專題和蛋白質(zhì)技術(shù)

專題和蛋白質(zhì)技術(shù)第1頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三課題1DNA的粗提取與鑒定

第2頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、提取DNA的方法1、提取生物大分子的基本思路（1）選用一定的________或________方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。（2）

DNA的粗提取就是利用DNA與______、______和________等在物理或化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。物理化學(xué)RNA蛋白質(zhì)脂質(zhì)第3頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（1）利用DNA的溶解性 DNA的溶解度2、提取DNA分子的基本原理第4頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

DNA不_______酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則_______酒精。利用這一原理，可將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。溶于溶于第5頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三①蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但對(duì)________沒(méi)有影響。②大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受____________的高溫，而

DNA在80℃以上才會(huì)變性。③洗滌劑能夠瓦解__________，但對(duì)________沒(méi)有影響。溫度洗滌劑DNA60-80℃細(xì)胞膜DNA（2）利用DNA和蛋白質(zhì)對(duì)酶、_______和________的耐受性不同第6頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（3）DNA的鑒定：

DNA在沸水浴的條件下，遇________反應(yīng)會(huì)呈現(xiàn)________二苯胺藍(lán)色第7頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取

材料：新鮮的雞血注意：本實(shí)驗(yàn)中，要往雞血中加入抗凝劑（檸檬酸鈉溶液）

原則上只要含DNA的生物材料都可以，但是選取DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功率更大。第8頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(1)先將新鮮的雞血離心，獲得雞血細(xì)胞(2)在雞血細(xì)胞中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、破碎細(xì)胞討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？利用了什么原理？2、過(guò)濾，獲取含DNA的濾液第9頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（三）去除濾液中的雜質(zhì)討論：為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)

答：用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)第10頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三討論：方案二與方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開(kāi)；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離

方案二利用了酶的專一性；方案三利用了DNA的穩(wěn)定性。第11頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（四）

DNA的析出與鑒定DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95％），靜置2-3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水1、DNA的析出第12頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三A:2mol/L的NaCl溶液5ml+DNA絲狀物+

二苯胺試劑4ml

B:2mol/L的NaCl溶液5ml

+二苯胺試劑4ml混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍(lán)色2、DNA的鑒定第13頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三以雞血為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取②雞血細(xì)胞極易吸水脹破，而用動(dòng)物肝臟細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)材料常常需要?jiǎng)驖{和離心，對(duì)設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時(shí)較長(zhǎng)1、雞血細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料的原因①雞血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得第14頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2、實(shí)驗(yàn)原理①DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L時(shí),DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。②DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。③DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。第15頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三實(shí)驗(yàn)材料和用具實(shí)驗(yàn)材料：1、雞血細(xì)胞液（5~10ml）；2、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液（實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻24h）；3、蒸餾水；4、質(zhì)量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）5、物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0．015mol/L的NaCl溶液；6、二苯胺試劑第16頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第17頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三答：因?yàn)镈NA不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物可以析出,懸浮于溶液中討論：（2）觀察絲狀物呈什么顏色？答：白色（1）為什么要加50mL的冷酒精？第18頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三答：有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是原來(lái)顏色（4）這一鑒定結(jié)果說(shuō)明什么問(wèn)題？（3）比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同？答：提取出的絲狀物是DNA（5）DNA的直徑約為20×10-10m，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否表示1個(gè)DNA分子直徑的大??？答：DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個(gè)DNA子聚在一起形成的第19頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三答：整個(gè)實(shí)驗(yàn)共“兩次蒸餾水，三次過(guò)濾，六次攪拌”總結(jié)：①兩次蒸餾水第一次：使雞血細(xì)胞吸水脹破，提取核DNA

第二次：稀釋NaCl溶液，使DNA黏稠物析出（1）此實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有幾次使用蒸餾水？幾次過(guò)濾，幾次攪拌？第20頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三②三次過(guò)濾第一次：過(guò)濾核外物質(zhì)，除去不溶的雜質(zhì)第二次：過(guò)濾除DNA的其他核內(nèi)物質(zhì)，尤其是蛋白質(zhì)

第三次：過(guò)濾含DNA的NaCl溶液，得到濾液

第21頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三六次攪拌：攪拌目的第一次

攪拌加蒸餾水的雞血細(xì)胞液，加速細(xì)胞破裂第二次

攪拌含DNA的高濃度鹽溶液，加速

_______________________第三次

攪拌加蒸餾水的NaCl溶液，

____________________________第四次

攪拌含DNA的高濃度鹽溶液，加速

_______________________第五次

攪拌含DNA的酒精溶液，提取

__________________________第六次

攪拌含DNA白色絲狀物的鹽溶液，加速

__________________DNA的溶解均勻稀釋以析出更多DNADNA的溶解含雜質(zhì)較少的DNADNA的溶解第22頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

觀察你提取的DNA顏色，如果不是白色絲狀物，說(shuō)明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說(shuō)明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備四、課題成果評(píng)價(jià)（一）是否提取出了DNA第23頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

本實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)（二）分析DNA中的雜質(zhì)第24頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三課題2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片斷第25頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三DNA分子的結(jié)構(gòu)C、H、O、N、P1.元素組成：脫氧核苷酸2.基本單位:第26頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3.DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)（1）DNA分子是由

的（脫氧核苷酸長(zhǎng)鏈盤旋而成的規(guī)則

結(jié)構(gòu)。（2）

與

交替連結(jié)，排列在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架；

排列在鏈的內(nèi)側(cè)。（3）兩條鏈上的堿基通過(guò)

連結(jié)起來(lái)，形成堿基對(duì)。堿基對(duì)的組成有特定的規(guī)律：即腺嘌呤一定與

配對(duì)，

一定同胞嘧啶配對(duì)。雙螺旋兩條反向平行脫氧核糖磷酸堿基氫鍵胸腺嘧啶鳥(niǎo)嘌呤第27頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三4.DNA的復(fù)制b.時(shí)期有絲分裂間期減數(shù)第一次分裂前的間期。c.場(chǎng)所細(xì)胞核（主要）、線粒體、葉綠體。a.概念由一個(gè)DNA形成兩個(gè)完全相同的DNA的過(guò)程。d.基本條件酶:解旋酶、DNA聚合酶能量:ATP原料:四種脫氧核苷酸模板:DNA的兩條鏈第28頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三參與的組分在DNA復(fù)制中的作用解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物總結(jié)：胞內(nèi)DNA復(fù)制的基本體系打開(kāi)DNA雙鏈提供DNA復(fù)制的模板合成子鏈的原料催化合成DNA子鏈?zhǔn)笵NA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始連接脫氧核苷酸第29頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、PCR技術(shù)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。能以極少量的DNA為模板，在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝。第30頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（1）3′端和5′端：為了明確地表示DNA的方向，通常將DNA的羥基（—OH）末端稱為_(kāi)_______，而含____________的末端稱為_(kāi)_______；一個(gè)雙鏈DNA分子中含兩個(gè)3′端和兩個(gè)5′端，如果一條鏈的方向是________，則另一條鏈的方向就是________，這就是反向平行的含義。3’端5’端磷酸基團(tuán)5’→3’3’→5’1、PCR擴(kuò)增方向第31頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（2）DNA分子中相鄰兩個(gè)脫氧核苷酸殘基通過(guò)________________相連，該化學(xué)鍵是由一分子脫氧核苷酸中3號(hào)碳原子上的羥基（—OH），與相鄰的另一分子脫氧核苷酸中5號(hào)碳原子上的磷酸基團(tuán)脫水聚合而成。所以DNA的合成方向總是從子鏈的________向________延伸。3’5’磷酸二酯鍵5’端3’端第32頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第33頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2、PCR技術(shù)原理（1）PCR：DNA分子在一定條件下可以進(jìn)行________復(fù)制。（2）DNA的熱變性原理：在________的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開(kāi)，這個(gè)過(guò)程稱為_(kāi)_______；當(dāng)溫度緩慢下降后，兩條被分離的DNA鏈又會(huì)重新結(jié)合成雙鏈，這個(gè)過(guò)程稱為_(kāi)_______。體外80-100℃變性復(fù)性第34頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、PCR的反應(yīng)過(guò)程DNA模板與模板DNA兩條鏈相結(jié)合的兩種引物1、反應(yīng)條件穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境四種脫氧核苷酸耐熱的DNA聚合酶嚴(yán)格控制溫度變化的控溫設(shè)備第35頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三靶序列靶序列第一步：變性（90-95℃）2、反應(yīng)過(guò)程第36頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’第二步：復(fù)性（50℃左右）第37頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’TaqDNA聚合酶第三步：延伸（72℃左右）第38頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三靶序列

靶序列第1個(gè)PCR循環(huán)完成后：得到兩個(gè)DNA分子第39頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、結(jié)果（P60頁(yè)圖5-9復(fù)制結(jié)果）（1）PCR的每一輪循環(huán)包括變性、復(fù)性和延伸三步，從第二輪循環(huán)開(kāi)始，每次循環(huán)的產(chǎn)物也做模板參與反應(yīng)，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會(huì)與引物Ⅱ結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸。這樣，DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這段固定長(zhǎng)度的DNA序列呈____________。指數(shù)擴(kuò)增第40頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（2）PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，處于兩引物間固定長(zhǎng)度的序列數(shù)目約為_(kāi)_______。230第41頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1、PCR儀（一）.設(shè)備及用具實(shí)質(zhì)上一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。三、PCR的實(shí)驗(yàn)操作第42頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2、微量離心管一種薄壁塑料管，總?cè)莘e為0.5ml3、微量移液器用于定量轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體，其上的一次性吸液槍頭用一次更換一次。第43頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1.準(zhǔn)備2.移液（二）實(shí)驗(yàn)操作步驟按照PCR反應(yīng)體系的配方將所需用的試劑擺放在實(shí)驗(yàn)桌上。用微量移液器按照PCR反應(yīng)體系配方往微量離心管里面加入各種試劑。混合后蓋嚴(yán)微量離心管口的蓋子，用手指輕輕彈擊管壁。3.混合（1）過(guò)程：將微量離心管放在離心機(jī)上,離心約10s。4.離心（2）離心目的：使反應(yīng)液體集中在離心管底部，提高反應(yīng)效果。第44頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三將離心管放入PCR儀上，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。5.反應(yīng)循環(huán)數(shù)變性復(fù)性延伸第一次94℃，5min－－30次94℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次94℃，1min55℃，30s72℃，1minPCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為三個(gè)基本步驟──變性、復(fù)性和延伸.第45頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三PCR技術(shù)高度靈敏，為了避免外源DNA等因素的污染而造成干擾實(shí)驗(yàn)，PCR操作時(shí)要注意做到：6.注意事項(xiàng)（1）隔離操作區(qū)，所用微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用必須進(jìn)行高壓滅菌；（2）分裝試劑，簡(jiǎn)化操作程序，使用一次性槍頭第46頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（一）、理論上DNA擴(kuò)增數(shù)目的計(jì)算三、課題成果評(píng)價(jià)1.一條DNA，復(fù)制n次，DNA為2n2.a條DNA，復(fù)制n次，DNA為a×2n（二）、實(shí)驗(yàn)中DNA含量的測(cè)定1.原理可以通過(guò)計(jì)算DNA含量來(lái)評(píng)價(jià)擴(kuò)增的效果，DNA在260nm的紫外線波段有一強(qiáng)烈的吸收峰，峰值的大小與DNA的含量有關(guān)。2.過(guò)程（1）稀釋2uLPCR反應(yīng)液，加入98uL蒸餾水，即將樣品進(jìn)行50倍稀釋.第47頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三以蒸餾水作為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)260nm處，將紫外分光光度計(jì)的讀數(shù)調(diào)節(jié)至零。取DNA稀釋液100uL至比色杯中，測(cè)定260nm處的光吸收值DNA含量(g)＝50×(260nm的讀數(shù))×稀釋倍數(shù)50：在標(biāo)準(zhǔn)厚度為1cm比色杯中，OD260為1相當(dāng)于50g/mL的雙鏈DNA分子（2）對(duì)照調(diào)零（3）計(jì)算（4）計(jì)算第48頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三光吸收波長(zhǎng)／nm2602402202800.10.2第49頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三比色杯第50頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三課題3血紅蛋白的提取和分離第51頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、分離蛋白質(zhì)的基本方法原理1、凝膠色譜法（分配色譜法）：a.凝膠：一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖，具多孔的凝膠就叫分子篩）

b.概念：根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用來(lái)進(jìn)行分離。

第52頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三相對(duì)分子質(zhì)量直徑大小運(yùn)動(dòng)方式運(yùn)動(dòng)速度運(yùn)動(dòng)路程洗脫次序大____凝膠顆?？障吨睆?，被排阻在____垂直向下移動(dòng)____較短先從凝膠柱洗脫出來(lái)小____凝膠顆粒空隙直徑，可以進(jìn)入顆粒內(nèi)部垂直向下移動(dòng)，無(wú)規(guī)則擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒____較長(zhǎng)后從凝膠柱洗脫出來(lái)大于凝膠外部快小于慢第53頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第54頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。大分子流動(dòng)快小分子流動(dòng)慢收集大分子收集小分子混合物上柱洗脫第55頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2、

緩沖溶液的作用和組成：

（1）作用：能夠抵制____________的對(duì)溶液___

的影響，維持pH基本不變。外界的酸或堿pH值(2)緩沖溶液的配制

通常由_______種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的_________就可以制得______________

使用的緩沖液。1--2比例在不同pH范圍內(nèi)第56頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三思考：在血紅蛋白整個(gè)實(shí)驗(yàn)室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸緩沖液，目的是利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的pH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察紅色和材料的科學(xué)研究活性。第57頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三在同一電場(chǎng)下，由于各種分子帶電性質(zhì)（正電荷或負(fù)電荷）的差異及分子本身大小、形狀的不同，而使帶電粒子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。（2）原理：（1）概念：帶電粒子在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程3、電泳：第58頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（3）常見(jiàn)方法瓊脂糖凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳第59頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、粗提取血紅蛋白蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：血液血漿血細(xì)胞白細(xì)胞血小板紅細(xì)胞（最多）血紅蛋白兩個(gè)a－肽鏈兩個(gè)β一肽鏈樣品處理——粗分離——純化——純度鑒定第60頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第61頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(1)目的：去除__________1、紅細(xì)胞的洗滌雜質(zhì)蛋白(2)方法：采集血樣：為防止血液凝固，需在采血器中加入抗凝血?jiǎng)幟仕徕c

低速短時(shí)間離心：500r/min，離心2min，這樣做的目的是防止紅細(xì)胞與白細(xì)胞一同沉淀，達(dá)不到分離效果

吸去血漿：用膠頭吸管吸去上層黃色血漿

：直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已經(jīng)洗滌干凈，否則需重復(fù)洗滌第62頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

④生理鹽水洗滌：向盛有暗紅色紅細(xì)胞液體的燒杯中加入五倍體積的生理鹽水，緩緩攪拌10min

⑤低速短時(shí)間離心

⑥重復(fù)③④步驟3次：直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已經(jīng)洗滌干凈，否則需重復(fù)洗滌第63頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（1）方法：加_________到原血液體積，再加40％體積的甲苯，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?0分鐘。（2）目的：使紅細(xì)胞吸水____，血紅蛋白釋放出來(lái)。漲破蒸餾水2、血紅蛋白的釋放（3）原理：滲透作用第64頁(yè)，共73頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、分離血紅蛋白溶液：