10第十章 微生物的分類與鑒定1

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3、寫出微生物的主要類群，并分別指出他們屬生物分類系統(tǒng)中的哪一界。

答：微生物可分為非細(xì)胞生物和細(xì)胞生物，非細(xì)胞生物包括病毒，亞病毒等。

細(xì)胞生物分原核生物和真核生物，原核生物包括古細(xì)菌，真細(xì)菌。真核微生物包括酵母菌，霉菌，單細(xì)胞藻類，原生動物。古細(xì)菌，真細(xì)菌屬原核生物界。酵母菌，霉菌屬真菌界。

單細(xì)胞藻類和原生動物屬原生生物界。病毒和亞病毒屬病毒界。4、微生物分類的依據(jù)主要有哪些？

答：微生物的分類依據(jù)有：形態(tài)特征：個體形態(tài)（形狀、大小、染色反應(yīng)等）、群體形態(tài)（菌落特征、液體培養(yǎng)特點(diǎn)等）

生理生化特征：代謝產(chǎn)物、營養(yǎng)要求、細(xì)胞壁成分等的測定生態(tài)特征：微生物間各種相互關(guān)系的利用遺傳特征：DNA同源性分析G+C的含量其它：全細(xì)胞蛋白的分析、多位點(diǎn)酶的分析等5、簡述內(nèi)共生假說的基本內(nèi)容。

答：認(rèn)為現(xiàn)今一切生物都由一種共同遠(yuǎn)祖進(jìn)化而來，它原是一種小細(xì)胞，先分化出細(xì)菌和古生菌這兩類原核生物，后來在古生菌分支上的細(xì)胞喪失了細(xì)胞壁后，發(fā)展成以變形蟲狀較大型、有真核的細(xì)胞形式出現(xiàn)，它先后吞噬了a變形細(xì)菌（相當(dāng)于G-細(xì)菌）和藍(lán)細(xì)菌，并進(jìn)一步發(fā)生內(nèi)共生，從而兩者進(jìn)化成與宿主細(xì)胞難分難解的細(xì)胞器——線粒體和葉綠體，于是，宿主最終也就發(fā)展成了各類真核生物。

6、微生物的基本分類單元是什么？種以上的分類單元分幾級，各級中、英、拉丁文名稱是什么，請舉一例進(jìn)行分類單元排列。

答：分類單元（taxon，復(fù)數(shù)taxa）是指具體的分類群，如原核生物界（Procaryotae）、腸桿菌科（Enterobacteriaceae）枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）等都分別代表一個分類單元。細(xì)菌的分類單元也分為七個

基本的分類等級（rank或category）或分類階元，由上而下依次是：界、門、綱、目、科、屬、種。在分類中，若這些分類單元的等級不足以反映某些分類單元之間的差異時也可以增加亞等級，即亞界、亞門??亞種，在細(xì)菌分類中還可以在科（或亞科）和屬之間增加族和亞族等級。

7、你認(rèn)為該如何確定一個新種？

答：新種是指最新權(quán)威性的分類、鑒定手冊中從未記載過的一種新分開并鑒定過的微生物。確定一個新種在新種發(fā)表前應(yīng)將其模式菌株存放在權(quán)威保藏機(jī)構(gòu)，保證其他研究者共享；另外一個新種的確定必需查詢過所有中外權(quán)威分類、鑒定手冊，確定所有手冊的從未有這個種的存在，才能確定一個新種，其中花費(fèi)的功夫很大，并且工作細(xì)膩繁雜。

8、微生物分類工作步驟離不開哪三項(xiàng)工作？

答：1、獲得該微生物的純培養(yǎng)物；2、測定一系列必要的鑒定指標(biāo)；3、查找權(quán)威性的菌種鑒定手冊。六、問答題

1微生物的微型、簡便、快速的自動化鑒定系統(tǒng)主要有API系統(tǒng)、Enterotube系統(tǒng)和Biology系統(tǒng)，請表達(dá)各自的特點(diǎn)和應(yīng)用。

答：API系統(tǒng)：特點(diǎn)：能同時測定20項(xiàng)以上生化指標(biāo)，因而可用作快速鑒定細(xì)菌的長形卡片，其上整齊地排列著20個塑料小管，管內(nèi)加有適量的糖類等生化反應(yīng)底物的干粉（有標(biāo)簽標(biāo)明）和反應(yīng)產(chǎn)物的顯色劑。每份產(chǎn)品都有薄膜覆蓋，保證無雜菌污染。使用時，先開啟附有的一小瓶無菌基本培養(yǎng)基（液體），用于稀釋待鑒定的純菌落或菌苔。試驗(yàn)時，先把制成的濃度適中的細(xì)菌懸液吸入無菌滴管中，待撕開覆蓋膜后，一一參與到每個小管中（每管約加0.1ml）一般經(jīng)24～48h保溫后，即可看出每個小管是否發(fā)生顯色反應(yīng)，并將結(jié)果記錄在相應(yīng)的表格中，再加上若干補(bǔ)充指標(biāo)，包括細(xì)胞形態(tài)、大小、運(yùn)動性、產(chǎn)色素、溶血性、過氧化氫酶、芽孢有無和革蘭氏染色反應(yīng)等后，就可按規(guī)定對結(jié)

果進(jìn)行編碼、查檢索表、最終獲得該菌種的鑒定結(jié)果。應(yīng)用：1、用作快速鑒定細(xì)菌的長形卡片；2、國際有關(guān)試驗(yàn)室普遍選用。

Enterotube系統(tǒng)：又稱腸管系統(tǒng)。這是一種用一條有8~12個分隔小室的劃艇形塑料管制成，面上有塑料薄膜覆蓋，可防雜菌污染。每一個小室中灌有能鑒別不同反應(yīng)的固體培養(yǎng)基（擺成斜面狀），所有小室間都有一孔，由一條接種用金屬絲縱貫其中，接種絲的兩端突出在塑料管外，使用前有塑料帽遮蓋著。當(dāng)鑒定一未知菌時，先把兩端塑料帽旋下，抽出接種絲，用一端的接種絲沾取待測菌落，接著在另一端拉出接種絲，然后再回復(fù)原位，以使每個小室的培養(yǎng)基都接上菌種。培養(yǎng)后，按API系統(tǒng)類似的手續(xù)記錄、編碼、鑒定、菌種。Biology系統(tǒng)：特點(diǎn)：自動化、快速、高效和應(yīng)用范圍廣。

應(yīng)用：目前可鑒定1140種常見和不常見的微生物，包括幾乎全部人類病原菌，190種動、植物病原菌以及部分與環(huán)境有關(guān)的細(xì)菌等。

2生物的界級分類學(xué)說有哪些，各主要類群的微生物在各界級分類學(xué)說中分別屬于哪一界？

答：生物的界級分類學(xué)說有：兩界系統(tǒng)、三界系統(tǒng)、四界系統(tǒng)、五界系統(tǒng)、六界系統(tǒng)。

兩界系統(tǒng)：動物界和植物界

三界系統(tǒng)：動物界、植物界、原生生物界四界系統(tǒng)：動物界、植物界、原生生物界、菌界

五界系統(tǒng)：動物界、植物界、原生生物界、真菌界、原核生物界

六界系統(tǒng)：動物界、植物界、原生生物界、真菌界、原核生物界、病毒界3表達(dá)微生物數(shù)值分類工作的基本過程。

答：1、計算兩菌株間的相關(guān)系數(shù)，有以下兩種計算方式：

（1）Ssm=a+b/a+b+c+d；（2）Sj=a/a+b+c。（a為兩菌株均呈正反應(yīng)的性狀

系數(shù)，b為菌株甲呈正反應(yīng)而乙呈負(fù)反應(yīng)的性狀系數(shù)，c為菌株甲呈負(fù)反應(yīng)而乙呈正反應(yīng)的性狀系數(shù)，d為兩菌株均呈負(fù)反應(yīng)的性狀系數(shù)。從式中可知，Ssm值既包含正反應(yīng)性狀，也包含負(fù)反應(yīng)性狀，而Sj則僅包含正反應(yīng)性狀，而不包含負(fù)反應(yīng)性狀）

（2）列出相像度矩陣：對所研究的各個菌株都按配比方式計算出它們的相關(guān)

系數(shù)后，可把所得數(shù)據(jù)填入相像度矩陣中。為了便于觀測，應(yīng)將該矩陣按相關(guān)系數(shù)高低重新排列；

（3）將矩陣圖轉(zhuǎn)換成樹狀譜：矩陣圖轉(zhuǎn)換成樹狀譜后，可以為按數(shù)值關(guān)系判

斷分類譜系提供更直觀的材料。

4微生物分類鑒定有哪些方法，請闡述各自的優(yōu)缺點(diǎn)。答：微生物分類鑒定的方法有：

一、微生物分類鑒定中的經(jīng)典方法：（一）經(jīng)典的鑒定指標(biāo)。優(yōu)點(diǎn)：這些鑒定指標(biāo)是微生物鑒定中最常用、最便利和最重要的數(shù)據(jù)，也是任何現(xiàn)代化的分類鑒定方法的基本依據(jù)。

（二）微生物的微型、簡便、快速或自動化鑒定技術(shù)：1、API細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)；2、Enterotube系統(tǒng)；3、Biology系統(tǒng)；4、細(xì)菌和病毒的靈敏快速鑒定法（①生物芯片法；②免疫傳感器法；③激光散射儀法），優(yōu)點(diǎn)：設(shè)計思路別致、方法巧妙、既靈敏又快速。傳統(tǒng)的細(xì)菌和病毒的鑒定的缺點(diǎn)：手續(xù)較煩、花費(fèi)時間過長。

二、微生物分類鑒定中的現(xiàn)代方法：

（一）通過核酸分析鑒定微生物遺傳型：1、DNA堿基比例的測定；2、核酸分子雜交法；3、rRNA寡核苷