細(xì)胞角蛋白19片段操作規(guī)程

文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-008標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門(mén)：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：29-32頁(yè)細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定（縮寫(xiě)CYFRA21-1）；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：腫瘤標(biāo)志物檢查。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本米集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml,不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿標(biāo)本，用肝或EDTA抗凝。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3急診標(biāo)本米集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫(xiě)標(biāo)本米集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在60min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血漿，避免溶血。離心必須達(dá)到4000rpmX15min，離心后的血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15?25°C）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（2?8°C）穩(wěn)定2d，在-20C最多可保存4周。避免反復(fù)凍融。2.2.3已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4?8C冰箱內(nèi)保存7d。2.3標(biāo)本米集的注意事項(xiàng)2.3.1米血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動(dòng)。3方法原理細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定采用雙位點(diǎn)加心化學(xué)發(fā)光免疫分析法，其檢測(cè)原理來(lái)如下：第一步:將標(biāo)本與包被著抗CYFRA21-1抗體的超順磁性磁珠以及抗CYFRA21-1抗體-堿性磷酸酶標(biāo)記物添加到反應(yīng)管中，經(jīng)過(guò)孵化，標(biāo)本中的CYFRA21-1和包被在磁珠上的CYFRA21-1抗體結(jié)合，樣本內(nèi)的CYFRA21-1與包被在磁珠上的抗CYFRA21-1抗體結(jié)合，同時(shí)抗CYFRA21-1抗體-堿性磷酸酶標(biāo)記物與樣本CYFRA21-1上另一位點(diǎn)結(jié)合。在反應(yīng)完成后，磁場(chǎng)吸附磁珠，洗去未結(jié)合的物質(zhì)。第二步：將化學(xué)發(fā)光物添加到反應(yīng)管內(nèi)，發(fā)光底物（AMPPD）被堿性磷酸酶所分解，脫去一個(gè)磷酸基，生成一個(gè)不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物通過(guò)分子內(nèi)電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生間氧苯甲酸甲酯陰離子，處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，再通過(guò)光電倍增管對(duì)反應(yīng)中所產(chǎn)生的光子數(shù)進(jìn)行測(cè)量。所產(chǎn)生光子數(shù)與樣本內(nèi)CYFRA21-1的濃度成正比。樣本內(nèi)分析物的量油校準(zhǔn)曲線來(lái)確定。文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-008標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門(mén)：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：29-32頁(yè)4試劑及其他用品4.1試劑：CYFRA21-1測(cè)定試劑包，由深圳邁瑞公司出品。未打開(kāi)的試劑包保存于2?8°C，有效期365天。開(kāi)啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2試劑盒組分4.2.1磁珠包被物（Ra）成分：包被著抗CYFRA21-1（小鼠單抗，IgG）的超順磁力微粒，懸浮于緩沖液，含防腐劑。裝量：2X30人份/盒，2X2.7ml；2X50人份/盒,2X3.8ml；2X100人份/盒，2X6.6ml。4.2.2酶標(biāo)記物（Rb）成分：抗CYFRA21-1抗體（小鼠單抗，IgG）-堿性磷酸酶標(biāo)記物溶解于緩沖液，含防腐劑。裝量2X30人份/盒，2X2.4ml；2X50人份/盒,2X3.5ml；2X100人份/盒,2X6.3ml。4.2.3試劑即開(kāi)即用，臨用時(shí)輕柔旋轉(zhuǎn)混勻數(shù)次，無(wú)須特殊準(zhǔn)備。4.3其他試劑與用品4.3.1底物液4.3.2清洗緩沖液等。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：采用CYFRA21-1專用配套校準(zhǔn)液。校準(zhǔn)品需在2?8C貯,有效期365天。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：非線性模式，6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線卡片數(shù)據(jù)（6參數(shù)對(duì)數(shù)擬合曲線）自動(dòng)建立校準(zhǔn)曲線。5.3校準(zhǔn)周期：在同一批號(hào)試劑使用期間校準(zhǔn)曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準(zhǔn)。每當(dāng)：①更換試劑批號(hào)或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法:凍干校準(zhǔn)液，用1mL蒸餾水復(fù)溶，復(fù)溶后的校準(zhǔn)液于2?8C保存最長(zhǎng)不超過(guò)5周，或于-20C最長(zhǎng)保存10周。避免反復(fù)凍融。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用CYFRA21-1配套質(zhì)控品。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控液，即開(kāi)即用，充分顛倒混勻，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每一批標(biāo)本中測(cè)定質(zhì)控血清一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用L-J質(zhì)控圖，以土3s為失控限。標(biāo)準(zhǔn)差由本室實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開(kāi)始標(biāo)本檢測(cè)。7適用儀器深圳邁瑞CL-1200i自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑…進(jìn)行校準(zhǔn)…進(jìn)行質(zhì)控…輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目…加載標(biāo)本f標(biāo)本測(cè)定…結(jié)果復(fù)核…報(bào)告。9主要分析參數(shù)

文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-008標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門(mén)：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù):29-32頁(yè)一無(wú)須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預(yù)設(shè)的分析項(xiàng)目參數(shù)和試劑條碼的信息自動(dòng)進(jìn)行分析。標(biāo)本10閆。10結(jié)果計(jì)算一儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果單位以ng/mL表示。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍試劑11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：0.00~30.00U/ml,超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本重新稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能精密度：批內(nèi)CVV3%；批間CVV5%。分析范圍：0.1~500ng/ml。分析靈敏度：0.01ng/ml。12.4方法的有限性及干擾因素：輕度溶血、黃疸、前列腺ACP對(duì)本試驗(yàn)無(wú)明顯干擾。甘油三脂(W1500mg/dL)、血紅蛋白(W1500mg/dL)或膽紅素(W70mg/L)時(shí)對(duì)測(cè)試結(jié)果干擾偏差±10%范圍內(nèi)；含類風(fēng)濕因子(濃度W800IU/ml)的樣本，對(duì)測(cè)試結(jié)果干擾偏差±15%范圍內(nèi)。2000mg/ml以內(nèi)沒(méi)有hook效應(yīng)。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：0~30.00U/ml14臨床意義1.各類非小細(xì)胞肺癌陽(yáng)性檢出率為70%?85%，且水平高低與腫瘤臨床分期正相關(guān)。對(duì)各型肺癌診斷的敏感性依次為鱗癌〉腺癌〉大細(xì)胞癌〉小細(xì)胞癌?？勺鳛榉伟┦中g(shù)和放化療后追蹤早期復(fù)發(fā)的有效指標(biāo)。率。1515.115.2率。1515.115.2結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。審核者認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與其他腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16有關(guān)引用程序與文件CL-1200i自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。16.2免疫檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。16.3檢驗(yàn)結(jié)果審核程序。16.4標(biāo)本送檢和接收程序。文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-008標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門(mén)：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：29-32頁(yè)17參考文獻(xiàn)17.1陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)程.杭州:浙江大學(xué)出版社,2004.17.2細(xì)胞角蛋白19片段測(cè)定試劑說(shuō)明書(shū)。17.3葉應(yīng)嫵，王毓三，申子