植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)

關(guān)于植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)第一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)、儀器設(shè)備及操作技術(shù)第二節(jié)培養(yǎng)基的組成、配制與滅菌第三節(jié)植物離體培養(yǎng)體系的建立

本章內(nèi)容第二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一一、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)構(gòu)及設(shè)計(jì)要求：準(zhǔn)備室;無菌操作室;培養(yǎng)室;溫室；細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)、儀器設(shè)備及操作技術(shù)第三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（一）準(zhǔn)備室：

1.主要功能：用于培養(yǎng)器皿的清洗、培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌、試管苗的出瓶及整理等工作。2.主要儀器設(shè)備及用品：

冰箱、天平、高壓滅菌鍋、pH計(jì)、干燥箱、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、水槽、涼干架、藥品柜、離心機(jī)、水浴鍋、微波爐、電爐、磁力攪拌器、蠕動(dòng)泵、移液器、各種玻璃器皿（燒杯、量筒、容量瓶、試劑瓶、三角瓶等）及培養(yǎng)基分裝用品等。第四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一百分之一天平千分之一天平萬分之一天平第五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一各種型號(hào)的高壓滅菌鍋第六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

移液器第七頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（二）接種室（無菌操作室）：

1、功能：植物材料的滅菌、接種以及培養(yǎng)物的繼代轉(zhuǎn)接等。接種室要求保持潔凈，與化學(xué)實(shí)驗(yàn)室之間應(yīng)設(shè)置緩沖室。2、儀器設(shè)備及用品：

超凈工作臺(tái)、紫外燈、小推車、擱架、磁盤、接種工具（各種鑷子、解剖刀、手術(shù)剪、普通剪刀接種針、酒精燈、手持噴霧器、細(xì)菌過濾器等）等。第八頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一超凈工作臺(tái)第九頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（三）培養(yǎng)室：

1、功能：主要用于植物材料的培養(yǎng)。要求室內(nèi)潔凈并能保持一定的溫度、光照以及濕度以適合植物材料的生長(zhǎng)和分化。2、儀器設(shè)備及用品：培養(yǎng)架及燈管、搖床（振蕩器）、空調(diào)、自動(dòng)定時(shí)器、加濕及除濕器、光照培養(yǎng)箱、溫濕度計(jì)等。第十頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一培養(yǎng)架第十一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一光照培養(yǎng)箱第十二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一恒溫振蕩器

多用振蕩器第十三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（四）細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室：

1、功能：主要用于培養(yǎng)材料的顯微觀察及照相等。2、儀式設(shè)備及用品：

體視顯微鏡、普通顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、配套顯微照相裝置、普通相機(jī)或數(shù)碼相機(jī)、切片機(jī)及配套制片及染色用品等。第十四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一體視顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡倒置熒光顯微鏡第十五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一二、實(shí)驗(yàn)室基本操作：（一）洗滌：

1、普通器皿：采用洗衣粉、洗潔精等中性洗滌劑洗滌。

2、難清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重鉻酸鉀洗液浸泡，最后清水沖洗，或用超聲波儀清洗。第十六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（二）滅菌：

1、器具滅菌：培養(yǎng)皿、解剖刀、鑷子等用品。（1）干熱滅菌：鋁箔包好后，放于恒溫干燥箱內(nèi)，150℃保溫2小時(shí)，成本較高。（2）高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)120℃15-20min

。（3）灼燒滅菌：接種時(shí)，解剖刀及鑷子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精燈火焰上灼燒殺菌。第十七頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一2、培養(yǎng)基滅菌：

采用高壓蒸汽滅菌，120℃15－20min。培養(yǎng)基體積越大，滅菌時(shí)間越長(zhǎng)。3、不耐高溫化合物：

采用過濾滅菌，如IAA等。4、外植體的表面滅菌：

采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效氯1％的次氯酸鈉（5-30分鐘）、0.1－0.2%的氯化汞（2-15分鐘）等。殺菌劑中加入幾滴吐溫－20或80（Tween－20或80）效果較好。第十八頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（三）無菌操作：

1、保持接種室的無污染環(huán)境，定期熏蒸或噴霧處理，進(jìn)行消毒。接種前打開超凈工作臺(tái)及紫外燈照射20-30min，關(guān)閉紫外等燈后使氣體散出后開始操作。

2、保持超凈工作臺(tái)的潔凈：接種前用70％乙醇擦拭臺(tái)面或用噴壺噴霧，操作前，將手和手臂用70％乙醇消毒，所需試驗(yàn)用品用乙醇擦拭后放入超凈工作臺(tái)。第十九頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一3、點(diǎn)燃酒精燈，進(jìn)行操作，接種材料前后，灼燒瓶口，工具要灼燒徹底，防止交叉污染。4、保持接種室的潔凈，發(fā)現(xiàn)污染及時(shí)挑出，并在滅菌后清洗，以減少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接種室換拖鞋以保持接種室的潔凈。第二十頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

第二節(jié)培養(yǎng)基的組成、配制與滅菌第二十一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一一、培養(yǎng)基的組成和作用培養(yǎng)基（medium）是植物組織培養(yǎng)的重要材料，是外植體生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，只有配制出適宜的培養(yǎng)基，才能使組織培養(yǎng)獲得成功。通常植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基包括以下六大類成分，即礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)成分、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、碳源、瓊脂以及其他附加物等。培養(yǎng)基的主要指標(biāo)是營(yíng)養(yǎng)成分及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的濃度。第二十二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

培養(yǎng)基成分

水

植物激素

碳源

有機(jī)物（維生素、肌醇、氨基酸）

培養(yǎng)體支持材料

輔助性物質(zhì)

無機(jī)鹽（大量元素、微量元素、鐵鹽）第二十三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

碳源碳源主要為細(xì)胞提供合成新化合物的骨架，為細(xì)胞的呼吸代謝提供底物與能源，此外還能維持一定的滲透壓。常用的碳源主要是蔗糖，使用濃度在10-50g/L，此外果糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物組織培養(yǎng)。但在胚培養(yǎng)時(shí)采用40-150g/L的高濃度，因蔗糖對(duì)胚狀體的發(fā)育起重要作用糖濃度高低直接影響形態(tài)建成。第二十四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一無機(jī)鹽元素名稱添加形式

NKNO3,NH4NO3大量PKH2PO4NaH2PO4元素KKClKNO3(≥0.5mmol/L)CaCaCl2·2H2OMgMg2SO4·7H2OSMg2SO4·

7H2OFeFeNa2-EDTA微量BH3BO3元素MnMnSO4(≤0.5mmol/L)CuCuSO4MoNa2MoO4·2H2OClCaCl2·2H2O第二十五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一種類：VB1（鹽酸硫胺素）、VB6（鹽酸吡哆醇）、Vpp（煙酸）、Vc(抗壞血酸）濃度：0.1-1.0mg/L

作用：VB1促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力

VB6促根生長(zhǎng)

Vpp與代謝和胚發(fā)育有關(guān)

Vc防組織褐變維生素第二十六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一肌醇(又叫環(huán)己六醇）

能促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)以及胚狀體和芽的形成。對(duì)組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用，對(duì)細(xì)胞壁的形成也有作用。使用濃度一般為50～lOOmg／L第二十七頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一氨基酸(alminoacide)

培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用，用量在1-3mg／L之間。有時(shí)應(yīng)用水解乳蛋白或水解酪蛋白，用量在10～1000mg／L之間。由于它們營(yíng)養(yǎng)豐富，極易引起污染。第二十八頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一1、生長(zhǎng)素類(auxin)（1）IAA(吲哚乙酸)是生長(zhǎng)素中活力最弱的激素，對(duì)器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的1AA分解酶降解，受光也易分解。（2）NAA(萘乙酸)在組織培養(yǎng)中的起動(dòng)能力要比IAA高出3～4倍，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖和生長(zhǎng)。（3）IBA(吲哚丁酸)是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。（4）2,4-D(2,4-2氯苯氧乙酸)起動(dòng)能力比IAA高10倍，特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高，但它強(qiáng)烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。適宜的用量范圍較狹窄，過量常有毒效應(yīng)。植物激素第二十九頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一2、細(xì)胞分裂素類(cytokinin)（1）6-BA(6-芐基氨基嘌呤）應(yīng)用廣，人工合成。（2）Zt(zeatin玉米素)是一種活性最大的天然細(xì)胞分裂素，效果顯著，但非常昂貴。（3）Kt(糠基腺嘌呤）功能：①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。③抑制根的分化第三十頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

3、GA(gibberellicacid赤霉素)

培養(yǎng)基中添加的是GA3，主要用于促進(jìn)幼苗莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，促進(jìn)不定胚發(fā)育成小植株；赤霉素和生長(zhǎng)素協(xié)同作用，對(duì)形成層的分化有影響，當(dāng)生長(zhǎng)素/赤霉素比值高時(shí)有利于木質(zhì)部分化，比值低時(shí)有利于韌皮部分化。第三十一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

高有利于根的形成和愈傷組織

生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素

適中有利于根芽的分化

低有利于芽的形成

生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的使用甚微，一般用mg／L表示濃度。一般生長(zhǎng)素濃度的使用為0.05～5mg／L，細(xì)胞分裂素0.05～10mg／L。第三十二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一培養(yǎng)體支持材料1.瓊脂A用量7－10g/LB新買應(yīng)試凝固力2.其它玻璃纖維濾紙橋海綿等▲第三十三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一輔助性物質(zhì)抗生素抗氧化物活性炭天然復(fù)合物▲第三十四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一1.常用種類：青霉素鏈霉素慶大霉素等2.用量：5－20%3.注意：抗生素對(duì)組織生長(zhǎng)有抑制作用，使用要慎重

抗生素第三十五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一抗氧化物常用抗氧化劑及使用：半胱氨酸、VC（50－200mg/L液洗滌外植體傷口表面）。

活性炭1.作用：具吸附作用；莖尖初代培養(yǎng)可防褐化；促進(jìn)新梢增殖（濃度0.1-0.2%）；促進(jìn)生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）。利于胚胎培養(yǎng)。2.常用濃度：0.5-10g/L

3.注意：活性炭具副作用。▲第三十六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一椰乳：一般使用濃度在100～200ml／L它在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。在馬鈴薯莖尖分生組織和草莓微莖尖培養(yǎng)中起明顯的促進(jìn)作用。香蕉：用量為100～200ml／L。用黃熟的小香蕉，加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙?。?duì)pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應(yīng)用，對(duì)發(fā)育有促進(jìn)作用。馬鈴薯(potato)：去掉皮和芽后，加水煮30min，再經(jīng)過過濾，取其濾液使用。用量為150～200g／L，對(duì)pH值緩沖作用也大，添加后可得到健壯的植株。水解酪蛋白：為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸，使用濃度為100～200mg／L。受酸和酶的作用易分解，使用時(shí)要注意。天然復(fù)合物第三十七頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

培養(yǎng)基種類MS培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基White培養(yǎng)基N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基的類型：第三十八頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一N6培養(yǎng)基特點(diǎn)：成分簡(jiǎn)單KNO3

和(NH4)2SO4含量高適合花藥培養(yǎng)★White培養(yǎng)基特點(diǎn)：無機(jī)鹽量較低，適合生根培養(yǎng)第三十九頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一B5培養(yǎng)基特點(diǎn)：含較低的銨雙子葉植物尤其木本植物組培可選擇MS培養(yǎng)基特點(diǎn)：無機(jī)鹽、離子濃度高，硝酸鹽含量較高。有機(jī)成分復(fù)雜用于原生質(zhì)體培養(yǎng)(包括原生質(zhì)融合的培養(yǎng))KM-8P培養(yǎng)基特點(diǎn)：第四十頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一表1

MS培養(yǎng)基的組成配方組成成分?jǐn)?shù)量(mg/L)組成成分?jǐn)?shù)量(mg/L)NH4NO31650Na2-EDTA37.3KNO31900FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O440CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O370蔗糖30KH2PO4170pH5.8KI0.83肌醇100.0H3BO36.2煙酸0.5MnSO4·4H2O22.3鹽酸吡哆醇0.5ZnSO4·7H2O8.6甘氨酸2.0Na2MoO4·2H2O0.25鹽酸硫銨等0.4CoCl2·6H2O0.025第四十一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一表2

B5培養(yǎng)基的組成和配方組成成分?jǐn)?shù)量(mg/l）組成成分?jǐn)?shù)量(mg/l)KNO32500FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O150CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O250蔗糖40(NH4)2SO4

134pH5.5KI0.75肌醇100H3BO4

3.0煙酸1.0MnSO4·4H2O10鹽酸吡哆醇1.0ZnSO4·7H2O2.0激動(dòng)素0.1Na2MoO4·2H20.252,4－D0.1－1.00.025鹽酸硫銨10Na2-EDTA37.3

CoCl2·6H2O第四十二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一表3N6培養(yǎng)基的組成和配方組成成分?jǐn)?shù)量(mg/l)組成成分(mg/l)KNO3

2.3Na2－EDTA37.3CaCl2·2H2O166FeSO4·7H2O27.8MgSO4·7H2O185蔗糖50KH2PO4

400pH5.8(NH4)2SO4

463煙酸0.5KI0.8鹽酸吡哆醇0.5H3BO3

1.6甘氨酸2.0MnSO4·4H2O4.4鹽酸硫銨1.0ZnSO4·7H2O1.5第四十三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一三、培養(yǎng)基母液及激素母液的配制：母液：欲配制液的濃縮液。一般母液配成比所需濃度高10～100倍。大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類母液等。配制時(shí)注意一些離子之間易發(fā)生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液時(shí)要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應(yīng)選取等級(jí)較高的化學(xué)純或分析純。母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存，用時(shí)再按比例稀釋。第四十四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（一）母液配制流程圖

稱量

母液分裝確定培養(yǎng)基

溶解

定容

貼標(biāo)簽保存于冰箱母液配制(以MS為例)第四十五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一母液種類種類成分規(guī)定用量(mg/L)擴(kuò)大倍數(shù)稱取量(mg)母液定容體積(ml)配1LMS培養(yǎng)基吸取量(ml)

大量元素

KNO3NH4NO3MgSO4.7H2OKH2PO4CaCI.2H2O19001650370170440

203800033000740034008800

1000

50微量元素MnSO4.4H2OZnSO47H2OH3BO3KINa2MoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCI2.6H2O22.38.66.20.830.250.0250.025

100223086062083252.52.5

1000

10鐵鹽Na2-EDTAFeSO4.7H2O37.327.810037302780100010有機(jī)物煙酸甘氨酸VB6VB1肌醇

50251005255000

500

100.520.50.1100第四十六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一(二)母液配制要求：1、母液濃縮倍數(shù)：10-100，大量元素20；微量元素100、鐵鹽100；有機(jī)物50；2、選用蒸餾水、重蒸餾水、分析純或化學(xué)純?cè)噭?、防止沉淀:

Ca2+和S042-，Ca2+Mg2+和PO43-4、激素母液濃度：1mg/ml,1次配成50或100ml5、激素溶解：

IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；

NAA先溶于熱水或95%酒精再加水；

2，4-D先溶于1mlNaOH再加水；

KT、BA先溶于1mlHCl再加水。

第四十七頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一四、培養(yǎng)基的配制：1、量取母液：營(yíng)養(yǎng)元素和激素。2、稱量蔗糖、瓊脂，放入600ml左右蒸餾水的鍋內(nèi)，電路上加熱，使瓊脂溶化。3、加入母液，混合均勻，調(diào)整pH值。4、分裝入瓶，每瓶40－50ml。5、封口：用4－6層稱量紙封口，之后滅菌備用。第四十八頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一母液1100ml瓊脂7g母液210ml蔗糖30g

母液310ml

母液410mlBA2mgNAA1.5mg加熱定容1000ml用氧化鈉調(diào)PH5.8分裝（占容器1/4～1/3，不沾瓶壁口）高壓滅菌（121°C，1.1kg/cm2，20min）第四十九頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一

大量元素母液

微量元素母液

鐵鹽母液

有機(jī)物母液

取100ml取10ml取10ml取10ml注：MS培養(yǎng)基配制容量瓶要求：一次性移取，不能吸進(jìn)吸耳球里，數(shù)量看準(zhǔn)，不滴不漏，吹凈為度。移母液第五十頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一用0.1MNaOH或HCl調(diào)PH值為5.8。趁熱分裝，100ml的三角瓶約裝入30－40ml,35瓶/L。調(diào)PH值：分裝：趁熱分裝，100ml的三角瓶約裝入30－40ml,35瓶/L。第五十一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一扎口與滅菌:要求封口松緊適宜，系活扣，便于接種操作。培養(yǎng)基應(yīng)及時(shí)滅菌，防止變質(zhì)。第五十二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一五、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）：1、加熱：滅菌前檢查滅菌鍋內(nèi)水量是否充足，然后將培養(yǎng)基放于滅菌鍋內(nèi)，改好蓋，關(guān)閉放氣閥，打開電源，加熱升溫。2、排氣：當(dāng)溫度升至0.05MPa時(shí)，打開放氣閥徹底排出鍋內(nèi)冷空氣。然后關(guān)閉放氣閥，促使壓力繼續(xù)上升。第五十三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一3、溫度控制：

當(dāng)鍋內(nèi)壓力升至0.10MPa時(shí)，計(jì)時(shí)15－20分鐘，計(jì)時(shí)結(jié)束后，關(guān)閉電源。4、出鍋：

當(dāng)滅菌鍋?zhàn)匀焕鋮s后，取出培養(yǎng)基，放置于接種室備用。第五十四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一六、培養(yǎng)基的保存：1、防塵：防治灰塵污染。2、避光：吲哚乙酸等易于分解，要注意遮光。3、恒溫：4oC可保存3－6周，室溫下兩周內(nèi)用完。4、定期更新：不易長(zhǎng)期保存。第五十五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一第三節(jié)植物離體培養(yǎng)體系的建立第五十六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一一、植物組織培養(yǎng)的階段劃分：通常將組織培養(yǎng)過程劃分為四個(gè)階段

1、起始培養(yǎng)階段（誘導(dǎo)階段）

2、增殖培養(yǎng)階段

3、生根培養(yǎng)階段

4、馴化移栽第五十七頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一第五十八頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（一）外植體的起始培養(yǎng)過程

1、起始培養(yǎng)的一般過程：

A、選取適宜的基因型（品種）；

B、選取適宜的外植體；常用外植體有莖尖、莖段、節(jié)間、葉片、葉柄等。

C、流水沖洗外植體；

D、外植體切割、分離及滅菌處理；

E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長(zhǎng)。二、外植體起始培養(yǎng)（無菌體系建立）第五十九頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一2、接種外植體的生長(zhǎng)過程：

A細(xì)胞分裂的啟動(dòng)；

B細(xì)胞增殖；

C組織和器官的形成。

第六十頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一第六十一頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一（二）影響外植體起始培養(yǎng)的因素：

1、影響外植體起始的因素

A

外植體

B

培養(yǎng)基組成成分

C培養(yǎng)條件第六十二頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一外植體：

(1)外植體種類及基因型

(2)外植體供體植株和外植體的來源與生理狀態(tài)

(3)外植體大小

(4)外植體的極性第六十三頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一外植體種類及基因型單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。b.木本植物較難誘導(dǎo)。c.存在基因型差異（如番茄29%~63%）d.開始生長(zhǎng)季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。第六十四頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一外植體狀態(tài)：第六十五頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一外植體大?。和庵搀w越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。外植體極性：當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時(shí)，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。第六十六頁，共七十八頁，編輯于2023年，星期一B、培養(yǎng)基