LAB新生兒溶血病檢測操作規(guī)程D

重生兒溶血病檢測操作規(guī)程原理重生兒溶血病一般特指母嬰血型不合而惹起的胎兒或重生兒免疫性溶血性疾病HDN），可由多種原由惹起。臨床常有的是ABO、Rh等血型系統(tǒng)。胎兒和重生兒紅細(xì)胞被來自母親的IgG抗體所包被，并在嬰兒的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)遇到免疫性損壞。試劑和資料2.1母親血樣3-5ml，患兒抗凝血3-5ml2.2抗人球蛋白試劑（包含廣譜、IgG、C3）、2-Me應(yīng)用液、抗-A、抗-B、抗-D、抗-C、抗-c、抗-E血清試劑2.35%A1、B、O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液方法主要以三項(xiàng)試驗(yàn)為主①患兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)②患兒游離抗體試驗(yàn)③汲取放散試驗(yàn)3.1ABO重生兒溶血病檢測ABO重生兒溶血病主假如因?yàn)樘杭t細(xì)胞A或B抗原與來自母體的抗A或抗B抗體反響的結(jié)果。以母親為O型，胎兒為A型或B型的發(fā)病率為最高。母、子（父）紅細(xì)胞ABO血型判定（參照ABO血型判定）子紅細(xì)胞試驗(yàn)子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)RBC生理鹽水洗3遍，配成5%RBC懸液，取小試管加1滴2-5%子RBC，加多特異性抗球蛋白1滴，混勻離心看結(jié)果。子紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)：取經(jīng)鹽水清洗的患兒壓積RBC0.5-1ml,加等量鹽水于試管中，56℃水浴，不停振搖10分鐘，而后置于56℃溫水離心管內(nèi)，立刻以1300g離心5分鐘，汲取上清液備用。取3只試管,標(biāo)志Ac、Bc、Oc，將放散液分為3份分別加入3個小試管中，分別加2-5%A、B、O細(xì)胞1滴，37℃水浴1小時（加PEG縮短至5分鐘），拿出后用生理鹽水清洗3遍，倒盡鹽水，各加抗多特異性抗球蛋白1-2滴，混勻離心看結(jié)果。子血清中游中游離抗體檢查取3支小試管注明Ac、Bc、Oc，每管加患兒血清2-4滴，分別加入2-5%A、B、O指示紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻后離心，看結(jié)果。若有凝聚，說明有相應(yīng)鹽水抗體，不凝聚將試管放入37℃水浴1小時（加PEG5分鐘）后，用生理鹽水洗3遍，吸盡鹽水后，每管加多特異性抗球蛋白1滴，離心看結(jié)果。母血清作產(chǎn)前檢測血清中IgG抗A抗B效價測定及血清抗體挑選。詳見產(chǎn)前檢測。3.2Rh重生兒溶血病檢測Rh血型系統(tǒng)的HDN是因?yàn)槟笅隦h血型不合造成的，母親的Rh免疫抗體作用于胎兒及嬰兒，惹起貧血和高膽紅素血癥，以D抗原不合為最常見，一般母親曾有輸血或妊娠史。母、子、父作ABO、Rh血型判定（參照ABO血型判定及Rh血型判定）。母親一般為Rh陰性，患兒為Rh陽性。子紅細(xì)胞試驗(yàn)子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)（同）。子紅細(xì)胞抗體開釋試驗(yàn)：直抗陽性者做此試驗(yàn)。用三氯甲烷/三氯乙烯放散法，清洗壓積紅細(xì)胞后，加等量鹽水或AB型血清，再加2體積三氯甲烷/三氯乙烯等量混淆液，用玻璃紙壓住管口，顛倒混淆

1分鐘，以

3000~5000轉(zhuǎn)/分別心

3~5分鐘，汲取上層櫻紅色液體放入另一試管，并將此含放散液試管置

37℃水浴

5~10

分鐘，除盡三氯甲烷/三氯乙烯，用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞判定抗體，方法同熱放散抗體法。子血清游離抗體檢測（同）。母血清ABO之外抗體檢測：用配組細(xì)胞及丈夫或子細(xì)胞與母血清在鹽水中看能否有凝聚，再做酶法或抗人球法，陽性者作抗體判定及測抗體效價。結(jié)果判斷4.1ABOHDN結(jié)果判斷依據(jù)患兒三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果按下表作結(jié)果判斷：直接抗人球蛋白游離抗體試驗(yàn)抗體放散試驗(yàn)結(jié)果判斷試驗(yàn)+++可證明為ABOHDN++-可證明為ABOHDN+-+可證明為ABOHDN--+可證明為ABOHDN+--可疑為ABOHDN-+-可疑為ABOHDN---不行證明為ABOHDN母親為O型，子為A型或B型，子紅細(xì)胞直抗陽性或（和）游離抗體陽性，母親IgG抗體抗A或抗B效價高者可疑為ABO重生兒溶血病。4.2RhHDN結(jié)果判斷母親為Rh陰性、子為Rh陽性，子紅細(xì)胞直抗陽性及抗體開釋試驗(yàn)陽性即可判斷為Rh血型HDN，游離抗體試驗(yàn)有時可表現(xiàn)為陰性。3項(xiàng)試驗(yàn)均陰性則能否認(rèn)為Rh血型HDN。其余血型HDN可依據(jù)檢測結(jié)果直接報。支持性文件《全國臨床查驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程》有關(guān)