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文檔簡介

實驗二

小鼠脾臟淋巴細胞的分離

小鼠脾臟淋巴細胞的分離

目的原理實驗步驟注意事項目的熟悉淋巴細胞和外周血單個核細胞（PBMC）的分離方法原理外周血紅細胞粒細胞單個核細胞血小板淋巴細胞單核細胞1.0931.030~1.0351.075~1.090Ficoll：1.077±0.001

(PBMC)1.0921500rpm,20℃

,30minPBMC紅細胞粒細胞Ficoll稀釋外周血Ficoll稀釋的血漿、血小板實驗步驟1.實驗一獲取的小鼠脾臟載玻片研磨（研磨同時滴加1640培養(yǎng)液，保持細胞活性）2.細胞混合液靜置數(shù)分鐘后吸管吸取，沿傾斜的管壁緩緩加入淋巴細胞分層液上方（Ficoll：血細胞=1：1）實驗步驟5.加足量稀釋液充分洗滌，1000r/min離心5min，棄上清6.適量的培養(yǎng)基重懸細胞，計數(shù)注意事項1.在Ficoll上加入稀釋外周血時，應(yīng)緩慢加，以免沖散界面2.吸取單個核細胞層時，應(yīng)避免吸出過多的上清液或分層液而導(dǎo)致血小板污染細胞計數(shù)實驗步驟注意事項實驗步驟5、計算：將結(jié)果代入下式，得出細胞密度細胞數(shù)/毫升原液=（4大格細胞數(shù)之和/4）×104

注意事項1.取樣計數(shù)前，應(yīng)充分混勻細胞懸液2.加樣量不要溢出蓋玻片，也不要過少或帶氣泡3.細胞壓中線時，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右4.本法要求細胞密度不低于104細胞/ml5

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