人(human)白介素4(il4)定量檢測(cè)試劑盒(elisa)兩步法

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。分離。標(biāo)準(zhǔn)品臨使用時(shí)再稀釋，稀釋后用剩的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)立刻丟棄，不可分離。標(biāo)準(zhǔn)品臨使用時(shí)再稀釋，稀釋后用剩的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)立刻丟棄，不可人(Human)白介素4(IL-4)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書檢測(cè)原理試劑盒采用雙蛋白兩步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)包被捕獲蛋白的透明微孔中，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)本，溫育并洗滌后，再加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)蛋白，溫育并洗滌后，用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)蛋白濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（0D值），計(jì)算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20°C，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品酶標(biāo)儀（450nm）高精度加樣器及槍頭：0.5—10UL、2—20UL、20—200UL、200-1000UL37C恒溫箱操作注意事項(xiàng)試劑盒保存在2-8C，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔x8條12孔x4條無標(biāo)準(zhǔn)品0.6mL0.6mL按說明書進(jìn)行稀釋樣本稀釋液6mL3mL無標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6mL3mL無檢測(cè)蛋白-HRP6mL3mL無20x洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個(gè)1個(gè)無試劑的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品（1600pg/mL）在實(shí)驗(yàn)前用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行倍比稀釋，得到6個(gè)濃度點(diǎn)（包括標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)）：1600、800、400、200、20x洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋。洗板方法手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板4-5次。自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350ML,浸泡1min，洗板4-5次。操作步驟從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條密封放回4°C。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ML；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10uL,再加樣本稀釋液40ML（即樣本稀釋5倍），用封板膜封住反應(yīng)孔，37C水浴鍋或恒溫箱溫育30min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。除空白孔外，每孔加入檢測(cè)蛋白-HRP50pL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37°C水浴鍋或恒溫箱溫育30min。重復(fù)步驟3的操作。每孔加入底物A、各50ML,輕輕振蕩混勻，37°C避光孵育15mino每孔加入終止液50pL,15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的0D值。結(jié)果判斷每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的0D值應(yīng)減去空白孔的0D值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)0D值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣本濃度。試劑盒性能準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。貯藏：2-8C，避光防潮保存。有效期：6個(gè)月免責(zé)聲明試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。FORRESEARCHUSEONLY.NOTFORUSEINDIAGNOSTICPROCEDURES.HumanInterleukin4(IL-4)ELISAKitinstructionIntendeduseThisIL-4ELISAkitisintendedLaboratoryforResearchuseonlyandisnotforuseindiagnosticortherapeuticprocedures.TheStopSolutionchangesthecolorfrombluetoyellowandtheintensityofthecolorismeasuredat450nmusingaspectrophotometer.InordertomeasuretheconcentrationofIL-4inthesample,thisIL-4ELISAKitincludesasetofcalibrationstandards.ThecalibrationstandardsareassayedatthesametimeasthesamplesandallowtheoperatortoproduceastandardcurveofOpticalDensityversusIL-4concentration.TheconcentrationofIL-4inthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.SamplecollectionandstoragesSerum-Useaserumseparatortubeandallowsamplestoclotfor30minutesbeforecentrifugationfor10minutesatapproximately3000Xg.Removeserumandassayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat-20°Cor-80°C.Avoidrepeatedfreeze-thawcyclesPlasma-CollectplasmausingEDTAorheparinasananticoagulant.Centrifugesamplesfor30minutesat3000Xgat2-8Cwithin30minutesofcollection.Storesamplesat-20Cor-80C.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Cellculturesupernatesandotherbiologicalfluids-Removeparticulatesbycentrifugationandassayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat-20Cor-80C.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Note:Thesamplesshoulebecentrifugateddequatelyandnohemolysisorgranulewasallowed.MaterialsrequiredbutnotsuppliedStandardmicroplatereader(450nm)PrecisionpipettesandDisposablepipettetips.37CincubatorPrecautionsDonotsubstitutereagentsfromonekittoanother.Standard,conjugateandmicroplatesarematchedforoptimalperformance.Useonlythereagentssuppliedbymanufacturer.Donotremovemicroplatefromthestoragebaguntilneeded.Unusedstripsshouldbestoredat2-8°Cintheirpouchwiththedesiccantprovided.Mixallreagentsbeforeusing.Removeallkitreagentsfromrefrigeratorandallowthemtoreachroomtemperature(20-25°C)MaterialssuppliedName96determinations48determinationsMicroelisastripplate12*8strips12*4stripsStandard0.6ml0.6mlSamplediluent6.0ml3.0mlStandarddiluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugatereagent6.0ml3.0ml20XWashsolution25ml15mlChromogenSolutionA6.0ml3.0mlChromogenSolutionB6.0ml3.0mlStopSolution6.0ml3.0mlClosureplatemembrane22Usermanual11Sealedbags11ReagentpreparationStandard:DilutewithStandarddiluenttosixpoint:1600、800、400、200、100、50pg/mL.20xwashsolution:DilutewithDistilledordeionizedwater1:20.AssayprocedurePrepareallreagentsbeforestartingassayprocedure.ItisrecommendedthatallStandardsandSamplesbeaddedinduplicatetotheMicroelisaStripplate.AddstandardandSample:SetStandardwells,testingsamplewellsandblankwells.AddDilutedstandard50^1tostandardwell;AddSampledilution40^1totestingsamplewellwhichonAssayplate,thenaddtestingsample10gl(samplefinaldilutedegreeis5times),blankwelldoesn'taddanyting.coverwithanadhesivestripandincubatefor30minutesat37°C.Aspirateeachwellandwash,repeatingtheprocessfourtimesforatotaloffivewashes.WashbyfillingeachwellwithWashSolution(400yl)usingasquirtbottle,manifolddispenserorautowasher.Completeremovalofliquidateachstepisessentialtogoodperformance.Afterthelastwash,removeanyremainingWashSolutionbyaspiratingordecanting.Inverttheplateandblotitagainstcleanpapertowels.Add50卩l(xiāng)ofHRP-conjugatereagent,coverwithanadhesivestripandincubatefor30minutesat37°C.Repeatstep3.AddchromogensolutionA50glandchromogensolutionB50gltoeachwell.Gentlymixandincubatefor15minutesat37°C.Protectfromlight.Add50卩l(xiāng)StopSolutiontoeachwell.Thecolorinthewellsshouldchangefrombluetoyellow.Ifthecolorinthewellsisgreenorthecolorchangedoesnotappearuniform,gentlytaptheplatetoensurethoroughmixing.ReadtheOpticalDensity(O.D.)at450nmusingamicrotiterplatereaderwithin15minutes.CalculationofresuItsAveragetheduplicatereadingsforeachstandardandsampleandsubtrac