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文檔簡介
實驗基本組織觀察第1頁/共39頁【實驗目的】學習顯微鏡使用,了解人體基本組織結(jié)構(gòu)特征、分布【實驗對象】四大基本組織切片:運動神經(jīng)元切片橫紋肌縱橫切片上皮組織切片(復層鱗狀上皮)疏松結(jié)締組織馬蛔蟲卵有絲分裂切片人血涂片第2頁/共39頁【實驗原理】光學顯微鏡的成像原理【實驗方法與步驟】1、取出顯微鏡從顯微鏡鏡盒,以正確方式(一手托鏡臂一手托鏡底)取出顯微鏡。2、安裝正確安裝目鏡和物鏡(高倍鏡×40和低倍鏡×10),正確放置切片于載物臺上,使組織位于視野中央,調(diào)整聚光鏡至適當亮度。3、觀察先在低倍鏡下觀察,再在高倍鏡下觀察。依次觀察四大基本組織。4、選擇一張切片,畫出基本組成結(jié)構(gòu)的形態(tài),并標注名稱。第3頁/共39頁【注意事項】1、用擦鏡紙擦拭鏡頭,勿用手擦拭鏡頭。2、調(diào)節(jié)粗準焦旋鈕和細準焦旋鈕時,需小心,勿損傷切片。第4頁/共39頁實驗2生理實驗的常用儀器、器械和一般操作方法第5頁/共39頁隨著科學技術的發(fā)展,先進的科學儀器設備在動物生理學研究中廣泛地得到應用,才使我們對生命活動有了更為本質(zhì)的認識。因此學習和掌握動物生理常用儀器、設備的使用方法對做好動物生理實驗也十分重要。進行動物生理學實驗所需的儀器總體上可分為4大系統(tǒng)(圖2-l)。第6頁/共39頁(1)刺激系統(tǒng):是對欲研究的對象施加刺激,引起其生理功能變化(即產(chǎn)生興奮)的一套儀器設備。多種刺激因素,如光、聲、電、溫度、機械及化學因素都可興奮組織,使其產(chǎn)生生理活動的變化。但生理實驗中應用最多的還是電刺激,因為電刺激較容易控制、對組織沒有或損傷很小,引導方便,可重復使用。電刺激系統(tǒng)包括電子刺激器、刺激隔離器和各種電極。(2)引導、換能系統(tǒng):生理功能變化的信號只有用一定的議器設備顯示、記錄下來才有研究的價值。因此需要有一定的裝置能將其引導到顯示、記錄儀器上。若生理信號是電信號引導系統(tǒng)可能是引導電極。包括記錄單細胞活動的玻璃微電極和記錄一群細胞電活動的金屬電極。若生理現(xiàn)象為其他能量形式時,如機械收縮、壓力、振動、溫度和某種化學成分變化等,都需要將原始生理信號轉(zhuǎn)換為電的信號加以引導,這就是各種形式的換能器。(3)信號調(diào)節(jié)放大系統(tǒng):有的生理信號較為微弱,尚需進行適當?shù)姆糯?。信號調(diào)節(jié)系統(tǒng)是一種放大器或放大器的組合,對信號基線的位置和輸出信號幅度的高低(增益,信號的Y軸)進行調(diào)節(jié)。最原始的經(jīng)典儀器是各式各樣的杠桿、瑪利式氣鼓、各種檢壓計等、現(xiàn)代儀器設備包括示波器、記錄儀中的放大器部分和專用的前置放大器、微電極放大器等。(4)顯示與記錄系統(tǒng)有用紙帶記錄、顯示屏記錄或顯示信號的儀器。通過調(diào)節(jié)相關的旋鈕調(diào)節(jié)走紙速度或掃描速度(信號的X軸)將信號擴展開來。記紋鼓是一種較為原始的經(jīng)典記錄儀。由于計算機技術的發(fā)展。計算機生物信號采集處理系統(tǒng)已在生理學實驗中廣泛應用,有替代刺激器、放大器、示波器和記錄儀的趨勢。第7頁/共39頁實驗3運動系統(tǒng)(一)
——骨骼第8頁/共39頁【實驗內(nèi)容】
1、觀察、辨識、記憶人體骨骼的分布。2、觀察、辨識、記憶人體206塊骨骼的形態(tài)、名稱、位置。3、觀察、辨識、記憶人體主要骨連結(jié)的形態(tài)、名稱、位置。4、觀察、辨識、記憶骨骼重要組成結(jié)構(gòu)的名稱、組成及意義:胸廓、脊柱、骨盆、足弓。第9頁/共39頁實驗4運動系統(tǒng)(二)
——肌肉第10頁/共39頁【實驗內(nèi)容】
1、觀察、辨識、記憶人體骨骼肌的形態(tài)和分類、起止和作用2、觀察、辨識、記憶人體全身骨骼肌名稱、位置:頭頸肌、軀干肌、四肢肌,見教材《人體解剖生理學》p.43表2-1第11頁/共39頁實驗5.1神經(jīng)肌肉標本制備(蛙坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本制備)第12頁/共39頁【實驗目的】
學習生理學實驗基本的組織分離技術;學習和掌握制備蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標本的方法;了解刺激的種類?!緦嶒炘怼?/p>
蛙類的一些基本生命活動和生理功能與恒溫動物相似,若將蛙的神經(jīng)一肌肉標本放在任氏液中,其興奮性在幾個小時內(nèi)可保持不變。若給神經(jīng)或肌肉一次適宜刺激,可在神經(jīng)和肌肉上產(chǎn)生一個動作電位,肉眼可看到肌肉收縮和舒張一次,表明神經(jīng)和肌肉產(chǎn)生了一次興奮。在生理學實驗中常利用蛙的坐骨神經(jīng)腓腸肌標本研究神經(jīng)、肌肉的興奮、興奮性。刺激與反應的關系和肌肉收縮的特征等。制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本是生理學實驗的一項基本操作技術。第13頁/共39頁【實驗對象】
蟾蜍或蛙【實驗藥品】
任氏液、食鹽、l%H2SO4【儀器與器械】
普通剪刀、手術剪、眼科鑷(或尖頭無齒鑷)、金屬探針(解剖針)破璃分針、蛙板(或玻璃板)、蛙釘、細線、培養(yǎng)皿、滴管、鋅銅弓(或電子刺激器)、酒精燈第14頁/共39頁【實驗方法與步驟】
1.破壞腦、脊髓取蟾蜍,用自來水沖洗干凈(勿用手搓)、左手握住蟾蜍.使其背部向上,用拇指或示指使頭前俯(以頭顱后緣稍稍拱起為宜)。右手持探針由頭顱后緣的枕骨大孔處垂直刺入椎管(圖5.l-l)。然后將探針改向前刺人顱腔內(nèi),左右攪動探針2~3次,搗毀腦組織。如果探針在顱腔內(nèi)。應有碰及顱底骨的感覺。再將探針退回至枕骨大孔,使針尖轉(zhuǎn)向尾端,捻動探針使其刺人椎管,搗毀脊髓。此時應注意將脊柱保持平直。針進入椎管的感覺是,進針時有一定的阻力,而且隨著進什賭賒出現(xiàn)下波僵直或尿失禁現(xiàn)象.若腦和脊髓破壞完全.蟾蜍下頜呼吸運動消失,四肢完全松軟,失去一切反射活動.此時可將探針反向捻動,退出椎管。如蟾蜍仍有反射活動。表示腦和脊隨破壞不徹底,應重新破壞。
2.剪除軀干上部、皮膚及內(nèi)臟用左手捏住蟾蜍的脊柱。右手持粗剪刀在前肢腋窩處連同皮膚,腹肌、脊柱一并剪斷,然后左手握住蟾蜍的后肢,緊靠脊柱兩側(cè)將腹壁及內(nèi)臟剪去,注意避開坐骨神經(jīng),并剪去肛門周圍的皮膚,圖下脊柱和后肢。
3.剝皮一只手捏住脊柱的斷端(注意不要捏住脊柱兩側(cè)的神經(jīng)),另一只手捏住其皮膚的邊緣,向下剝?nèi)ト亢笾钠つw(圖5.l-2)。將標本放在干凈的任氏液中.將手及使用過的探針、剪刀全部沖洗干凈。第15頁/共39頁4.分離兩腿用鑷子取出標本,左手捏住脊柱斷端。使標本背面朝上,右手用粗剪刀剪去突出的骶骨(也可不進行此步)。然后將脊柱腹側(cè)向上,左手的兩個手指捏往脊柱斷端的橫突,另一手指將兩后肢擔起,形成一個平面。此時用粗剪刀沿正中線將脊柱盆骨分為兩半(注意,勿傷坐骨神經(jīng))。將一半后肢標本置于盛有任氏液的盤中備用,另一半放在蛙板上進行下列操作.
5.辨認蛙后肢的主要肌肉蛙類的坐骨神經(jīng)是由第7、8、9對脊神經(jīng)從相對應的椎間孔穿出匯合而成,行走于脊柱的兩側(cè),到尾端(肛門處)繞過坐骨聯(lián)合,到達后肢背側(cè),行走于梨狀肌下的股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝內(nèi),到達膝關節(jié)腘窩處有分支進入腓腸?。▓D5.1-3)。
6.游離坐骨神經(jīng)和腓腸肌用蛙釘或左手的兩個手指將標本繃直、固定。先在腹腔面用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng),然后在標本的背側(cè)于股二頭肌與半膜肌的肌肉縫內(nèi)將坐骨神經(jīng)與周邊的結(jié)締組織分離直到腘窩。但不要傷及神經(jīng),其分支待以后用手術剪剪斷。同樣用玻璃分針將腓腸肌與其下的結(jié)締組織分離井在其跟健處穿線、結(jié)扎。
第16頁/共39頁7.剪去其他不用的組織操作從脊柱向小腿方向進行.(1)剪去多余的脊柱和肌肉將后肢標本腹面向上,將坐骨神經(jīng)連同2~3節(jié)脊椎用粗剪刀從脊柱上剪下來。再將標本背面向上,用鑷子輕輕提起脊椎,自上而下剪去支配腓腸肌以外的神經(jīng)分支,直至腘窩(圖5.l-4A),并搭放在腓腸肌上。沿膝關節(jié)剪去股骨周圍的肌肉,并將股骨刮凈,用粗剪刀剪去股骨上端的1/3(保留2/3),制成坐骨神經(jīng)——小腿的標本。(2)完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標本將脊椎和坐骨神經(jīng)從腓腸肌上取下,提起腓腸肌的結(jié)扎線剪斷跟腱。用粗剪刀剪去膝關節(jié)以下部位,便制成了坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本(圖5.1-4B)。
8.檢驗標本用沾有任氏液的鋅銅弓觸及一下(或電刺激刺激)坐骨神經(jīng)或用鑷子夾持坐骨神經(jīng)中樞端,如腓腸肌發(fā)生迅速而明顯的收縮,說明標本的興奮性良好。標本浸人盛有任氏液的培養(yǎng)皿中備用。然后再依次用熱玻璃棒、食鹽(或1%H2SO4濾紙)刺激坐骨神經(jīng)中樞端(或肌肉),觀察肌肉收縮有何變化?如果放上食鹽肌肉無動靜,用任氏液將鹽沖洗掉,再觀察沖洗過程中肌肉收縮有何變化?第17頁/共39頁【注意事項】1.避免蟾蜍體表毒液和血液污染標本,壓擠、損傷和用力牽拉標本,不可用金屬器械觸碰神經(jīng)干。
2.在操作過程中,應給神經(jīng)和肌肉滴加任氏液,防止表面干燥,以免影響標本的興奮性。
3.標本制成后須放在任氏液中浸泡數(shù)分鐘,使標本興奮性穩(wěn)定,再開始實驗效果會較好。
4.熱玻璃棒的溫度防止過高,以免燙傷標本。第18頁/共39頁【思考題】
1.用各種刺激檢驗標本興奮性時,為什么要從中樞端開始?
2.刺激有幾種形式?如何解釋對食鹽的不同處理后對肌肉收縮的影響?第19頁/共39頁實驗5.2骨骼肌收縮(刺激強度對肌肉收縮的影響)第20頁/共39頁【實驗目的】
學習神經(jīng)-肌肉實驗的電刺激方法和記錄肌肉收縮的方法;觀察刺激強度與肌肉收縮之間的關系掌握閾刺激、閾下刺激、閾上刺激、最大(最適)刺激等概念。【實驗原理】
對于單根神經(jīng)纖維或肌纖維來說,對刺激的反應具有“全或無”的特性。神經(jīng)-肌肉標本是由許多興奮性不同的神經(jīng)纖維肌纖維組成,在保持足夠的刺激時間(脈沖波寬)不變時,刺激強度過小,不能引起任何反應;隨著刺激強度增加到某一定值,可引起起少數(shù)興奮性較高的運動單位興奮,引起少數(shù)肌纖維收縮,表現(xiàn)出較小的張力變化。該刺激強度為閾強度,具有閾強度的刺激稱閾刺激。此后隨著刺激強度的繼續(xù)增加,會有較多的運動單位興奮。肌肉收縮幅度、產(chǎn)生的張力也不斷增加,此時的刺激均稱為閾上刺激。但當刺激強度增大到某一臨界值時,所有的運動單位都被興奮,引起肌肉最大強度的收縮,產(chǎn)生的張力也最大,此后再增加刺激強度,也不會再引起反應的繼續(xù)增加。可引起神經(jīng)、肌肉最大反應的最小低級強度為最適刺激強度。該刺激叫最大刺激或最適刺激。第21頁/共39頁【實驗對象】
蟾蜍或蛙【實驗藥品】
任氏液【儀器與器材】
肌槽、張力換能器(50~100g)、LMB-2B二道生理紀錄儀、刺激器或計算機生物信號采集處理系統(tǒng);普通剪刀、手術剪、眼科鑷{或尖頭無齒鑷)、金屬探針(解剖針)、玻璃分針、蛙板(或玻璃板)、蛙釘、細線、培養(yǎng)皿、滴管、雙凹夾第22頁/共39頁【實驗方法與步驟】
1.坐骨神經(jīng)腓腸肌標本的制備
方法有兩種,其一制作成離體的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本,見實驗5.1(標本的制備)。其二制作成在體的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本,步驟如下:(1)另取一只蟾蜍,洗凈,按操作程序破壞腦和脊髓。(2)剝離一側(cè)下肢自大腿根部起的全部皮膚,然后將蟾蜍腹位固定于蛙板上。(3)于股二頭肌與半膜肌的肌肉縫內(nèi)將坐骨神經(jīng)游離,并在神經(jīng)下穿線備用。然后分離腓腸肌的跟腱穿線結(jié)扎。連同結(jié)扎線將跟腱剪下,一直將腓腸肌分離到膝關節(jié)。(4)在膝關節(jié)旁釘蛙釘,以固定住膝關節(jié)。至此在體標本制備完畢。第23頁/共39頁
2.儀器及標本的連接,有以下兩種方式(1)對于離體標本,將肌槽、張力換能器均用雙凹夾固定于支架上;標本的股骨殘端插入肌槽的小孔內(nèi)并固定之;腓腸肌跟腱上的連線連于張力換能器的應變片上(暫不要將線拉緊)、夾住脊椎骨碎片將坐骨神經(jīng)輕輕平搭在肌槽的刺激電極上。(2)對于在體標本,可將腓腸肌跟腱上的連線連于張力換能器的應變片上(暫不要將線拉緊,將穿有線的坐骨神經(jīng)輕輕提起,放在保護電極上;井保證神經(jīng)與電極接觸良好。調(diào)整換能器的高低,使肌肉處于自然拉長的狀態(tài)(不宜過緊,但也不要太松)。然后可進行實驗項目。若是使用二道生理記錄儀進行記錄,則將張力換能器的輸出插頭插入二道生理記錄儀的FD-2的輸入插孔;刺激器的輸出導線與〔肌槽的〕電極相連。若是使用計算機生物信號采集處理系統(tǒng)進行實驗,則將張力換能器的輸出插頭插人該系統(tǒng)的一個信號輸入通道插座(如CHI);電極的插頭插人該系統(tǒng)的刺激輸出插孔。打開計算機。啟動生物信號采集處理系統(tǒng),進入“刺激強度對骨骼肌收縮的影響”實驗菜單。
2.儀器及標本的連接,有以下兩種方式
第24頁/共39頁3.使用單脈沖刺激方式,波寬調(diào)至并固定在1ms,刺激強度從零開始逐浙增大;首先找到能引起肌肉收縮的最小強度,該強度即閾強度。描記速度要求每刺激一次神經(jīng),都應在記錄紙或屏幕上記錄(或顯示)一次收縮曲線(應為一短線)。
4.將刺激強度逐漸增大,觀察肌肉收縮幅度是否隨著增加,記下的收縮曲線幅度是否也隨之升高。
5.繼續(xù)增大刺激強度,直至連續(xù)3~4個肌肉收縮曲線的幅度不再隨刺激增高為止,讀出剛剛引起最大收縮的刺激強度,即為最適刺激強度。第25頁/共39頁【注意事項】
l.刺激之后必須讓標本休息一段時間,約0.5~1min。實驗過程中標本的興奮性會發(fā)生改變,因此還要抓緊時間進行實驗。
2.整個實驗過程中要不斷給標本滴加任氏液。防上標本干燥,保持其興奮性。【可能出現(xiàn)的問題與解釋】
(1)未能找出最大刺激雖已調(diào)至刺激器的最大刺激強度,但經(jīng)液體介質(zhì)短路后輸出,強度有所降低.對刺激的神經(jīng)仍不能達到最大刺激強度。此時可增大刺激波寬。(2)單收縮曲線忽高忽低標本在任氏液中浸泡的時間不夠。興奮性不穩(wěn)定;肌槽上液體堆積過多,造成短路使刺激強度不穩(wěn)。(3)標本發(fā)生不規(guī)則收縮或痙攣肌槽不干凈.留有刺激物(如鹽漬);周圍環(huán)境有干擾;儀器接地不良或人體感應帶電,接觸潮濕臺面或支架等。第26頁/共39頁【實驗結(jié)果】l.標記“刺激強度與肌肉收縮張力之間的關系”曲線,剪輯、粘貼(或打?。?/p>
2.骨骼肌收縮包括收縮和舒張兩個時期??蓽y量的值有:峰值(最大值)、張力增量(發(fā)展張力)、收縮期和舒張1/2間期(5.2-3)。本實驗要求統(tǒng)計全班各組的結(jié)果以平均值之標準差表示,并繪制不同刺激強度與腓腸肌收縮張力增量的關系曲線。第27頁/共39頁【思考題】
1.組織興奮的刺激必須具備哪些條件?2.何謂閾下刺激、閾刺激、閾上刺激和最適刺激?在閾刺激和最適刺激之間為什么肌肉的收縮隨刺激強度增加而增加?3.實驗過程中標本的閾值是否會改變?為什么?第28頁/共39頁實驗5.3骨骼肌收縮(刺激頻率對肌肉收縮的影響)第29頁/共39頁【實驗目的】
觀察用不同頻率的最適刺激刺激坐骨神經(jīng)對腓腸肌收縮形式的影響及其特征。了解和掌握單收縮、復合收縮、強直收縮特征和形成的基本原理。第30頁/共39頁【實驗原理】
蛙的坐骨神經(jīng)肌肉標本單收縮的總時程約為0.11s,其中潛伏期、縮短期共占0.05s,舒張期占0.06(圖5.3-1〕。若給予標本相繼兩個最適刺激,使兩次刺激的間隔小于該肌肉收縮的總時程時,則會出現(xiàn)一連續(xù)的收縮,稱復合收縮(或收縮總和)。若兩個刺激的時間間隔短于肌肉收縮總時程,而長于肌肉收縮的潛伏期和縮短期時程。使后一刺激落在前一刺激引起肌肉收縮的舒張期內(nèi),則出現(xiàn)一次收縮尚未完全舒張又引起一次收縮;若兩次刺激的間隔短于肌肉收縮的縮短期,使后一刺激落在前一次刺激引起收縮的縮短期內(nèi),則出現(xiàn)一次收縮正在進行接著又產(chǎn)生一次收縮,收縮的幅度高于單收縮的幅度(5.3-2)。根據(jù)這個原理,若給予標本一連串的最適刺激。則因刺激頻率不同會得到一連串的單收縮、不完全強直收縮或完全強直收縮的復合收縮(圖5.3-3)。第31頁/共39頁【實驗對象】
蟾蜍或蛙【實驗藥品】
任氏液【儀器與器材】
見實驗5.2第32頁/共39頁【實驗方法與步驟】
1.坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本的制備見實驗5.1或5.2。2.儀器及標本的連接見實驗5.2,當用計算機生物信號采集處理系統(tǒng)進行實驗時,則打開計算機,啟動生物信號采集處理系統(tǒng);進入“刺激頻率對骨骼肌收縮的影響”模擬實驗菜單。3.以波寬為lms,從最小刺激強度開始逐漸增加刺激強度對肌肉進行刺激,找到剛剛引起肌肉最大收縮的刺激強度。即為該標本的最適刺激強度,整個實驗過程中均固定在此刺激強度上(一股為5~7.5V)。
4.用單刺激作用于坐骨神經(jīng),可記錄到肌肉的單收縮曲線。
5.用雙刺激作用于坐骨神經(jīng),使兩次刺激間隔時間為0.06~0.08s,記錄復合收縮曲線(紙速25~50mm/s)。
6.將刺激方式置于“連續(xù)”,其余參數(shù)固定不變,用頻率為1、6、10、15、20、30Hz的連續(xù)刺激作用于坐骨神經(jīng),可記錄到單收縮、不完全強直收縮和完全強直收縮曲線(紙速2~10mm/s)。第33頁/共39頁【注意事項】l.經(jīng)常給標本滴加任氏液.保持標本良好的興奮性。
2.連續(xù)刺激時,每次刺激持續(xù)時間要保持一致,不得超過3~4(為什么?),每次刺激后要休息3
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