專13肝膽疾病檢驗(yàn)

本章教學(xué)要求：

掌握:黃疸的發(fā)生機(jī)理和各型黃疸的代謝特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷要點(diǎn)；肝功能實(shí)驗(yàn)生化檢查指標(biāo)的種類和重點(diǎn)項(xiàng)目的測(cè)定方法及評(píng)價(jià)。

熟悉:肝臟的生物化學(xué)功能，膽紅素代謝；各測(cè)定項(xiàng)目的臨床意義

了解：肝臟的基本機(jī)構(gòu)；肝功能實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目選擇的原則。

第一頁(yè)，共64頁(yè)。一、肝臟結(jié)構(gòu)（一）解剖學(xué)特點(diǎn)雙重血液供應(yīng)腹主動(dòng)脈的分技肝動(dòng)脈氧門靜脈營(yíng)養(yǎng)雙重輸出管道肝靜脈代謝降解物

下腔靜脈膽道系統(tǒng)脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物體外第一節(jié)概述第二頁(yè)，共64頁(yè)。（二）肝臟的顯微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)1、組織結(jié)構(gòu)2、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（三

）細(xì)胞的再生第三頁(yè)，共64頁(yè)。二、肝臟的生物化學(xué)功能排泄功能物質(zhì)代謝功能生物轉(zhuǎn)化重要生化功能第四頁(yè)，共64頁(yè)。（一）排泄功能主要排泄對(duì)象：膽汁酸、膽紅素、氨1、膽汁酸代謝（1）膽汁的分泌：膽汁功能：促進(jìn)脂類的消化吸收，同時(shí)能將體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物及生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物不斷地排入腸道隨糞便排出體外。膽汁的來(lái)源：肝膽汁膽囊膽汁十二指腸膽汁的成分：水/膽汁酸（鹽）、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇第五頁(yè)，共64頁(yè)。（2）膽汁酸生成及種類：初級(jí)膽汁酸（肝細(xì)胞）次級(jí)膽汁酸（腸道）初級(jí)游離膽汁酸初級(jí)結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┐渭?jí)游離膽汁酸次級(jí)結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┑诹?yè)，共64頁(yè)。初級(jí)膽汁酸（肝細(xì)胞）初級(jí)游離膽汁酸初級(jí)結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/牛磺酸）膽酸鵝脫氧膽酸甘氨酸膽酸?；撬崮懰岣拾彼狴Z脫氧膽酸?；撬狴Z脫氧膽酸次級(jí)膽汁酸（腸道）次級(jí)游離膽汁酸次級(jí)結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┟撗跄懰崾懰岣拾泵撗跄懰崤；敲撗跄懰岣拾彼崾懰崤；撬崾懰岬谄唔?yè)，共64頁(yè)。（3）膽汁酸肝腸循環(huán)：（4）膽汁酸的功能：①促進(jìn)脂類消化②促進(jìn)脂類吸收③抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀游離型膽汁酸結(jié)合型膽汁酸第八頁(yè)，共64頁(yè)。2、膽紅素代謝膽色素

尿膽素原糞膽素原尿膽素糞膽素膽綠素膽紅素未結(jié)合膽紅素(單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)如骨髓、脾臟)結(jié)合膽紅素（肝臟）膽素原第九頁(yè)，共64頁(yè)。第十頁(yè)，共64頁(yè)。未結(jié)合膽紅素的來(lái)源與轉(zhuǎn)運(yùn)：結(jié)合膽紅素的來(lái)源與轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝：衰老紅細(xì)胞血紅蛋白第十一頁(yè)，共64頁(yè)。3、血氨代謝藥物及體內(nèi)含氮物質(zhì)（如嘌呤、嘧啶等）來(lái)源去路相對(duì)平衡第十二頁(yè)，共64頁(yè)。部位——肝臟細(xì)胞鳥氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鳥氨酸精氨酸H2O尿素天門冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循環(huán)第十三頁(yè)，共64頁(yè)。（二）物質(zhì)代謝功能1、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝2、激素及維生素代謝(1)在蛋白質(zhì)代謝中的作用(2)在氨基酸代謝中的作用(3)在糖代謝中的作用(4)在脂代謝中的作用激素的滅活主要在肝臟進(jìn)行多種維生素能在肝細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存并進(jìn)行轉(zhuǎn)化第十四頁(yè)，共64頁(yè)。（三）肝臟的生物轉(zhuǎn)化定義：生物轉(zhuǎn)化:

機(jī)體對(duì)許多外源性或內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)變，增加其水溶性(或極性)，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過(guò)程稱生物轉(zhuǎn)化(biotransformation)。

轉(zhuǎn)化對(duì)象：轉(zhuǎn)化特點(diǎn)：生理意義：保護(hù)機(jī)體,致癌、致畸內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物:氨、胺、膽色素、激素

外源性非營(yíng)養(yǎng)物:藥物、毒物、食品防腐劑、色素

①連續(xù)性，②多樣性，③失活與活化雙重性第十五頁(yè)，共64頁(yè)。三、肝臟疾病的生化改變（一）膽紅素代謝障礙（黃疸）定義:黃疸分類:黃疸和阻塞性黃疸溶血性黃疸肝細(xì)胞性黃疸高膽紅素血癥第十六頁(yè)，共64頁(yè)。第十七頁(yè)，共64頁(yè)。（二）膽汁酸代謝障礙1、膽汁酸合成障礙2、膽汁酸向腸道排出障礙3．膽汁酸腸肝循環(huán)紊亂4．膽汁瘀積病變時(shí)膽汁酸代謝紊亂第十八頁(yè)，共64頁(yè)。（三）血漿酶異常1．肝臟合成酶類:膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白；2.肝細(xì)胞內(nèi)酶:

ALT、AST

3．肝臟阻塞性疾病酶活性改變：ALP、GGT4．肝硬化疾病酶活性改變：?jiǎn)伟费趸福∕AO）

（四）血漿蛋白異常第十九頁(yè)，共64頁(yè)。第二節(jié)肝功能試驗(yàn)血清（漿）蛋白測(cè)定血清酶測(cè)定血清膽紅素測(cè)定血清膽汁酸測(cè)定血氨測(cè)定第二十頁(yè)，共64頁(yè)。一、血清（漿）蛋白測(cè)定（一）總蛋白、白蛋白、及白蛋白/球蛋白（A/G）比值測(cè)定

1．總蛋白測(cè)定化學(xué)法(雙縮脲法)、物理法、染料結(jié)合法、電泳法染料結(jié)合法(BCG、BCP）、沉淀法2.白蛋白測(cè)定3．A/G比值第二十一頁(yè)，共64頁(yè)。【參考范圍】總蛋白60～80g/L白蛋白35～55g/L球蛋白：15～32g/LA/G比值：1.5～2.0/1【臨床意義】嚴(yán)重肝病時(shí)，肝臟合成分子量小的蛋白質(zhì)能力降低，血中白蛋白濃度減少；而免疫系統(tǒng)、單核巨噬細(xì)胞合成球蛋白增加，導(dǎo)致A/G比值減少。嚴(yán)重則會(huì)出現(xiàn)A/G比值小于1，稱為A/G比值倒置，表示肝功能損害嚴(yán)重。第二十二頁(yè)，共64頁(yè)。（二）纖維蛋白原測(cè)定（凝血因子Ⅰ）測(cè)定方法：分為三大類①根據(jù)纖維蛋白原的生物學(xué)特性測(cè)定方法②根據(jù)纖維蛋白原理化性質(zhì)而建立的測(cè)定方法。③根據(jù)纖維蛋白原免疫學(xué)特點(diǎn)而建立的測(cè)定方法?！緟⒖挤秶?/p>

2.22～4.22g/L(熱沉淀比濁法)【臨床意義】(1)纖維蛋白原增加：①感染；②無(wú)菌炎癥；③其它。(2)纖維蛋白原減少:①嚴(yán)重的肝臟疾?。虎谄渌膊∫鹄w維蛋白原減少的疾病。第二十三頁(yè)，共64頁(yè)。（三）甲胎蛋白（α1-fetoprotein，AFP）測(cè)定測(cè)定方法：【參考范圍】成人10～30μg/L>400μg/L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)【臨床意義】

酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合法、火箭電泳放射自顯影法、酶聯(lián)火箭電泳法等(1)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清AFP測(cè)定值超過(guò)400μg/L(400ng/ml)

；(2)活動(dòng)性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的診斷．第二十四頁(yè)，共64頁(yè)。（四）其它【臨床意義】

肝豆?fàn)詈俗冃裕╓ilson病）和遺傳性色素沉積癥．1.銅藍(lán)蛋白測(cè)定【參考范圍】

52.9～167.7IU/L【臨床意義】

遺傳性血色素沉積癥鐵沉積2．轉(zhuǎn)鐵蛋白【原理】

雙聯(lián)吡啶法【原理】

銅藍(lán)蛋白具有氧化酶活性

【參考范圍】

TIBC男50～77μmol/L女54～77μmol/L轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度為33.0%～35.0%

第二十五頁(yè)，共64頁(yè)。二、血清酶測(cè)定（一）氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定1．賴氏法測(cè)定ALT（１）原理：

ALT催化丙氨酸(alamine)與α-酮戊二酸(α-oxoglutarate)之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，生成丙酮酸(pyruvate)和谷氨酸(glutamate)。

在37℃及pH7.4條件下反應(yīng)30min，以2，4-二硝基苯肼終止反應(yīng)，并與底物α-酮戊二酸和產(chǎn)物α-丙酮酸的羰基生成2，4-二硝基苯腙，苯腙在堿性條件下生成紅棕色，與505nm波長(zhǎng)處讀取吸光度后計(jì)算活性。（２）方法評(píng)價(jià)：①賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；②NaOH的濃度對(duì)顯色有影響；③該法的重復(fù)性差。第二十六頁(yè)，共64頁(yè)。

卡門氏單位：1.0ml血清在25℃，340nm，反應(yīng)體積3.0ml,光徑1.0cm時(shí)每分鐘測(cè)定吸光度下降0.001，即消耗4.8210-4μmolNADH為一個(gè)卡門氏單位第二十七頁(yè)，共64頁(yè)?！緟⒖挤秶?/p>

5～25卡門氏單位【臨床意義】(2)慢性活動(dòng)性肝炎或脂肪肝：(1)肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo):ALT輕度增高(100～200IU),或?qū)僬７秶?第二十八頁(yè)，共64頁(yè)。2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定ALT（１）原理：

采用酶偶聯(lián)反應(yīng),即L-丙氨酸和α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸再在LD作用下生成L-乳酸，同時(shí)NADH被氧化為NAD+,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)到NADH的消耗量,從而計(jì)算出ALT活性濃度。

雙試劑法

:首先使血清與缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保溫5分鐘，將標(biāo)本中所含的α-酮酸(如丙酮酸)消耗完，然后，加入α-酮戊二酸啟動(dòng)ALT催化的反應(yīng)，在波長(zhǎng)340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率(-△A/min)，來(lái)計(jì)算ALT的活性。第二十九頁(yè)，共64頁(yè)。（２）方法評(píng)價(jià)：①存在著兩個(gè)副反應(yīng)，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏高；A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。B、血清中谷氨酸脫氫酶(GLDH)增高時(shí)，在有氨存在條件下，亦能消耗NADH。

②雙試劑法，因溫育期長(zhǎng)，能有效地消除干擾反應(yīng)，測(cè)定準(zhǔn)確性高，是ALT測(cè)定的首選方法；③血清不宜反復(fù)冰凍保存，以免影響酶活性；避免使用溶血標(biāo)本。第三十頁(yè)，共64頁(yè)。3.賴氏法測(cè)定AST（１）原理：

血清中的AST可催化門冬氨酸(aspartate)與α-酮戊二酸間的氨基移換，生成草酸乙酸(oxaloacetate)和L-谷氨酸。草酸乙酸自行脫羧轉(zhuǎn)變成為丙酮酸。反應(yīng)60分鐘后，加入2，4-二硝基苯肼終止反應(yīng)，并與酮酸生反應(yīng)生成兩種2，4-二硝基苯腙。在堿性條件下,兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在505nm處差異最大，由草酸乙酸轉(zhuǎn)變成的丙酮酸所生成的苯腙呈色強(qiáng)度顯著大于α-酮戊二酸苯腙。據(jù)此可用比色法測(cè)定AST活性。

（２）方法評(píng)價(jià)：①賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；②該法的重復(fù)性差：負(fù)干擾現(xiàn)象第三十一頁(yè)，共64頁(yè)?！緟⒖挤秶?/p>

8～28卡門氏單位【臨床意義】肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎：血清AST也可輕度增高。心肌梗死：血清中AST活性增高各種肝病病人：血清AST的升高第三十二頁(yè)，共64頁(yè)。4．連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定AST（１）原理：

采用酶偶聯(lián)反應(yīng),即L-門冬氨酸和α-酮戊二酸在AST作用下，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶作用下生成L-蘋果酸，同時(shí)伴有NADH轉(zhuǎn)化為NAD+，在340nm監(jiān)測(cè)NADH的轉(zhuǎn)化速率，從而計(jì)算出AST的活性。

雙試劑法

:同ＡＬＴ測(cè)定。第三十三頁(yè)，共64頁(yè)。（２）方法評(píng)價(jià)

誤差可來(lái)自內(nèi)源性和(或)外源性內(nèi)源性干擾主要來(lái)自血清中高濃度丙酮酸和L-谷氨酸脫氫酶(GLDH)。外源性干擾來(lái)自試劑中污染的GLDH和AST。

【參考范圍】

5～40IU/L(連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定)

【臨床意義】

見(jiàn)賴氏法第三十四頁(yè)，共64頁(yè)。(二)ALP測(cè)定化學(xué)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法：鮑氏法金氏法皮氏法第三十五頁(yè)，共64頁(yè)。１、金氏法測(cè)定ALP（１）原理：

ALP在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解釋放出酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4－氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，根據(jù)紅色深淺確定ALP的活力。(2)方法評(píng)價(jià)：

磷酸苯二鈉比色法與更早的β-甘油磷酸鈉法相比具有較大的優(yōu)點(diǎn)，如水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與磷酸對(duì)硝基酚連續(xù)監(jiān)測(cè)法相比，準(zhǔn)確度、精密度較低；操作比較繁瑣,靈敏度低。第三十六頁(yè)，共64頁(yè)。【參考范圍】成人：3～13單位，兒童：5～28單位

ALP金氏單位定義是100ml血清，37℃與底物保溫15分鐘，產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)金氏單位。ALP主要用于診斷肝膽和骨骼疾病【臨床意義】第三十七頁(yè)，共64頁(yè)。2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定ALP（１）原理：以磷酸對(duì)硝基酚(p-nitrophenylphosphate,4-NPP)為底物，2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙醇胺為磷酸基的受體。在堿性環(huán)境下，ALP催化4-NPP水解產(chǎn)生游離的對(duì)硝基酚，對(duì)硝基酚(p-nitrophenol，4-NP)在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成黃色。根據(jù)405nm處吸光度增高速率來(lái)計(jì)算ALP活性單位。（１）方法評(píng)價(jià)：線性范圍可達(dá)500U/L，批內(nèi)CV為2.06%～2.36%，批間CV為2.74%。第三十八頁(yè)，共64頁(yè)。【參考范圍】男性：1～12歲<500U/L,女性：1～12歲<500U/L

12～15歲<750U/L，>15歲40～150U/L，

>25歲40～150U/L?！九R床意義】

見(jiàn)金氏法第三十九頁(yè)，共64頁(yè)。(三)谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT

或γ-GT）測(cè)定法化學(xué)法（重氮反應(yīng)比色法）和連續(xù)監(jiān)測(cè)法。1.重氮反應(yīng)比色法測(cè)定GGT原理：

【參考范圍】男性3～17U/L；女性2～13U/L

(2)方法評(píng)價(jià)：重氮比色法活性單位：100ml血清在37℃下反應(yīng)1hr,生成0.5μmol的α-苯胺為1個(gè)GGT活性單位。以萘胺鹽為底物，在GGT催化下，γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移到甘肽分子上，同時(shí)釋放出游離的α-萘酚，后者與重氮鹽反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，其顏色深淺與GGT濃度呈正比，通過(guò)比色法檢測(cè)530nm處吸光度，進(jìn)而計(jì)算酶的活性。第四十頁(yè)，共64頁(yè)。(1)原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌時(shí)，血中GGT明顯升高。其原因是癌細(xì)胞產(chǎn)生的GGT增多和癌組織本身或其周圍的炎癥刺激作用，使肝細(xì)胞膜的通透性增加，以致血中GGT增高。(2)阻塞性黃疸、急性肝炎、慢性肝炎活動(dòng)期、膽道感染、肝硬化等都可使GGT升高。(3)其他疾病如心肌梗塞、急性胰腺炎及某些藥物等均可使血中GGT升高?！九R床意義】：2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定GGT(1)原理：自學(xué)

(2)方法評(píng)價(jià)：【參考范圍】男性：11～50U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物)女性：7～32U/L

男性：≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺為底物)第四十一頁(yè)，共64頁(yè)。(四)MAO測(cè)定原理:

MAO主要作用于CH2-NH2基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成相應(yīng)的卞醛、氨及過(guò)氧化氫。以芐氨偶氮-β-萘酚為底物,在O2和H20參與下，MAO催化生成芐醛偶氮-β-萘酚、氨及過(guò)氧化氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)行比色測(cè)定。(2)方法評(píng)價(jià)：【單位定義】：

1ml血清與底物在37℃孵育60分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生1nmol芐醛偶氮-β-萘酚為1個(gè)MAO單位?！緟⒖挤秶?2～40U/ml(12×103～40×103U/L)。【臨床意義】：肝硬化時(shí)，肝纖維化現(xiàn)象十分活躍，MAO活性明顯升高。

第四十二頁(yè)，共64頁(yè)。三、血清膽紅素測(cè)定重氮鹽法膽紅素氧化酶(bilirubinoxidase,BOD)法高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度計(jì)法測(cè)定方法第四十三頁(yè)，共64頁(yè)。1．重氮鹽改良J-G(JendrassikandGrofmethod,J-G)法(1)原理:血清中結(jié)合膽紅素與重氮鹽反應(yīng)生成偶氮膽紅素；同樣條件下，游離膽紅素需要在加速劑作用下，使游離膽紅素分子內(nèi)的次級(jí)鍵斷裂，極性上升并與重氮試劑反應(yīng)。反應(yīng)完成后加入終止試劑，繼而加入堿性酒石酸鉀鈉使紫色偶氮試劑轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，波長(zhǎng)600nm下比色分析，求出血樣中總膽紅素的含量。(2)方法評(píng)價(jià)：推薦的常規(guī)方法，其方法的線性范圍較寬，在342μmol/L(200mg/L)濃度下有較好的準(zhǔn)確性和精確性，高濃度時(shí)準(zhǔn)確性和精確性降低。因此，建議濃度過(guò)高時(shí)減少血樣用量測(cè)定。第四十四頁(yè)，共64頁(yè)?！九R床意義】【參考范圍】

黃疸的鑒別診斷總膽紅素:5.1～19.0μmol/L(0.3～1.1mg/dL)直接膽紅素:1.71～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dL)第四十五頁(yè)，共64頁(yè)。2．膽紅素BOD測(cè)定法(1)原理:BOD在不同pH條件下催化不同組份的膽紅素氧化生成膽綠素，膽綠素與氧進(jìn)行非酶促反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榈仙衔?，膽紅素的最大吸收峰在450nm

附近。隨著膽紅素被氧化,450nm下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。在pH8.0條件下,未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，用于測(cè)定總膽紅素,在pH=4.5的酸性條件下，BOD僅能催化結(jié)合膽紅素和大部分δ膽紅素，而游離膽紅素不被氧化，測(cè)定其含量代表結(jié)合膽紅素。(2)方法評(píng)價(jià)：BOD法測(cè)定總膽紅素的準(zhǔn)確性、精密度比改良J-G法好第四十六頁(yè)，共64頁(yè)?！緟⒖挤秶垦蹇偰懠t素：10.26±4.10μmol/L血清結(jié)合膽紅素：2.57±2.56μmol/L膽紅素μmol/L=膽紅素mg/LX17.1【臨床意義】見(jiàn)重氮比色法第四十七頁(yè)，共64頁(yè)。四、血清膽汁酸測(cè)定高效液相色譜法放射免疫分析法酶免疫分析法比色分析測(cè)定法測(cè)定方法第四十八頁(yè)，共64頁(yè)。(1)酶比色法測(cè)定原理3α-羥類固醇脫氫酶（3α-HSD）膽汁酸+NAD+3-酮類固醇+NADH（1）

NADH+氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)甲簪jie（藍(lán)色化合物λ=540nm）（2）

3-酮類固醇+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH（3）硫辛酰胺脫氫酶又稱黃遞酶3-氧-5β-類固醇脫氫酶（△4-DH）酶比色法第四十九頁(yè)，共64頁(yè)。由于膽汁酸在血中含量低，方法檢測(cè)的靈敏度達(dá)不到要求，通過(guò)增加3-氧-5β-類固醇脫氫酶(△4-DH)，膽汁酸經(jīng)3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)催化的產(chǎn)物3-酮類固醇在△4-DH作用下再次脫氫，加大了NADH的生成量，提高了反應(yīng)的檢測(cè)能力（見(jiàn)反應(yīng)式1、2、3）。但以上兩種方法都存在一個(gè)缺點(diǎn)：生成的藍(lán)色產(chǎn)物是一種染料，易于附著管壁，難于清洗或堵塞管道。酶循環(huán)法測(cè)定原理為：NAD+硫代氧化型輔酶Ⅰ：Thio-NADThio-NADH膽汁酸3-酮類固醇NADH3α-HSD第五十頁(yè)，共64頁(yè)。(2)酶比色測(cè)定法評(píng)價(jià)：快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠和適用的優(yōu)點(diǎn)。它即可以手工操作、也可以在自動(dòng)化儀器上進(jìn)行。但試劑價(jià)貴、不易保持。對(duì)酶量的要求嚴(yán)格，以保證酶促反應(yīng)在零級(jí)反應(yīng)下進(jìn)行，酶量不足易產(chǎn)生誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)品的制備非常重要。常采用甘氨膽酸溶入小牛血清中制成凍干品。

第五十一頁(yè)，共64頁(yè)?！緟⒖挤秶?～7μmol/L

(成人空腹血清總膽汁酸)【臨床意義】

任何引起肝細(xì)胞損傷的病理過(guò)程都可能引起血中膽汁酸升高可見(jiàn)于各種類型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也見(jiàn)于急慢性膽道阻塞。其中空腹膽汁酸測(cè)定是一種敏感、特異性強(qiáng)并相對(duì)簡(jiǎn)單的肝功能試驗(yàn)，是目前公認(rèn)最敏感的肝功能試驗(yàn)之一。特別適用于可疑有肝病但其它生化試驗(yàn)正常或輕度異常的病人診斷。第五十二頁(yè)，共64頁(yè)。五、血氨測(cè)定為一步法，也叫直接測(cè)定即不需從全血中分離出氨即可直接測(cè)定兩步法，即先從全血中分離出氨,而后再進(jìn)行測(cè)定；微量擴(kuò)散法、離子交換法酶法和氨電極法第五十三頁(yè)，共64頁(yè)。原理：

血漿中的氨在足量α-酮戊二酸和NADPH存在時(shí)，經(jīng)谷氨酸脫氫酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH，NADPH的下降速率與血漿氨濃度成正比。

NH3＋α-酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋NADP+＋H2O谷氨酸脫氫酶速率法：谷氨酸脫氫酶(2)方法評(píng)價(jià)：本法特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，是較為理想的氨分析方法。在200μmol/L范圍內(nèi)、線性良好。精密度：批內(nèi)CV=3.9%；批間CV=4.5%?；厥章蕿?7.9%～102.7%。第五十四頁(yè)，共64頁(yè)。【參考范圍】血氨測(cè)定在診斷治療肝性腦病中占有重要作用。【臨床意義】18～72μmol/L

(酶法)第五十五頁(yè)，共64頁(yè)。第三節(jié)肝功能試驗(yàn)的選擇與評(píng)價(jià)一、肝功能試驗(yàn)的組合原則1.對(duì)篩選肝功能異常的診斷靈敏度高；2.對(duì)肝臟疾病診斷的特異性強(qiáng)；3.對(duì)不同疾病鑒別的選擇性好。

目前尚難找出完全符合上述條件的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，臨床上應(yīng)盡可能選用相對(duì)靈敏和特異的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。遵循的原則：①根據(jù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的性質(zhì)和特點(diǎn)；②按臨床實(shí)際應(yīng)用的需要；③結(jié)合具體病情及所在醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室條件。（一）肝功能試驗(yàn)項(xiàng)目選擇的原則第五十六頁(yè)，共64頁(yè)。（二）肝功能試驗(yàn)的分類1.反映肝細(xì)胞損傷的項(xiàng)目：以血清酶檢測(cè)常用，包括：（1）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（又稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶，ALT）（2）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（又稱谷草轉(zhuǎn)氨酶，AST）（3）堿性磷酸酶（ALP）（4）γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ－GT或GGT）。

各種急性病毒性肝炎、藥物或酒精引起急性肝細(xì)胞損傷時(shí)，血清ALT最敏感，在臨床癥狀如黃疸出現(xiàn)之前ALT就急劇升高，同時(shí)AST也升高，但是AST升高程度不如ALT。而在慢性肝炎和肝硬化時(shí)，AST升高程度超過(guò)ALT，因此AST主要反映的是肝臟損傷程度。

重癥肝炎時(shí)，出現(xiàn)“膽酶分離”現(xiàn)象，常常是肝壞死的前兆。在急性肝炎恢復(fù)期，如果出現(xiàn)ALT正常而γ-GT持續(xù)升高，提示肝炎慢性化。患慢性肝炎時(shí)如果γ-GT持續(xù)超過(guò)正常參考值，提示慢性肝炎處于活動(dòng)期。

2.反映肝細(xì)胞合成功能的檢查項(xiàng)目：包括（1）前白蛋白（PA）（2）白蛋白（Alb）（3）膽堿酯酶（CHE）（4）凝血酶原時(shí)間（PT）等。

肝病病情越重，血清膽堿酯酶活性越低。膽堿酯酶活性持續(xù)降低且無(wú)回升，多提示預(yù)后不良。肝膽疾病時(shí)ALT和GGT均升高，如果同時(shí)CHE降低者為肝臟疾患，而正常者多為膽道疾病。另外CHE增高可見(jiàn)于甲亢、糖尿病、腎病綜合征及脂肪肝。凝血酶原時(shí)間（PT）延長(zhǎng)揭示肝臟合成各種凝血因子的能力降低。

第五十七頁(yè)，共64頁(yè)。

3.反映肝內(nèi)外膽道阻塞的檢查項(xiàng)目：（1）包括總膽紅素（TBil）（2）直接膽紅素（DBil）（3）總膽汁酸（TBA）等的測(cè)定。

病毒性肝炎、藥物或酒精引起的中毒性肝炎、溶血性黃疸、惡性貧血、陣發(fā)性血紅蛋白尿癥及新生兒黃疸、內(nèi)出血等時(shí)，都可以出現(xiàn)總膽紅素升高。

另外γ-GT、ALP的升高主要提示可能出現(xiàn)了膽道阻塞方面的疾病。

4.反映肝纖維化病變的檢查項(xiàng)目：包括（1）單胺氧化酶（MAO）（2）總膽紅素（TBil）（3）白蛋白（Alb）（4）血清蛋白電泳等。

肝臟纖維化或肝硬化時(shí)，會(huì)出現(xiàn)血清白蛋白和總膽紅素降低，同時(shí)伴有單胺氧化酶升高。血清蛋白電泳中γ球蛋白增高的程度可評(píng)價(jià)慢性肝病的演變和預(yù)后，提示肝巨噬細(xì)胞功能減退，不能清除血循環(huán)中內(nèi)源性或腸源性抗原物質(zhì)。

最臨床上應(yīng)用較多的透明質(zhì)酸（HA）、層黏蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原肽和Ⅳ型膠原的血清水平升高提示可能存在肝纖維化和肝硬化。

第五十八頁(yè)，共64頁(yè)。

5.反映肝臟腫瘤的血清標(biāo)志物：目前用于診斷原發(fā)性肝癌的生化檢驗(yàn)指標(biāo)只有甲胎蛋白（AFP）。

α-L-巖藻糖苷酶（AFU）血清測(cè)定對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的陽(yáng)性率在64%～84%之間，特異性在90%左右。AFU對(duì)檢出小肝癌的高敏感性，對(duì)預(yù)報(bào)肝硬變并發(fā)肝癌的高特異性，和與AFP測(cè)定的良好互補(bǔ)性，是肝癌診斷、隨訪和肝硬化監(jiān)護(hù)的手段。另外