎng)基。17）沙門氏菌O和H診斷血清。18）生化鑒定試劑盒。操作步驟.1前增菌稱取25g（mL）樣品放入盛有225mLBPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或置于盛有225mLBPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測(cè)定pH值，用1mol/mL無(wú)菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.8±0.2。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45℃以下不超過(guò)15min,或2℃～5℃不超過(guò)18h解凍。.2增菌輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時(shí)，另取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。.2分離分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個(gè)BS瓊脂平板和一個(gè)XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40h～48h（BS瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落,各個(gè)平板上的菌落特征見(jiàn)表1。表1沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌BS瓊脂菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基按照顯色培養(yǎng)基的說(shuō)明進(jìn)行判定。.3生化試驗(yàn)自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)，沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。表2沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果三糖鐵瓊脂賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基初步判斷斜面底層產(chǎn)氣硫化氫KA＋（－）＋（－）＋可疑沙門氏菌屬KA＋（－）＋（－）－可疑沙門氏菌屬AA＋（－）＋（－）＋可疑沙門氏菌屬AA＋/－＋/－－非沙門氏菌KK＋/－＋/－＋/－非沙門氏菌注：K：產(chǎn)堿，A：產(chǎn)酸；＋：陽(yáng)性，－：陰性；＋（－）：多數(shù)陽(yáng)性，少數(shù)陰性；＋/－：陽(yáng)性或陰性。接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí),可直接接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h，按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于2℃～5℃或室溫至少保留24h，以備必要時(shí)復(fù)查。表3沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表反應(yīng)序號(hào)硫化氫（H2S）靛基質(zhì)pH7.2尿素氰化鉀（KCN）賴氨酸脫羧酶A1＋－－－＋A2＋＋－－＋A3－－－－＋/－注：＋陽(yáng)性；－陰性；＋/－陽(yáng)性或陰性。反應(yīng)序號(hào)A1：典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。表4沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表pH7.2尿素氰化鉀（KCN）賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果－－－甲型副傷寒沙門氏菌（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）－＋＋沙門氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性）＋－＋沙門氏菌個(gè)別變體（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）注：＋表示陽(yáng)性；＋表示陰性。反應(yīng)序號(hào)A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。反應(yīng)序號(hào)A3：補(bǔ)做ONΜG。ONΜG陰性為沙門氏菌，同時(shí)賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。必要時(shí)按表5進(jìn)行沙門氏菌生化群的鑒別。表5沙門氏菌屬各生化群的鑒別項(xiàng)目ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ衛(wèi)矛醇＋＋－－＋－山梨醇＋＋＋＋＋－水楊苷－－－＋－－ONΜG－－＋－＋－丙二酸鹽－＋＋－－－KCN－－－＋＋－注：＋表示陽(yáng)性;－表示陰性。如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)5.4.1的初步判斷結(jié)果，從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。結(jié)果與報(bào)告綜合以上生化試驗(yàn)的結(jié)果，報(bào)告25g（mL）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。2.2.4金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃。、冰箱：2℃～5℃、恒溫水浴箱：37℃～65℃、天平：感量0.1g、均質(zhì)器、振蕩器。無(wú)菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭。無(wú)菌錐形瓶：容量100mL、500mL。無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。注射器：0.5mL。pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙。培養(yǎng)基和試劑10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯。7.5%氯化鈉肉湯。血瓊脂平板。Baird-Parker瓊脂平板腦心浸出液肉湯(BHI)。兔血漿。稀釋液：磷酸鹽緩沖液。營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面。革蘭氏染色液。無(wú)菌生理鹽水操作步驟.1樣品的處理稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，吸取25mL樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)中，振蕩混勻。.2增菌和分離培養(yǎng)將上述樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長(zhǎng)，污染嚴(yán)重時(shí)在10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長(zhǎng)。將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h或45h～48h。金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無(wú)混濁帶及透明圈。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周圍可見(jiàn)完全透明溶血圈。挑取上述菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)。.3鑒定染色鏡檢：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列呈葡萄球狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，直徑約為0.5μm～1μm。血漿凝固酶試驗(yàn)：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1個(gè)或以上，分別接種到5mLBHI和營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)以血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對(duì)照。也可用商品化的試劑，按說(shuō)明書操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)。結(jié)果如可疑，挑取營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復(fù)試驗(yàn)。葡萄球菌腸毒素的檢驗(yàn)：未檢出金黃色可疑食物中毒樣品或產(chǎn)生葡萄球菌腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株的鑒定，應(yīng)按附錄B檢測(cè)葡萄球菌腸毒素。.4結(jié)果與報(bào)告結(jié)果判定：符合5.2.3、5.3，可判定為金黃色葡萄球菌。結(jié)果報(bào)告：在25g（mL）樣品中檢出或葡萄球菌。2.2.4菌落總數(shù)樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。檢樣25g(mL)樣品+225mL稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取1mL分別加入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)計(jì)數(shù)各平板菌落數(shù)計(jì)算菌落總數(shù)每皿中加入15mL～20mL平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻報(bào)告用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。按上述操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無(wú)菌吸管或吸頭。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。培養(yǎng)瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36±1℃℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30±1℃培養(yǎng)72h±3h。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。菌落計(jì)數(shù)可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果與報(bào)告若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。計(jì)算：…………………（1）式中：N——樣品中菌落數(shù)；∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d——稀釋因子（第一稀釋度）。若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時(shí)，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。菌落總數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)小于100CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。7.2.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。2.2.5大腸菌群測(cè)定范圍木標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中大腸菌群的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中大腸菌群的測(cè)定。儀器和試劑冰箱:0℃-4℃。恒溫培養(yǎng)箱:36℃士1℃。恒溫水浴鍋:46℃士1℃.顯微鏡:10X~100X。均質(zhì)器或滅菌乳缽。架盤藥物天平:0g-500g,精確至0.5g.滅菌吸管1mL(具0.01mL刻度),10mL(具0.1mL刻度)。滅菌錐形瓶:500mL.滅苗玻璃珠:直徑約5mm.滅菌培養(yǎng)皿:直徑90mm.滅苗試管:16mm×160mm.滅菌刀.剪子、攝子等。培養(yǎng)基和試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管。伊紅美藍(lán)瓊脂平板。乳糖發(fā)酵管。EC肉湯。磷酸鹽緩沖液.0.85%滅菌生理鹽水.革蘭氏染色液。操作步驟.1檢樣稀釋以無(wú)菌操作將檢樣25g（mL)放于含有225ml，滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅茵玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8000r/min~10000r/min的速度處理1min，做成1：10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注人含有9ML滅菌內(nèi)，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞一次，換用1支1ml滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情漢的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度，接種三管。.2乳糖發(fā)酵試驗(yàn)將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL以及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36℃士1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24h士2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為人腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣省，則按下列程序進(jìn)行。.3分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36℃士1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h-24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。.4證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1個(gè)~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36℃士1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h士2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。.5報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL(g)大腸菌群的MPN值..6糞大腸菌群(Faecalcoliform)用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物(見(jiàn)4.2)轉(zhuǎn)種于EC肉湯管內(nèi)，置44.5℃士0.2℃水浴箱內(nèi)(水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于EC肉湯液面)，培養(yǎng)24h士2h，經(jīng)培養(yǎng)后，如所有EC肉湯管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性；如有產(chǎn)氣者，則將所有產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置培養(yǎng)18h-24h，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。結(jié)果報(bào)告根據(jù)證實(shí)為糞大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL（g）糞大腸菌群的MPN值（見(jiàn)表1）。表1大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表陽(yáng)性管數(shù)MPN100mL（g）95%可信限1mL（g）×30.1mL（g）×30.01mL（g）×3下限上限000000000123<30306090<590000011110123306090120<51300000222201236090120160000033330123901301601901111000001234070110150<51020021011111111012370110150190103023036011112222012311015020024030360111133330123160200240190222200000123901402002601030360370222222220123210280350420401004701500222233330123290360440530333300000123230390640950407015012001300380033332222012343075012001600701403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000≥240003607101500130002400048000注1：本表采用3個(gè)稀釋度[1mL(g)、0.1mL(g)和0.01mL(g)]，每稀釋度三管。注2：表內(nèi)所列檢樣量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)時(shí)，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改用0.1mL、0.01mL（g）和0.001mL(g)時(shí)，其余可類推。3.試劑和儀器清單3.1試劑清單試劑名稱規(guī)格數(shù)量蔗糖500g2葡萄糖500g2D—果糖25g2乳糖500g2淀粉酶250g2胰蛋白酶250g2瓊脂粉100g2牛肉膏500ml2酵母膏500ml2大豆蛋白胨500ml2蛋白胨500ml2胰蛋白胨500ml2胰酪胨500g2植物蛋白胨500g2多胨500g2氫氧化鈉500g2品紅25g4異戊醇500ml2乙醇500ml2石蕊25g3乙醚500ml2濃硫酸500ml2甲基紅25g4硫酸銅、500g4硫酸鉀500g4硼酸250ml4溴甲酚綠25ml2酚酞25ml3鹽酸500ml3磷酸500ml23.2玻璃儀器清單儀器名稱規(guī)格（ml）需要量（個(gè)）燒杯100104004錐形瓶250105005漏斗2分液漏斗2鑷子4吸管110210510105205255玻璃棒5滅菌刀或剪子5橡膠管5試管18*18010燒瓶5003酸、堿式滴定管50各3量筒102502100525055002溫度計(jì)100℃5酒精燈5表面皿中號(hào)5平皿90cm100容量瓶10450510010250550023.3設(shè)備清單儀器名稱型號(hào)數(shù)量雙數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱BS-1E型3烘箱SX2-2.5-10型5高壓蒸汽滅菌鍋MLS-3750型3干熱滅菌器MOV-112S90L/AT型5自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀迅數(shù)AS1型5微生物采樣器JWL-I型5臥式超低溫保存箱MDF-293型5冰箱西門子KG23E6710°C-4°C生化培養(yǎng)箱SPX-250B型205L4014±1°C，25°C～60°C生物顯微鏡XS2-3G40~1600X2004140143干燥消毒箱GRX202PH計(jì)33.4化驗(yàn)室的月試劑消耗量例：以金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)中的10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯使用量計(jì)算，每次實(shí)驗(yàn)所消耗的10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯使用量為225ml,每周做一次檢測(cè)項(xiàng)目的10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯使用量為225ml,則每月使用的10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯使用量為量為900ml，規(guī)格為1000ml瓶，折合得使用10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯為0.9瓶.4.化驗(yàn)室的平面布置圖及設(shè)計(jì)說(shuō)明4.1化驗(yàn)室設(shè)置設(shè)計(jì)的化驗(yàn)室包括：微生物化驗(yàn)室、辦公室、緩沖間、無(wú)菌室、天平室、設(shè)備室、更衣室。4.2化驗(yàn)室平面圖4.3設(shè)計(jì)說(shuō)明4.3.1微生物化驗(yàn)室布局微生物化驗(yàn)室是按2：1的比例尺來(lái)進(jìn)行設(shè)計(jì)的。整個(gè)微生物化驗(yàn)室總面積為（長(zhǎng)3000cm×寬2000cm），化驗(yàn)室操作臺(tái)坐落在微生物化驗(yàn)室的西南角，操作臺(tái)（長(zhǎng)1234cm×寬276cm），操作臺(tái)兩邊各設(shè)2個(gè)水槽，操作臺(tái)上配有均質(zhì)器、水浴鍋、通風(fēng)櫥（長(zhǎng)334cm×寬276cm），有毒或刺激性藥物的取用在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，操作臺(tái)旁電源開關(guān)一組，電插座2個(gè)。整個(gè)化驗(yàn)室的所有門都是防火防腐蝕的,門統(tǒng)一規(guī)格為141cm,向內(nèi)推開式，化驗(yàn)室內(nèi)各功能室采用隔板做墻隔開，以減小占地面積,隔板也為防火防腐蝕的，采用耐火或不易燃材料建筑；電路電線埋入墻體內(nèi)，以免遭氧化及腐蝕。操作區(qū).1整潔：微生物操作區(qū)是各種病原菌相對(duì)集中的地方,為了減少粉塵流動(dòng),防止交叉污染,操作區(qū)應(yīng)與外界分開。操作區(qū)地面用專用拖把每天拖1次,每周用消毒劑擦洗一次。每天早上工作前,用紫外線照射30min，或每天工作后,用紫外線照射60min，對(duì)整個(gè)操作區(qū)進(jìn)行消毒,下午工作結(jié)束后用消毒液消毒工作臺(tái)面,以保證工作環(huán)境的安全清潔。.2光線：細(xì)菌培養(yǎng)的細(xì)小菌落及血清試驗(yàn)?zāi)垲w粒的觀察,都需要有充足的光線。操作區(qū)除設(shè)置常規(guī)照明燈外，還必須安裝操作臺(tái)燈,以保證試驗(yàn)結(jié)果的正確判斷。.3溫度和濕度：由于無(wú)菌操作的要求,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常使用酒精燈，因此,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不能安裝吊扇。為了達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需的適宜溫度,尤其是滿足某些儀器對(duì)溫度濕度的要求,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)安裝空調(diào)。.4污染物處理：操作區(qū)備有消毒缸,用于處理沾有活菌的玻片等污染物品。檢驗(yàn)剩余的標(biāo)本及使用過(guò)的帶菌平板、試管均須集中地點(diǎn)安全防止，經(jīng)消毒滅菌處理后再洗滌或丟棄。無(wú)菌室布局無(wú)菌室面積為（長(zhǎng)782cm×寬925cm），無(wú)菌室溫度控制在17℃～25℃；溫度波動(dòng)小于0.5℃/h；濕度50～75%，無(wú)菌室完全封閉，進(jìn)出無(wú)菌室至少要經(jīng)兩道門,中間隔有緩沖間，無(wú)菌室與外間設(shè)置一個(gè)可開的窗口，用于傳遞器具。第一緩沖間面積為(長(zhǎng)782cm×寬545cm)，第二緩沖間面積為（長(zhǎng)782cm×寬230cm）,最后才進(jìn)到無(wú)菌操作室,無(wú)菌操作室內(nèi)還設(shè)有無(wú)菌操作臺(tái)（長(zhǎng)782cm×寬275cm）,位于室中間，臺(tái)面材料為具有耐酸，耐堿以及剛度好的塑料材料，地板為防滑地被磚、潔凈、干燥，室內(nèi)還應(yīng)設(shè)有空調(diào),滅火器。.1無(wú)菌室必須保持整潔，無(wú)菌室為10000級(jí)（局部100級(jí)）清潔區(qū)，采用紫外燈配合臭氧滅菌，工作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)換專用鞋、專用衣。無(wú)菌室使用前必須用紫外線消毒30min，操作結(jié)束后清潔臺(tái)面，再用紫外線消毒30min。定期用乳酸或甲醛熏蒸。4.3.2辦公室布局辦公室面積為（長(zhǎng)782cm×寬725cm）,應(yīng)設(shè)有辦公桌(長(zhǎng)260cm×寬155cm)、冰箱（長(zhǎng)343cm×寬171cm）、空調(diào)、滅火器、桌上擺有電腦、打印機(jī)以及相關(guān)的檢驗(yàn)書籍和文件等，辦公桌旁設(shè)電源開關(guān)一組，電插座6個(gè)。4.3.3天平室布局天平室面積總為（長(zhǎng)741cm×寬750cm），天平室有雙層玻璃和窗簾，室內(nèi)設(shè)有滅火器、空調(diào)、天平臺(tái)（長(zhǎng)423cm×寬316cm）,各天平之間有合理的間距,各不影響,天平臺(tái)旁設(shè)電源開關(guān)一組，電插座1個(gè)。4.3.4設(shè)備室布局設(shè)備室面積為（長(zhǎng)741cm×寬675cm），內(nèi)設(shè)有滅菌鍋、冰箱、低溫保存箱、培養(yǎng)箱,還設(shè)有電源插座各一個(gè)。4.3.5更衣室布局更衣室分為男女更衣室,總面積為（長(zhǎng)903cm×寬741cm），男更衣室（長(zhǎng)460cm×寬354cm）,女更衣室（長(zhǎng)460cm×寬387cm），男女更衣室間,各設(shè)有小型衣柜（長(zhǎng)460cm×寬130cm），衣桿、水龍頭1個(gè)、吹風(fēng)器1臺(tái)以及酒精消毒器1臺(tái)，對(duì)工作人員進(jìn)行工作前消毒。4.3.供電化驗(yàn)室建筑的供電應(yīng)留有足夠的負(fù)荷余量，設(shè)施應(yīng)安全可靠，一般采用雙路供電，不具備雙路供電條件的，應(yīng)設(shè)置自備電源。有特殊要求的，應(yīng)配備不間斷電源。各個(gè)實(shí)驗(yàn)室配置三相(338v)和單相(220v)供電路線、設(shè)置電源總開關(guān)、總開關(guān)上均安裝上漏電保護(hù)措施（對(duì)電冰箱、等長(zhǎng)期運(yùn)行電器不受總開關(guān)控制），穩(wěn)定供電電壓?jiǎn)幔渲米銐蚬╇婋娫床遄娋€路采用護(hù)套暗鋪，且在走廊配置防爆燈等。為保障實(shí)驗(yàn)室的正常工作，電源的質(zhì)量、安全可靠性及連續(xù)性必需保證。一般用電和實(shí)驗(yàn)用電必須分開，對(duì)一些精密、貴重儀器設(shè)備要求提供穩(wěn)壓、恒流、穩(wěn)頻、抗干擾的電源，必要時(shí)須建立不中斷供電系統(tǒng)，還要配備專用電，如不間斷電源(UPS)等。4.4供水供水要求為自來(lái)水和專用水，水壓不夠要設(shè)有水箱。排水中若有酸性或堿性物質(zhì)，要標(biāo)明濃度和數(shù)量；若有放射性物質(zhì)要注明有多少種放射性物質(zhì)和濃度。4.5通風(fēng) 實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，人員多和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生一些有害氣體，造成空氣污濁，對(duì)人體不利。為了防止實(shí)驗(yàn)室工作人員吸入或咽入一些有毒的、可致病的或毒性不明的化學(xué)物質(zhì)和有機(jī)氣體，實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)有良好的通風(fēng)，必要時(shí)應(yīng)設(shè)空調(diào)。5.化驗(yàn)室人員配制和組織管理5.1人員配置：化驗(yàn)室主任、技術(shù)負(fù)責(zé)人、質(zhì)量負(fù)責(zé)人、儀器設(shè)備管理負(fù)責(zé)人、試劑管理負(fù)責(zé)人、檢驗(yàn)人員（共10人）5.2化驗(yàn)室人員管理5.2.1所有化驗(yàn)員需培訓(xùn)考核合格后持證上崗，熟悉化驗(yàn)專業(yè)知識(shí)。5.2.2掌握采取樣品的性質(zhì)，熟悉采樣方法，會(huì)使用采樣工具。5.2.3掌握分析所用各種標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置、儲(chǔ)存、發(fā)放程序。5.2.4掌握動(dòng)火分析方法、指標(biāo)、采樣時(shí)間、樣品保留等必備知識(shí)。5.2.5掌握控制分析、產(chǎn)品分析、原料分析方法以及控制指標(biāo)、結(jié)果判斷。5.2.6掌握包裝物檢查管理規(guī)定、計(jì)量檢斤規(guī)程及重量計(jì)算方法。5.2.7化驗(yàn)員需認(rèn)真填寫原始記錄、檢驗(yàn)報(bào)告，能夠獨(dú)立解決工作中的一般技術(shù)問(wèn)題。5.2.8嚴(yán)格按程序和實(shí)施細(xì)則進(jìn)行取樣，按操作規(guī)程使用儀器設(shè)備，對(duì)所使用的儀器設(shè)備做到按要求定期保養(yǎng)，使用后及時(shí)填寫使用情況記錄。5.2.9努力專研業(yè)務(wù)，參加各項(xiàng)培訓(xùn)和學(xué)術(shù)交流，積極參加對(duì)比試驗(yàn)，不斷提高檢驗(yàn)水平。5.2.10檢驗(yàn)工作要做到安全、文明、衛(wèi)生規(guī)格化，做好安全保密工作，遵章守法，積極完成各項(xiàng)檢驗(yàn)工作。5.3儀器管理要求5.3.1精密儀器的管理精密儀器應(yīng)按其性質(zhì)、靈敏度、精密程度，固定放置的房間和位置，不得隨意挪動(dòng)，放置精密儀器的房間應(yīng)與化學(xué)處理室隔開。以防止腐蝕性氣體及水汽腐蝕儀器。烘箱、高溫爐應(yīng)放置在不燃的水泥臺(tái)或堅(jiān)固的鐵架上，天平及其它精密儀器應(yīng)放在防震、防曬、防潮、防腐蝕的房間內(nèi)，小件儀器用完收藏儀器柜中。精密儀器應(yīng)設(shè)專人保管，建立技術(shù)檔案，裝入全部技術(shù)資料，如：說(shuō)明書、調(diào)試記錄、檢定記錄、維修記錄等情況，貴重的精密儀器（電子天平）每使用一次要簽名登記一次，對(duì)某種儀器沒(méi)有使用過(guò)的人，最初幾次使用應(yīng)該有專人指導(dǎo)，不能自己拔弄。精密儀器的購(gòu)置、拆箱、驗(yàn)收、安裝、調(diào)試都應(yīng)專人負(fù)責(zé)。未經(jīng)批準(zhǔn)不得任意拆卸。精密儀器均須標(biāo)明責(zé)任保養(yǎng)人。保養(yǎng)人應(yīng)按儀器的保養(yǎng)要求及時(shí)做好儀器的清潔保養(yǎng)工作。精密儀器使用、維護(hù)保養(yǎng)嚴(yán)格按相關(guān)作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。5.3.2玻璃儀器的管理按玻璃儀器品種、規(guī)格、用途建立玻璃儀器使用臺(tái)帳。臺(tái)帳中應(yīng)對(duì)玻璃儀器的收發(fā)、庫(kù)存、領(lǐng)用、破損實(shí)行登記制度，臺(tái)帳的管理指定專人負(fù)責(zé)，并每月進(jìn)行匯總。對(duì)匯總結(jié)果異常的應(yīng)說(shuō)明原因。玻璃儀器按品種、規(guī)格進(jìn)行分類存放并標(biāo)識(shí)。標(biāo)識(shí)的內(nèi)容應(yīng)包括品種、規(guī)格、數(shù)量、責(zé)任人等，玻璃儀器的領(lǐng)用由管轄該玻璃儀器的責(zé)任人負(fù)責(zé)和盤存，并將盤存結(jié)果每月報(bào)告一次對(duì)盤存異常的應(yīng)說(shuō)明原因。玻璃儀器為易碎品，使用、洗滌時(shí)應(yīng)輕拿輕放，以防破碎。玻璃儀器的使用、校正、洗滌和干燥按相關(guān)作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。5.3.3化學(xué)試劑的管理固體試劑和液體試劑應(yīng)分開存放，固定試劑應(yīng)按分類編號(hào)順序存放和造冊(cè)，以便查找。易燃易爆試劑應(yīng)貯于鐵柜（壁厚1mm以上）中，柜子的頂部都有通風(fēng)口。嚴(yán)禁在化驗(yàn)室存放大于20L的瓶裝易燃液體。易燃易爆藥品不要放在冰箱內(nèi)（防爆冰箱除外）。

相互混合或接觸后可以產(chǎn)生激烈反應(yīng)、燃燒、爆炸、放出有毒氣體的兩種或兩種以上的化合物稱為不相容化合物，不能混放。這種化合物系多為強(qiáng)氧化性物質(zhì)與還原性物質(zhì)。

腐蝕性試劑宜放在塑料或搪瓷的盤或桶中，以防因瓶子破裂造成事故。

要注意化學(xué)藥品的存放的期限，一些試劑在存放過(guò)程中會(huì)逐漸變質(zhì)，甚至形成危害。

藥品柜和試劑溶液均應(yīng)避免陽(yáng)光直曬及靠近暖氣等熱源。要求避光的試劑應(yīng)裝于棕色瓶中或用黑紙或黑布包好存于暗柜中。

發(fā)現(xiàn)試劑瓶上標(biāo)簽掉落或?qū)⒁：龝r(shí)應(yīng)立即貼好標(biāo)簽。無(wú)標(biāo)簽或標(biāo)簽無(wú)法辯認(rèn)的試劑都要當(dāng)成危險(xiǎn)物品重新鑒別后小心處理，不可隨便亂扔，以免引起嚴(yán)重后果。

化學(xué)試劑定位放置、用后復(fù)位、節(jié)約使用，但多余的化學(xué)試劑不準(zhǔn)倒回原瓶。5.4化驗(yàn)室安全管理5.4.1所有藥品、標(biāo)樣、溶液都應(yīng)標(biāo)簽，絕對(duì)不能在容器內(nèi)裝入與標(biāo)簽不相符的物品。5.4.2禁止使用化驗(yàn)室器皿盛裝食物，也不能用茶杯、食具盛大裝藥品，更不能用燒杯當(dāng)茶具使用。5.4.3稀釋硫酸時(shí)，必須在硬質(zhì)耐熱燒杯或錐形瓶中進(jìn)行，只能將濃硫酸慢慢注入水中，邊倒邊攪拌，溫度較高時(shí)，應(yīng)等其冷卻或降溫后再進(jìn)行，嚴(yán)禁將水倒入硫酸中。5.4.4開啟易揮發(fā)液體試劑之前，先將試劑瓶放在自來(lái)水中冷卻幾分鐘，開啟時(shí)瓶口不要對(duì)人，最好在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。5.4.5易燃溶劑加熱時(shí)，必須在水浴中進(jìn)行，避免明火。5.4.6裝過(guò)強(qiáng)腐蝕性、可燃性、有毒或易爆物品的器具，操作者應(yīng)親手清洗干凈，以防危及他人安全。5.4.7移動(dòng)、開啟大瓶液體時(shí)，不能直接放在水泥地板上，最好用紙板或其他墊板墊好，嚴(yán)禁開瓶時(shí)錘砸、敲打，以防破裂。5.4.8取下正在沸騰的溶液時(shí)，應(yīng)用瓶夾類先輕搖動(dòng)以后取下，以免濺出傷人。5.4.9將玻璃棒、玻璃管、溫度計(jì)等插入或拔出膠塞，膠管時(shí)均應(yīng)墊有棉布。且不可強(qiáng)行插入或拔出以免折斷刺傷人。5.4.10開啟高壓氣瓶時(shí)應(yīng)緩慢，并不得將出口對(duì)人。配制藥品或試驗(yàn)中能放出HCN、NO2、H2S、SO3、Br2、NH3及其他有毒和腐蝕性氣體時(shí)應(yīng)通風(fēng)櫥中進(jìn)行?；?yàn)室中應(yīng)備有燙傷藥品等，消防器材和勞保用品。要建立安全制度和安全登記卡，健全崗位責(zé)任制，每天下班前檢查水、電、窗、門等，確保安全。操作壓力設(shè)備或其他檢測(cè)儀器時(shí)，要嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書的要求進(jìn)行，用電應(yīng)遵守公司《安全用電規(guī)程》進(jìn)行。5.5檢驗(yàn)過(guò)程的管理5.5.1對(duì)樣品的采集基本要求是采取的樣品應(yīng)具有代表性和有效性，做好標(biāo)記。5.5.2檢驗(yàn)過(guò)程中對(duì)試劑的添加需謹(jǐn)慎，添加時(shí)不能混淆，需做好標(biāo)記。根據(jù)檢驗(yàn)方法要求進(jìn)行準(zhǔn)備，檢查儀器設(shè)備、環(huán)境條件的樣品狀況。5.5.3檢驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的現(xiàn)象和數(shù)據(jù)要及時(shí)做好記錄，因各種原因（如停電、停水、儀器發(fā)生故障、樣品問(wèn)題等）造成檢驗(yàn)工作中斷且影響檢驗(yàn)質(zhì)量，應(yīng)做好相應(yīng)記錄向上級(jí)匯報(bào)。6.化驗(yàn)室的崗位責(zé)任制6.1化驗(yàn)室的主要負(fù)責(zé)人職能6.1.1在技術(shù)處的領(lǐng)導(dǎo)下，對(duì)化驗(yàn)室生產(chǎn)、行政管理全面負(fù)責(zé)。確保及時(shí)、準(zhǔn)確地提供檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)工作質(zhì)量應(yīng)納入主任任期目標(biāo)責(zé)任制。6.1.2貫徹執(zhí)行黨和國(guó)家的方針、政策和法規(guī)。對(duì)上級(jí)主管部門負(fù)責(zé)，6.1.3主持召開室務(wù)會(huì)議，組織對(duì)實(shí)驗(yàn)室的生產(chǎn)、行政、計(jì)劃、安全、生活等有關(guān)問(wèn)題作出決定。6.1.4領(lǐng)導(dǎo)和組織職工認(rèn)真執(zhí)行各項(xiàng)規(guī)章制度，制定并督促檢查本室各類人員崗位職責(zé)的執(zhí)行，并主持制定化驗(yàn)室的年度計(jì)劃，主持制定和修改各項(xiàng)規(guī)章制度。6.1.5根據(jù)公司下達(dá)的實(shí)驗(yàn)任務(wù)，結(jié)合化驗(yàn)室的具體情況，制訂年度、季度和月份實(shí)驗(yàn)工作計(jì)劃，制訂完成計(jì)劃措施，組織計(jì)劃實(shí)施，確保按時(shí)完成任務(wù)。6.1.6組織制訂儀器、設(shè)備申請(qǐng)計(jì)劃、監(jiān)督日常儀器維護(hù)保養(yǎng)工作、審核材料、試劑藥品的購(gòu)買、領(lǐng)用計(jì)劃。6.1.7抓好經(jīng)濟(jì)管理，搞好經(jīng)濟(jì)核算和生產(chǎn)定額管理，組織職工開展增產(chǎn)節(jié)約和提合理化建議活動(dòng)。6.1.8領(lǐng)導(dǎo)和組織職工搞好安全文明生產(chǎn)，做好環(huán)境保護(hù)工作，努力改善實(shí)驗(yàn)工作條件。6.1.9對(duì)化驗(yàn)室人員的培訓(xùn)、提拔、晉升、獎(jiǎng)懲，向主管領(lǐng)導(dǎo)提出建議。并定期向公司匯報(bào)工作。6.1.10對(duì)因管理不善，對(duì)儀器設(shè)備、環(huán)境條件未達(dá)到規(guī)定要求而隱瞞不報(bào)，繼續(xù)出具檢測(cè)報(bào)告造成的檢驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量事故負(fù)責(zé)；對(duì)不安全的隱患隱瞞不報(bào)，繼續(xù)組織生產(chǎn)造成的不利影響負(fù)責(zé)；對(duì)非意外情況（停電、停水等）造成本室沒(méi)有按照計(jì)劃完成各項(xiàng)生產(chǎn)任務(wù)負(fù)責(zé)。6.2辦公室負(fù)責(zé)人職責(zé)6.2.1在化驗(yàn)中心負(fù)責(zé)人領(lǐng)導(dǎo)下，管理辦公室全面工作。6.2.2負(fù)責(zé)化驗(yàn)中心文字、數(shù)據(jù)材料的收集匯總，并負(fù)責(zé)起草工作總結(jié)進(jìn)行匯報(bào)。6.2.3監(jiān)督辦公室人員工作，組織辦公室全體人員及時(shí)、準(zhǔn)確地完成產(chǎn)品檢驗(yàn)文字、數(shù)據(jù)的整理任務(wù)。6.2.4樹立全局觀念、提高服務(wù)意識(shí)，搞好化驗(yàn)室辦公室人員之間的協(xié)調(diào)配合，及時(shí)幫助窗口解決工作中出現(xiàn)的問(wèn)題。6.3技術(shù)負(fù)責(zé)人職責(zé)6.3.1主持本項(xiàng)目的技術(shù)、質(zhì)量管理工作，對(duì)檢驗(yàn)技術(shù)、產(chǎn)品質(zhì)量全面負(fù)責(zé)。6.3.2在檢驗(yàn)中嚴(yán)格執(zhí)行現(xiàn)行國(guó)家食品安全法律、法規(guī)、規(guī)范、強(qiáng)制規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格按計(jì)劃進(jìn)行。6.3.3組織人員自審、會(huì)審，及時(shí)解決檢驗(yàn)中出現(xiàn)的各種技術(shù)問(wèn)題。6.3.4負(fù)責(zé)各項(xiàng)技術(shù)交底工作，組織技術(shù)人員、檢驗(yàn)人員學(xué)習(xí)貫徹技術(shù)規(guī)程、規(guī)范、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并隨時(shí)檢查執(zhí)行情況。6.3.5負(fù)責(zé)本檢驗(yàn)的技術(shù)文件及技術(shù)資料查閱。6.3.6督促檢查檢驗(yàn)人員的檢驗(yàn)技術(shù)質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量。6.3.7主持檢驗(yàn)質(zhì)量會(huì)議，對(duì)質(zhì)量問(wèn)題提出整改措施并監(jiān)督及時(shí)處理。6.3.8對(duì)檢驗(yàn)技術(shù)人員的工作進(jìn)行考核，可根據(jù)技術(shù)人員的工作表現(xiàn)提出獎(jiǎng)懲意見(jiàn)，對(duì)不稱職的可建議退回公司。6.3.9搞好團(tuán)結(jié)、協(xié)作、配合，完成領(lǐng)導(dǎo)交辦的其它任務(wù)。6.4質(zhì)量負(fù)責(zé)人職責(zé)6.4.1認(rèn)真學(xué)習(xí)和貫徹有關(guān)質(zhì)量方針、政策、法律和法規(guī)；6.4.2帶頭學(xué)習(xí)理解質(zhì)量管理有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、知識(shí)、質(zhì)量管理基本原則，對(duì)室內(nèi)工作人員質(zhì)量管理意識(shí)教育；6.4.3負(fù)責(zé)落實(shí)化驗(yàn)室的質(zhì)量職能,完成工作任務(wù),對(duì)化驗(yàn)室的工作質(zhì)量負(fù)責(zé)；6.4.4主持室內(nèi)有關(guān)質(zhì)量工作會(huì)議；6.4.5負(fù)責(zé)批準(zhǔn)發(fā)布由室內(nèi)工作人員編制的僅涉及化驗(yàn)室工作的質(zhì)量作業(yè)指導(dǎo)文件。6.5檢驗(yàn)人員職責(zé)6.5.1按時(shí)、按量、保質(zhì)完成產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)任務(wù)。6.5.2熟悉檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，熟練掌握檢驗(yàn)和儀器設(shè)備使用技術(shù)。6.5.3了解儀器設(shè)備的構(gòu)造、原理和性能，遵守檢驗(yàn)操作規(guī)程，防止發(fā)生意外事故。6.5.4檢驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)、準(zhǔn)確、完整，數(shù)據(jù)記錄清晰、數(shù)據(jù)處理及時(shí)，校核、審核準(zhǔn)確。6.5.5嚴(yán)格遵守保密制度，為保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)客觀、公正，有權(quán)拒絕行政干預(yù)。6.5.6做好儀器設(shè)備的保管、使用、保養(yǎng)工作參考文獻(xiàn)食品伙伴網(wǎng)、百度資料、圖書館書籍、啤酒百科謝辭

附錄資料：不需要的可以自行刪除AK3+570通道施工組織設(shè)計(jì)編制依據(jù)1、實(shí)施性總體施工組織設(shè)計(jì)。2、《公路工程質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》（JTGF80/1—2004）。3、《公路橋涵施工技術(shù)規(guī)范》（JTG041—2000）。4、現(xiàn)場(chǎng)踏勘。工程概況分項(xiàng)工程名稱：⑴AK3+570通道總體（編號(hào)：DWD-2-1-34-001）⑵AK3+570通道基礎(chǔ)及下部構(gòu)造（編號(hào)：DWD-2-1-34-002）⑶AK3+570通道上部構(gòu)造預(yù)制、安裝或澆筑（編號(hào)：DWD-2-1-34-003）⑷AK3+570通道鋼筋加工及安裝（編號(hào)：DWD-2-1-34-004）⑸AK3+570通道人行通道（編號(hào)：DWD-2-1-34-005）⑹AK3+570通道錐坡（編號(hào)：DWD-2-1-34-006）⑺AK3+570通道欄桿（編號(hào)：DWD-2-1-34-007）⑻AK3+570通道臺(tái)背回填（編號(hào)：DWD-2-1-34-008）2、AK3+570鋼筋砼通道斷面為9.0m×5.0m,原設(shè)計(jì)長(zhǎng)度為33.20m，作為過(guò)人和交通用，頂最大填土高度1.69米.后根據(jù)實(shí)際情況,為了和改線順接,變更為斜交正做,斜交角度為10。。3、主要工作內(nèi)容：挖基土方3611m3，C20混凝土涵身基礎(chǔ)64.9m3，C35混凝土框架涵身825.7m3，C30混凝土涵內(nèi)路面261.3m3，C30混凝土洞口翼墻46.5m3。4、涵洞所需水取工地附近地下水，砂來(lái)源于江東砂料場(chǎng)。混凝土采用業(yè)主指定的商品混凝土。工地用電和照明用電采取了和灌南小學(xué)協(xié)商解決。三、施工準(zhǔn)備1、熟悉圖紙，仔細(xì)對(duì)施工圖紙進(jìn)行復(fù)查，領(lǐng)會(huì)設(shè)計(jì)意圖。2、清除雜物，整理場(chǎng)地；3、清查安裝主要的施工機(jī)具；4、安裝好施工現(xiàn)場(chǎng)水電供應(yīng)設(shè)施；5、合理組織施工，做到責(zé)任明確，分工合理；6、準(zhǔn)備足夠的施工所需用的材料。四、施工平面布置在現(xiàn)場(chǎng)搭建臨時(shí)倉(cāng)庫(kù)、變電房等臨時(shí)設(shè)施。平整場(chǎng)地改移縣道，接通施工用電、用水，具體施工場(chǎng)地平面布置見(jiàn)詳附圖1。五、施工方案及方法1、施工放樣。仔細(xì)對(duì)施工圖紙進(jìn)行復(fù)查，領(lǐng)會(huì)設(shè)計(jì)意圖。根據(jù)圖紙確定的構(gòu)造物的位置和標(biāo)高，準(zhǔn)確計(jì)算結(jié)構(gòu)物中樁坐標(biāo)和軸線方向，然后根據(jù)計(jì)算的具體位置進(jìn)行施工放樣，為便于開挖后的檢查校核，基礎(chǔ)軸線控制樁應(yīng)延長(zhǎng)至基坑外加以固定。放樣完成后，根據(jù)基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)尺寸放出結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的邊線，申請(qǐng)駐地監(jiān)理工程師復(fù)查，得到確認(rèn)之后，方可進(jìn)行基坑開挖。2、基坑開挖基坑開挖采用機(jī)械人工配合的方法進(jìn)行施工。開挖時(shí)嚴(yán)格按照《公路橋涵施工技術(shù)規(guī)范》要求施工，根據(jù)施工技術(shù)規(guī)范要求，按基礎(chǔ)設(shè)計(jì)圖，四邊分別放寬1米，按1:1放坡，先用挖掘機(jī)開挖，待接近基坑設(shè)計(jì)標(biāo)高時(shí)預(yù)留20cm深度，利用人工清理基坑底部，確保不擾動(dòng)基底地質(zhì)層。人工修整完后，對(duì)基底軸線、高程、平面尺寸進(jìn)行自檢，然后報(bào)監(jiān)理工程師驗(yàn)收，并由試驗(yàn)室對(duì)原地基承載力進(jìn)行動(dòng)力觸探試驗(yàn)（設(shè)計(jì)要求基底容許應(yīng)力不小于150KPa），若地基承載力不能滿足要求，報(bào)監(jiān)理工程師審核變更基底處理方案；若滿足設(shè)計(jì)要求，平整度達(dá)到規(guī)范要求后報(bào)請(qǐng)監(jiān)理工程師驗(yàn)收簽認(rèn)。然后開始鋪筑砂礫墊層，砂礫墊層為壓實(shí)的連續(xù)材料層，粒徑不大于40㎜，厚度為30㎝，砂礫墊層攤鋪后用夯機(jī)分層壓實(shí)，密實(shí)度達(dá)到98%以上。所開挖的各種雜土清運(yùn)到棄土堆存放。開挖過(guò)程中根據(jù)開挖深度及土質(zhì)情況注意觀察坑壁的穩(wěn)定性，及時(shí)采取有效措施加強(qiáng)坑壁支擋，以保證施工安全。基坑開挖過(guò)程中，在坑底基礎(chǔ)范圍之外設(shè)置集水井并沿坑底周圍開挖排水溝，使水流入坑內(nèi)，然后用潛水泵將水抽出排入附近溝渠中。基坑開挖邊坡頂設(shè)置擋水圈。3、砼基礎(chǔ)澆筑：⑴重新恢復(fù)測(cè)量樁，按施工圖紙尺寸支架側(cè)面模板。模板采用竹節(jié)板木支架，此時(shí)應(yīng)注意水溝位置的模板安裝問(wèn)題。⑵按設(shè)計(jì)并經(jīng)監(jiān)理工程師批準(zhǔn)的砼配合比使用C20商品砼。砼采用運(yùn)輸車運(yùn)至現(xiàn)場(chǎng)，并在現(xiàn)場(chǎng)安排專人控制原材料用量及砼坍落度。⑶砼振搗采用先用插入式振搗器振搗，再用平板式振搗器，振搗時(shí)間為15-20s，防止漏振或過(guò)振。待其初凝后，立即進(jìn)行灑水養(yǎng)護(hù)。⑷沉降縫要貫穿整個(gè)基礎(chǔ),且要順直.4、主通道底板砼澆筑：⑴施工放樣：待基礎(chǔ)砼達(dá)到70%以上強(qiáng)度后，即在墊層面上準(zhǔn)確測(cè)設(shè)出通道底板位置。⑵模板制作與安裝：底板與側(cè)墻的施工縫考慮設(shè)在距底板頂面45cm處。按施工圖紙支架底板模板，模板采用竹節(jié)板、鋼管支架。模板要求安裝穩(wěn)固，表面平整、緊密。沉降縫先采用全斷面固定聚笨乙烯泡沫板，內(nèi)側(cè)B/2處的沉降縫防水材料待砼具有一定強(qiáng)度后再安裝。⑶底板鋼筋制安：嚴(yán)格按施工圖紙尺寸下料，按圖示間距安放、綁扎，主筋下墊4cm砂漿塊以控制砼保護(hù)厚度。綁扎時(shí)注意在無(wú)彎起筋的骨架①中布置角隅加強(qiáng)筋箍筋，以及準(zhǔn)確預(yù)埋通道側(cè)墻鋼筋。底板與側(cè)墻施工縫處應(yīng)焊接定位鋼筋?yuàn)A固定2mm厚的鍍鋅鋼板以作為施工縫的防水措施。上述工作全部完成后報(bào)請(qǐng)監(jiān)理工程師檢查認(rèn)可后方能澆筑底板砼。⑷底板砼澆筑：砼采用商品混凝土，砼運(yùn)輸車運(yùn)輸至現(xiàn)場(chǎng)，砼泵車澆筑。坍落度控制在10-30cm之間，并安排專人對(duì)坍落度等進(jìn)行自檢。砼澆筑時(shí)水平分層、斜向分段，每一單層厚度不超過(guò)30cm，且砼澆筑必須在前一段（層）砼初凝前完成，避免出現(xiàn)工作縫。砼振搗采用插入式振搗棒結(jié)合平板式振搗器，振搗時(shí)間為15-20s，防止漏振或過(guò)振，尤其是一些邊角部位。當(dāng)砼澆至頂面時(shí)，用水準(zhǔn)儀輔以尼龍繩控其高程，用泥鏝等工具把表面收平、壓光，上接側(cè)墻的施工縫做成企口式，以利施工縫位置銜接牢固。待砼初凝后立即進(jìn)行覆蓋灑水養(yǎng)護(hù)。⑸底板砼施工完成且具有一定強(qiáng)度，立即組織施工鋪裝人行道預(yù)制板。人行道板具體施工工藝同底板。鋪裝完成以后,采用現(xiàn)場(chǎng)焊接的方法制作安裝護(hù)欄。5、通道側(cè)墻、頂板施工：⑴施工放樣：待底板砼達(dá)到70%以上強(qiáng)度后，立即恢復(fù)通道側(cè)墻位置樁，以指導(dǎo)側(cè)墻及頂板模板制作與安裝。⑵側(cè)墻、頂板鋼筋制安：根據(jù)圖示尺寸，在預(yù)埋鋼筋上綁扎鋼筋骨架。鋼筋骨架沿通道縱向按①②③④①②③④的順序循環(huán)綁扎（每排中心間距為12.5cm），主筋綁扎時(shí)墊4cm砂漿墊塊以保證砼保護(hù)層的厚度。安裝時(shí)仔細(xì)檢查尺寸、位置。⑶模板連接安裝：按照?qǐng)D紙?jiān)O(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)尺寸進(jìn)行放樣。模板采用大型組合模板、型鋼支撐。模板安裝根據(jù)結(jié)構(gòu)要求順序進(jìn)行，澆筑混凝土前對(duì)支撐板面進(jìn)行檢查，清除模板內(nèi)污物，并在模板內(nèi)面涂刷脫模劑，不得使用易粘在混凝土上或使混凝土變色的油料。支立模板時(shí)為了防止模板移位變形，支側(cè)模時(shí)在模板外設(shè)立支撐固定，涵身的側(cè)模設(shè)立對(duì)拉桿固定，澆筑在混凝土中的拉桿，按拉桿拔出的要求設(shè)計(jì)，拉桿外套塑料管，模板拆除后拔出重復(fù)利用。模板安裝完畢后，為保證位置正確，必須對(duì)其平面位置、平整度、垂直度、頂部標(biāo)高、節(jié)點(diǎn)聯(lián)系及縱橫向穩(wěn)定性進(jìn)行自檢，合格后方可報(bào)監(jiān)理工程師抽檢，監(jiān)理工程師認(rèn)可后方能澆筑?；炷翝仓r(shí)，發(fā)現(xiàn)模板有超過(guò)允許偏差值的可能及時(shí)糾正。⑷側(cè)墻、頂板砼澆筑及養(yǎng)護(hù)：①涵洞混凝土采用商品混凝土，罐車運(yùn)輸，砼泵車。砼澆注時(shí)，必須對(duì)運(yùn)到施工現(xiàn)場(chǎng)的砼進(jìn)行嚴(yán)格的檢查。如砼坍落度、和易性。②澆注前先對(duì)支架、模板、預(yù)埋件進(jìn)行檢查，模板內(nèi)的雜物、積水應(yīng)清理干凈，模板如有縫隙必須填塞嚴(yán)密。③為了防止混凝土自高處向模內(nèi)傾卸時(shí)發(fā)生離析，在澆注時(shí)，吊車傾卸高度不超過(guò)2米，通過(guò)串筒下落。④砼澆筑以設(shè)計(jì)沉降縫為單元格進(jìn)行，根據(jù)沉降縫的設(shè)計(jì)寬度用塑料泡沫板加以隔開。砼澆筑時(shí)嚴(yán)格按照《公路橋涵施工技術(shù)規(guī)范》要求控制澆注層厚度，以一定的順序和方向分層澆筑，并在下層砼初凝前澆筑完成上層砼，做到按計(jì)劃、分段分層連續(xù)完成。⑤砼振搗由專業(yè)振搗工用插入式振動(dòng)器進(jìn)行。使用時(shí)，移動(dòng)間距不應(yīng)超過(guò)振動(dòng)器作用半徑的1.5倍；與側(cè)模保持50～100mm的距離，并插入下層砼50～100mm；每次振搗完后徐徐提出振動(dòng)棒。每一振動(dòng)部位以不再冒出氣泡，表面呈現(xiàn)平坦、泛漿為止。⑥在澆筑過(guò)程中按照規(guī)范要求制作砼試件。⑦澆注后24h拆除模板，灑水覆蓋養(yǎng)護(hù)不少于7d。⑧混凝土澆筑過(guò)程中要按照設(shè)計(jì)要求摻加防裂纖維和減水劑。4、施工縫的處理：由于基礎(chǔ)、涵身分別澆注，施工縫應(yīng)認(rèn)真處理，施工縫的處理采用人工鑿除。在處理層混凝土澆筑完1-2天內(nèi)，對(duì)其表面的水泥砂漿和松弱層進(jìn)行拉毛，經(jīng)鑿毛處理的混凝土面用水沖洗干凈，在澆筑次層混凝土前應(yīng)對(duì)水平縫鋪一層厚度為1-20cm的1：2水泥砂漿，對(duì)于鋼筋砼、蓋板砼的現(xiàn)場(chǎng)澆注施工應(yīng)連續(xù)進(jìn)行，避免施工接縫，當(dāng)涵身較長(zhǎng)時(shí)，可沿長(zhǎng)度方向分段進(jìn)行，接縫應(yīng)設(shè)在涵身沉降縫處。5、沉降縫的處理：沉降縫的設(shè)置根據(jù)設(shè)計(jì)圖紙洞身每墻4-6米設(shè)一道沉降縫，沉降縫的構(gòu)造嚴(yán)格按施工圖執(zhí)行。沉降縫的設(shè)置必須上下貫通成一條垂線，基礎(chǔ)墻身根據(jù)沉降縫的設(shè)計(jì)長(zhǎng)度分段澆筑。澆筑時(shí)先在沉降縫位置處用木板作擋塊，等到砼達(dá)到一定強(qiáng)度后，拆除木板擋塊，于沉降縫位置處填塞瀝青麻絮。6、出入口砌筑塊石在使用前必須澆水濕潤(rùn)，表面如有泥土、水銹，應(yīng)清洗干凈。砌筑第一層砌塊時(shí)，由于基底為黃粘土，必須碾壓達(dá)到95%的壓實(shí)度，形成比較好的整體性時(shí)，直接坐漿砌筑。砌體分層砌筑，各砌層的塊石高度應(yīng)大致一致，外圈定位行