DB32T 4016-2021羊李斯特菌病診斷技術(shù)

ICS65.020.30CSB江蘇省地DB32方標(biāo)準(zhǔn)DB/T4016—2021Diagnosisforgoatandsheeplisteriosis江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布前言學(xué)提出。江蘇省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。草單位：揚州大學(xué)、江蘇省動物疫病預(yù)防控制中心。羊李斯特菌病診斷技術(shù)求。范性引用文件GB4789.30食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗GB489實驗室生物安全通用要求。定義teriosis母羊流產(chǎn)。OlisteriolysinO,LLO臨床診斷迷臥于一側(cè)，直至死亡。病程短的2d~3d，長的1至3周或更長時間。妊娠母羊流產(chǎn)，羔羊常發(fā)生急性相關(guān)的臨床表現(xiàn)。病理診斷.1眼觀病變b)敗血癥型的病羊：肝臟呈多灶性壞死，脾臟腫大，心外膜下出血；c和胎盤充血及廣泛壞死。.2組織病理學(xué)變化室診斷細菌學(xué)診斷細菌分離和培養(yǎng)無菌采取病羊的腦脊髓液、腦、肝、脾、心、肺和腎組織，置于放有冰袋的采樣箱中(溫度低于h菌落形態(tài)及革蘭氏染色h后，形成直徑約為1mm~2mm的乳白色菌落，邊A色，菌落周圍有白色暈環(huán)(見附錄A中圖A.2)。在含七葉苷的瓊脂培養(yǎng)基(如MOX平板)上形成的菌見附錄A中A.3)。生化特性露醇、鼠李糖和木糖及水解七葉苷的能力。增生李斯特菌和伊氏李斯特菌的生化特征如表1所示。生化特征應(yīng)++-+*-++-菌++---++**血清型4h的單核細胞增生李斯特菌不能利用鼠李糖**血清型4h的單核細胞增生李斯特菌協(xié)同溶血反應(yīng)呈陽性有馬紅球菌的血平板上呈鏟型溶血(見附錄A中圖A.4)毒力鑒定分子生物學(xué)診斷p清學(xué)診斷安全措施(規(guī)范性)與鑒定取10g固體樣品或10mL液體樣品(包括血液樣品)放入90mLLEB增菌液中(紗布、棉簽直接hh色暈環(huán)的藍綠色菌落在腦心浸液培養(yǎng)基(BHI)平板上純化培養(yǎng)，單菌落用于后期的進一步鑒定。圖A.1腦心浸液培養(yǎng)基(BHI)上的單核細胞增生李斯特菌菌落AA(規(guī)范性)B.2PCR擴增LB用2種引物(MonoA和LisB)和(Ival和LisB)分別進行種鑒定，PCR反應(yīng)體系如下：mMDNA模板27.75μLLL4μL0.25μL4μL總的反應(yīng)體系50μLB.2.4反應(yīng)結(jié)束后，產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。反應(yīng)的體系與條件參照李斯特菌屬鑒定，其(規(guī)范性)CPBSTL用2h，洗C.5加入1:10000稀釋