抗原抗體反應檢驗系

“綱舉目張”釋義，綱指魚網(wǎng)上的總繩，目指網(wǎng)眼。把大繩子一提起來，一個個網(wǎng)眼就都張開。比喻抓住事物的關鍵，帶動其他環(huán)節(jié)。

第一頁，共61頁。第七章抗原抗體反應第二頁，共61頁。

抗原抗體反應第一節(jié)抗原抗體反應原理第二節(jié)抗原抗體反應特點第三節(jié)抗原抗體反應影響因素第四節(jié)抗原抗體反應類型第三頁，共61頁。基本概念抗原:是能夠刺激機體免疫系統(tǒng)誘導免疫應答,并能與相應免疫應答的產(chǎn)物(抗體或致敏淋巴細胞)在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性的結(jié)合反應的物質(zhì)。第四頁，共61頁?？贵w:是Ｂ細胞識別抗原后活化增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的一類能與相應抗原特異性結(jié)合的球蛋白。第五頁，共61頁。免疫球蛋白的結(jié)構

第六頁，共61頁?？贵w的結(jié)構及其多樣性第七頁，共61頁。抗原決定簇（epitope）

1．抗原決定簇又稱表位（epitope），是指抗原性物質(zhì)表面決定該抗原特異性的特殊化學基團，是免疫應答和免疫反應具有特異性的物質(zhì)基礎。

2．抗原決定簇是很小的，其大小相當于相應抗體的結(jié)合部位，它們可由5-7個氨基酸、單糖或核苷酸殘基組成。

3．抗原結(jié)合價：是指能與抗體分子結(jié)合的抗原決定簇的總數(shù)。每一種半抗原可理解為單一的抗原決定簇，而天然抗原含有很多不同的抗原決定簇，它是帶有大量多種"天然"半抗原的大分子。

第八頁，共61頁。第九頁，共61頁。是抗原和相應抗體之間的特異性結(jié)合反應既可發(fā)生在體內(nèi),也可發(fā)生在體外

一、抗原抗體結(jié)合力一、抗原抗體反應第十頁，共61頁。一、基本原理

第一節(jié)抗原抗體反應原理

Ag決定簇和Ab分子超變區(qū)相互作用(相互吻合,具有互補性)分子表面特異的可逆的弱結(jié)合力在極短距離內(nèi)才能發(fā)生第十一頁，共61頁?？乖贵w反應的二階段性

第一階段為抗原抗體特異性結(jié)合階段，反應速度快，幾秒鐘或幾分鐘即可完成，但不出現(xiàn)肉眼可見反應。

第二階段為可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補體結(jié)合等反應，本階段有兩個特點，一是反應進行慢，需要幾分鐘、幾十分鐘或更長。其二是受電解質(zhì)、溫度、酸堿度等多種因素影響。第十二頁，共61頁。二、基本條件： 結(jié)合力親和力和親合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體第十三頁，共61頁?？乖涂贵w的結(jié)合是互補性的特異性結(jié)合不形成牢固的共價鍵，通過非共價鍵結(jié)合這種弱的結(jié)合力涉及幾種分子間的作用力

一、抗原抗體結(jié)合力一、抗原抗體結(jié)合力*1．靜電引力*2．范德華引力*3．氫鍵結(jié)合力*4．疏水作用力第十四頁，共61頁。

靜電引力（庫倫引力）

概念：抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互的引力。

引力的大小與兩個相互作用基團間的距離的平方成反比；平均鍵能約為20.9kJ/mo1。第十五頁，共61頁。范德華引力概念：抗原和抗體相互接近時，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。

結(jié)合力的大小與兩個相互作用基團的極化程度的乘積成正比、與它們之間距離的7次方成反比，鍵能約為4.2～12.5kJ／mol。

這種引力的能量小于靜電引力。具有特異性。第十六頁，共61頁。

概念：供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力。氫鍵結(jié)合力供氫體：羧基、氨基和羥基受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵氧等能的大小取決于氫鍵的方向：氫鍵具有高度的方向性。氫鍵結(jié)合力與供氫體和受氫體之間距離的6次方成反比，鍵能約20.9kJ/mol。第十七頁，共61頁。

疏水作用力（疏水鍵）

概念：兩個疏水基團在水溶液中相互接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集的力?？乖瓫Q定簇與抗體上的結(jié)合點靠近，互相間正、負極性消失，親水層立即失去。此力在抗原抗體反應中的結(jié)合是很重要的。提供的作用力最大，約占總結(jié)合力的50％。第十八頁，共61頁。

抗原抗體結(jié)合力示意圖抗原抗體氫鍵結(jié)合力

ONONHH靜電引力--++范得華力-++-+--+疏水作用力排斥的水第十九頁，共61頁。

二、抗原抗體親和力(affinity）*親和力

是抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應的抗原決定簇之間的相適應而結(jié)合的強度，這是抗原與抗體之間固有的結(jié)合力。第二十頁，共61頁。第二十一頁，共61頁。

親和常數(shù)親和常數(shù)K=

K值大的抗體與抗原牢固結(jié)合，不易解離，說明該抗體有高親和力?？贵w與抗原結(jié)合是可逆的反應，在平衡時其第二十二頁，共61頁。K=K1/K2K:親和常數(shù)K1:結(jié)合常數(shù)K2:解離常數(shù)第二十三頁，共61頁。第二十四頁，共61頁。*親合力（avidity)

是指一個抗體分子與整個抗原表位之間結(jié)合的強度。親合力與親和力、抗體的結(jié)合價和抗原的有效決定簇數(shù)目相關。親合力越大，抗原抗體結(jié)合越牢固。第二十五頁，共61頁。第二十六頁，共61頁。血清學反應條件下，抗原抗體均帶負電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。

三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體

當抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變?。欢矣捎诳乖贵w復合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。在電解質(zhì)作用下，各疏水膠體之間靠攏，形成可見的抗原抗體復合物。第二十七頁，共61頁。

親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體轉(zhuǎn)化NaCl可見反應第二十八頁，共61頁。第二節(jié)抗原抗體反應的特點特異性比例性可逆性

階段性

第二十九頁，共61頁。

一、

特異性（specificity）*概念：抗原分子，只能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合而起反應的專一性能。*決定因素：由抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之間空間結(jié)構的互補性決定的。

抗體分子N端可變區(qū)形成3nm×1.5nm×0.7nm的槽溝，只有與其空間結(jié)構互補的抗原決定簇才能如楔狀嵌入。第三十頁，共61頁。第三十一頁，共61頁。特異性示意圖第三十二頁，共61頁。*交叉反應(crossreaction)兩種不同的抗原物質(zhì)具有部分相同或類似結(jié)構的抗原決定簇(共同抗原)，則可與彼此相應的抗體反應。第三十三頁，共61頁。第三十四頁，共61頁。*最適比:是指抗原與抗體發(fā)生可見反應，需遵循一定的量比關系，只有當二者濃度比例適當時，才出現(xiàn)可見反應。

二、比例性（proportionality）第三十五頁，共61頁。1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗體量不變振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同出現(xiàn)沉淀量最多的管為最適比例管。輕搖絮狀沉淀試驗絮狀沉示意圖淀AgAbAg第三十六頁，共61頁。等價帶(equivalencezone)抗原與抗體分子比例合適的范圍。帶現(xiàn)象：Ag與Ab比例不適而不出現(xiàn)可見反應。*前帶(prozone)抗體過量時。*后帶(postzone)

抗原過量時。第三十七頁，共61頁。比例性示意圖抗體過量比例合適抗原的量抗原過量抗體沉淀的量前帶等價帶后帶第三十八頁，共61頁。第三十九頁，共61頁。

三、可逆性（reversibility)概念：是指抗原與抗體結(jié)合成復合物后，在一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性。

第四十頁，共61頁。抗原抗體動態(tài)平衡公式K1[Ag]+[Ab]?[Ag-Ab]K2K1結(jié)合常數(shù)K2解離常數(shù)第四十一頁，共61頁。

抗原抗體復合物解離取決于：抗體對相應抗原的親合力

環(huán)境因素第四十二頁，共61頁。環(huán)境因素：pH過高過低、高離子強度等。常用于解離抗原抗體復合物的物質(zhì)有：3mol/L硫氰化鉀、pH2.40.1mol/L甘氨酸、7mol/L尿素等。解離后抗原抗體仍保持原有特性。第四十三頁，共61頁?？贵w混有SPAg抗體-SPAg抗體-SPAg分離劑一、抗原抗體結(jié)合

可逆性示意圖抗體二、抗原抗體分離第四十四頁，共61頁。第一階段：特異性結(jié)合階段，反應快，不可見第二階段：反應可見階段，反應慢，出現(xiàn)凝集、沉淀和細胞溶解等現(xiàn)象四、階段性第四十五頁，共61頁。第三節(jié)抗原抗體反應影響因素一、反應物自身因素

*抗原：1.理化特性2.Ag決定簇數(shù)量3.Ag決定簇種類第四十六頁，共61頁。顆粒性Ag+Ab→凝集反應可溶性Ag+Ab→沉淀反應單價抗Ag與Ab→不出現(xiàn)沉淀反應第四十七頁，共61頁?？扇苄钥乖恋憝h(huán)反應第四十八頁，共61頁。一、反應物自身因素*抗體：1.來源2.特異性與親合力3.濃度第四十九頁，共61頁。H型抗體等價帶窄R型抗體等價帶寬第五十頁，共61頁。二、環(huán)境條件：*電解質(zhì)：0.85%NaCl*酸堿度：pH6～9*溫度：15～40℃37℃最適冷凝集4℃第五十一頁，共61頁。*酸凝集：當pH為3左右時，接近細菌Ag的等電點，可出現(xiàn)非特異性凝集。第五十二頁，共61頁。第五十三頁，共61頁。作用時間抗原抗體反應應有足夠的時間，不同反應時間不同。第五十四頁，共61頁。第四節(jié)抗原抗體反應類型1.沉淀反應2.凝集反應3.補體參與的反應4.中和反應5.免疫標記第五十五頁，共61頁。反應類型實驗技術結(jié)果判斷凝集反應直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上第四節(jié)免疫學檢測技術的類型第五十六頁，共61頁。反應類型實驗技術結(jié)果判斷中和反應病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標記免疫反應熒光免疫技術檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術檢測放射性強度酶免疫技術檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術檢測發(fā)光強度金免疫技術檢測金顆粒沉淀第五十七頁，共61頁。按實際用途分為:①免疫組織化學技術(immunohistochemistrytechnique,IHCT)②免疫測定(immunoassay)按檢測現(xiàn)象分為:

①放射免疫技術②熒光免疫技術③酶免疫技術④化學發(fā)光免疫技術⑤金免疫技術按測定反應體系的物理狀態(tài)分為:

①均相免疫測定(homogenousimmunoassay）②非均相免疫測定(heterogenousimmunoassay)

標記免疫技術：用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學發(fā)光物質(zhì)等標記抗原或抗體，進行抗原抗體反應后，通過檢測標記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析第五十八頁，共61頁。1.等價帶2.前帶3.后帶4.共同抗原5.交叉反應6.Ag-Ab反應原理７.Ag-Ab反應特點８.Ag-Ab反應影響因素

本章要點第五十九頁，共61