血液系統(tǒng)教學(xué)課件：臨床免疫學(xué)檢查

臨床免疫學(xué)檢查免疫：機(jī)體對(duì)刺激的反應(yīng)外界刺激：通常而言的免疫反應(yīng)，如SARS,禽流感等內(nèi)在刺激：自身免疫反應(yīng)，如自身免疫病免疫反應(yīng)：抗原刺激，產(chǎn)生抗體，形成免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體，免疫效應(yīng)。檢測(cè)對(duì)象：抗原，抗體，免疫細(xì)胞，補(bǔ)體免疫學(xué)檢查免疫學(xué)檢查己成為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的重要組成部分特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高、穩(wěn)定簡(jiǎn)便、快捷，應(yīng)用日廣應(yīng)用：檢測(cè)具有免疫活性的物質(zhì)如抗原、抗體、補(bǔ)體等；檢測(cè)體液中其他微量物質(zhì)，如激素、酶、血漿微量蛋白、血藥濃度、微量元素等臨床免疫學(xué)檢查的應(yīng)用意義診斷和鑒別診斷療效觀察預(yù)后判斷值得注意：任何臨床免疫學(xué)的檢查結(jié)果都必須結(jié)合臨床癥狀的特點(diǎn)綜合判斷，它只能提供支持診斷的信息，而不是確定診斷的確鑿證據(jù)。分類：

免疫檢驗(yàn)

細(xì)胞免疫檢驗(yàn)

體液免疫檢驗(yàn)

免疫細(xì)胞數(shù)量

抗原活性功能抗體補(bǔ)體第一節(jié)體液免疫檢測(cè)一免疫球蛋白檢測(cè)免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是指具有抗體活性和(或)抗體樣結(jié)構(gòu)的球蛋白.由B淋巴細(xì)胞激活，轉(zhuǎn)化成漿細(xì)胞，產(chǎn)生抗體，即免疫球蛋白存在于血液,體液,外分泌液和某些細(xì)胞的胞膜上血液,體液,外分泌液中免疫球蛋白結(jié)合抗原，細(xì)胞膜上的免疫球蛋白能特異性識(shí)別抗原，并激活細(xì)胞免疫球蛋白G免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)含量多，占70%-80%.對(duì)病毒,細(xì)菌和寄生蟲均有抗體活性能夠通過(guò)胎盤免疫球蛋白A免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)分為血清型和分泌型.血清型占10%-15%呼吸道,消化道和泌尿生殖道的淋巴組織能合成大量的分泌型IgA免疫球蛋白M免疫球蛋白M(immunoglobulinM,IgM)分子量最大,約占5%-10%.能凝集和溶解細(xì)胞冷凝集素,傷寒沙門菌的抗體屬于此類檢測(cè)方法單向免疫擴(kuò)散：抗Ig的血清（抗-抗體）混合于瓊脂糖凝膠板內(nèi)，打孔，加樣。待測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原（Ig）則產(chǎn)生擴(kuò)散，與抗血清形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)的面積與相應(yīng)抗原含量相關(guān)免疫比濁法：原理基本同上，即濁度與相應(yīng)抗原含量相關(guān)正常值依檢測(cè)方法而異臨床意義IgG,IgA,IgM均升高見(jiàn)于慢性感染,慢性肝病,肝硬化,淋巴瘤和某些自身免疫病單一免疫球蛋白增高見(jiàn)于免疫增殖性疾病如多發(fā)性骨髓瘤,原發(fā)性巨球蛋白血癥免疫球蛋白降低見(jiàn)于先天性和獲得性免疫缺陷病

二M蛋白檢測(cè)M蛋白(Mprotein)或稱單克隆免疫球蛋白(monoclonalimmunoglobulins).具有相同的結(jié)構(gòu)和電泳遷移率不具備抗體活性檢測(cè)方法:

蛋白電泳法,免疫比濁法或免疫電泳法參考值:

陰性臨床意義出現(xiàn)見(jiàn)于:多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥，重鏈病，輕鏈病，半分子病三血清補(bǔ)體檢測(cè)補(bǔ)體系統(tǒng)功能：廣泛參與機(jī)體的抗感染防御反應(yīng)介導(dǎo)細(xì)胞溶解調(diào)理吞噬免疫黏附參與炎癥反應(yīng)引起機(jī)體免疫損傷等血清總補(bǔ)體活性測(cè)定檢測(cè)方法：補(bǔ)體最主要的活性是溶細(xì)胞作用，這種活性很容易通過(guò)溶血反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。溶血反應(yīng)對(duì)補(bǔ)體的劑量依賴呈一個(gè)特殊的S形曲線，一般以50%溶血率作為判別點(diǎn)（CH50）。參考值：試管法50000-100000U/L臨床意義：

CH50活性升高：急性炎癥、急性組織損傷、惡性腫瘤及妊娠等。

CH50活性降低：急性腎小球腎炎、自身免疫性疾病、亞急性感染性心內(nèi)膜炎、慢性肝病、肝硬化、Graves病、艾滋病等。血清補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)檢測(cè)方法：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散法或免疫比濁法參考值：根據(jù)檢測(cè)方法臨床意義：增高：是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在急性炎癥、傳染病早期、急性組織損傷、惡性腫瘤、移植排斥反應(yīng)等。降低：合成減少：慢性肝病；原料不足：營(yíng)養(yǎng)不良；消耗或丟失過(guò)多：SLE等自身免疫??；先天性補(bǔ)體缺乏第二節(jié)細(xì)胞免疫檢查T淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物測(cè)定細(xì)胞免疫主要由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)依其表面標(biāo)志物的不同,T淋巴細(xì)胞分為不同的亞群，CD3+代表總T細(xì)胞，CD4+代表T輔助細(xì)胞（TH），CD8+代表T抑制細(xì)胞（Ts）主要采用免疫熒光法檢測(cè)(FACS)參考值:CD3+61%-85%CD4+28%-58%CD8+19%-48%臨床意義CD3+增高:見(jiàn)于甲亢,甲狀腺炎,重癥肌無(wú)力,排斥反應(yīng)等CD3+降低:見(jiàn)于免疫缺陷病CD4+降低:不易激活T細(xì)胞，見(jiàn)于惡性腫瘤，某些病毒感染，應(yīng)用免疫抑制劑，嚴(yán)重創(chuàng)傷等CD8+降低:免疫過(guò)強(qiáng)，導(dǎo)致自身免疫性疾病CD4+/CD8+比值升高:腫瘤及自身免疫病CD4+/CD8+比值降低:AIDS第四節(jié)感染免疫檢測(cè)一細(xì)菌感染免疫檢測(cè)(一)抗鏈球菌溶血素“O”測(cè)定鏈球菌溶血素‘O’是A族溶血性鏈球菌的重要代謝產(chǎn)物，為蛋白質(zhì)具有溶血活性，殺傷白細(xì)胞和血小板具有抗原性,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體,稱為抗鏈球菌溶血素‘O’(anti-streptolysin‘O’,ASO)檢測(cè)方法:乳膠凝集法或免疫比濁法參考值:乳膠凝集法<500U臨床意義ASO升高:見(jiàn)于A族溶血性鏈球菌感染引起的疾病,如感染性心內(nèi)膜炎,扁桃體炎,風(fēng)濕熱以及鏈球菌感染后腎小球腎炎等感染后一周,ASO開始升高,4-6周達(dá)高峰.可持續(xù)幾個(gè)月或幾年.確有感染依據(jù),但ASO持續(xù)陰性,可能是早期用過(guò)大量抗生素或免疫抑制劑等(二)肥達(dá)(Widal)反應(yīng)傷寒沙門菌屬于沙門菌的D群,副傷寒甲,乙,丙沙門菌屬于沙門菌屬中的A,B和C群為革蘭氏陰性短桿菌含有菌體‘O’抗原和鞭毛‘H’抗原副傷寒甲,乙,丙的‘H’抗原分別稱為A,B,C感染后一周，機(jī)體產(chǎn)生抗體（10%），第二周（60%-70%），第四周達(dá)高峰（90%以上）檢測(cè)方法將傷寒,副傷寒沙門菌的菌液（作為抗原）分別與患者的血清（抗體）在生理鹽水介質(zhì)中進(jìn)行凝集反應(yīng)參考值:

傷寒O凝集價(jià)<1:80

傷寒H凝集價(jià)<1:160

副傷寒A,B,C凝集價(jià)<1:80臨床意義可作為傷寒，副傷寒的輔助診斷有幾種情況:O升高,H正常:早期或其他沙門菌感染的交叉反應(yīng)O升高,H升高:傷寒可能性大O正常,H升高:不久前患過(guò)傷寒或接種過(guò)疫苗,或非特異性的回憶反應(yīng)O升高,A,B,C任何一項(xiàng)升高:可能分別為副傷寒甲,乙,丙.單次效價(jià)增高達(dá)診斷標(biāo)準(zhǔn),有診斷意義，若僅輕度增高，意義不大.要多次動(dòng)態(tài)觀察.若效價(jià)增高>4倍,診斷價(jià)值較大早期使用抗生素,激素以及免疫功能低下的傷寒患者，肥達(dá)反應(yīng)可出現(xiàn)陰性（發(fā)生率約10%左右）(三）C反應(yīng)蛋白測(cè)定C反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein,CRP)是一種能與肺炎鏈球菌C多糖發(fā)生反應(yīng)的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白,具有激活補(bǔ)體,促進(jìn)吞噬和免疫調(diào)理作用主要由肝臟產(chǎn)生檢測(cè)方法:免疫比濁法參考值:成人<8.2mg/L臨床意義組織損傷各種細(xì)菌感染風(fēng)濕性疾病活動(dòng)期惡性腫瘤第五節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物由腫瘤細(xì)胞或機(jī)體所產(chǎn)生存在于血液,細(xì)胞,組織或體液中反映腫瘤的存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)包括蛋白質(zhì),激素,酶和多胺等含量低,需用非常敏感的化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA),放射免疫法(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)等方法進(jìn)行測(cè)定一甲胎蛋白測(cè)定甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)是胎兒發(fā)育早期,由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白電泳時(shí)位于白蛋白和ɑ1球蛋白之間胎兒出生后不久逐漸消失參考值:血清<25ug/L臨床意義原發(fā)性肝癌AFP明顯升高,常>300ug/L。但也可不升高病毒性肝炎,肝硬化可有不同程度的升高,但常<300ug/L生殖腺胚胎性腫瘤可升高,如睪丸癌,畸胎瘤等妊娠3個(gè)月后，開始升高,7-8個(gè)月達(dá)高峰,一般<300ug/L.分娩后3周恢復(fù)正常二癌胚抗原測(cè)定癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)是一種可溶性糖蛋白.胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管,胰腺和肝臟,出生后組織內(nèi)含量很低是一種廣譜的腫瘤標(biāo)志物,在胃腸道腫瘤,乳腺癌,肺癌等均可升高參考值:血清<5ug/L臨床意義升高見(jiàn)于結(jié)腸癌（74%）,直腸癌（76%）,乳腺癌（60%）,胃癌,肺癌（70%）,胰腺癌（90%）等，常超過(guò)60ug/L連續(xù)檢測(cè)可用于惡性腫瘤手術(shù)后療效觀察和預(yù)后判斷某些情況下,可有不同程度的升高,如腸道憩室炎,直腸息肉,結(jié)腸炎,肝硬化,肝炎和肺部疾病.吸煙者也可輕度升高三癌抗原125測(cè)定癌抗原125(cancerantigen125,CA125)是卵巢癌相關(guān)抗原。是一種大分子多聚糖蛋白存在于上皮性卵巢癌組織和病人血清中參考值:血清<35000U/L臨床意義卵巢癌CA125明顯升高，陽(yáng)性率達(dá)97%其他非卵巢惡性腫瘤也可升高非惡性腫瘤也可升高良性和惡性的胸腹水中也可升高妊娠的頭三個(gè)月也可升高

前列腺特異性抗原測(cè)定前列腺特異性抗原(prostatespecificantigen,PSA)是一種由前列腺上皮細(xì)胞分泌的蛋白酶參考值：見(jiàn)書臨床意義前列腺癌血清PSA升高（90%-97%）前列腺肥大，前列腺炎，腎臟和泌尿生殖系統(tǒng)疾病也可升高（14%）第六節(jié)自身抗體檢查自身免疫?。簷C(jī)體免疫耐受性減低或破壞，自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞損傷組織器官自身抗原：細(xì)胞的任何成分自身抗體：異常的細(xì)胞成分或與機(jī)體細(xì)胞成分相似的外來(lái)病原微生物成分，刺激機(jī)體產(chǎn)生自身抗體免疫損傷：自身抗體，免疫復(fù)合物42自身免疫性疾病的重要標(biāo)志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動(dòng)性相關(guān)參與免疫病理性損傷自身抗體的特性43抗核抗體（ANA）抗可提取性核抗原抗體（ENA）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）類風(fēng)濕因子（RF）抗角蛋白抗體（AKA）抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）抗心磷脂抗體（ACLA）常檢測(cè)的自身抗體一抗核抗體檢測(cè)

抗核抗體(anti-nuclearantibody,ANA)是針對(duì)細(xì)胞核成分的自身抗體．

檢測(cè)方法：間接免疫熒光法ANA抗核抗體

(均質(zhì)型：活動(dòng)性SLE)ANA抗核抗體

(周邊型：活動(dòng)性SLE)ANA抗核抗體

(斑點(diǎn)型：SSc、MCTD、SLE)ANA抗核抗體

(核仁型：RA、SLE)ANA抗核抗體

(著絲點(diǎn)型：Raynaud綜合征)ANA陽(yáng)性見(jiàn)于（%）SLE95-99SLE親屬15-25RA50-75MCTD95-100PSS95PM80SS75-90肝硬化15自免肝60-90正常人3-5正常老人20-40腫瘤15-25抗ds-DNA抗體

對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)特異性達(dá)95%,敏感性約70%抗ds-DNA抗體53抗可提取性核抗原（ENA）抗體抗Sm抗體：SLE標(biāo)記性抗體（20%~30%）抗nRNP抗體：MCTD95%~100%（高滴度）抗SSA抗體：PSS60%~75%，其它CTD抗SSB抗體：

PSS10%~40%，其它CTD抗Scl-70抗體：SSc25%~75%,標(biāo)記性抗體抗Jo-1抗體：PM/DM25%，標(biāo)記性抗體抗rRNP抗體：

SLE特異性抗體（10%~30%）54抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，對(duì)系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。

與小血管炎相關(guān)的自身抗體檢測(cè)與應(yīng)用55

熒光染色型

靶抗原

胞漿型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）殺菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)髓過(guò)氧化物酶（MPO）組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（LF）白細(xì)胞彈性蛋白酶（HLE）

非典型型(aANCA)兼有兩種特性ANCA熒光染色型與靶抗原56周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（pANCA）主要見(jiàn)于炎癥性腸病（潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩?。?7胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)主要見(jiàn)于Wegener’s肉芽腫及微小多動(dòng)脈炎ANCA相關(guān)性疾病59類風(fēng)濕因子（rheumat