檢測技術及梅毒實驗室檢測技術詳解演示文稿

檢測技術及梅毒實驗室檢測技術詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有38頁\編輯于星期四優(yōu)選檢測技術及梅毒實驗室檢測技術現(xiàn)在是2頁\一共有38頁\編輯于星期四試驗室假陰性報告的原因分析窗口期非典型血清學轉換病毒變異實驗室誤差實驗室進行艾滋病抗體篩查很很多的原因可能造成漏檢,曾經有文獻具體分析過造成漏檢的原因,主要原因有因為窗口期的原因造成漏檢,因為病毒變異以及實驗室誤差等原因造成的漏檢.其中最主要的原因是因為窗口期的問題造成的漏檢.占整體比例的93.7%.

現(xiàn)在是3頁\一共有38頁\編輯于星期四篩查試驗復核檢測確證試驗檢測程序及流程圖現(xiàn)在是4頁\一共有38頁\編輯于星期四

HIV抗體篩查檢測流程樣品初篩試驗篩查試劑陽性反應陰性反應復檢試驗原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑均陽性反應一陰一陽均陰性反應確證試驗報告陰性

現(xiàn)在是5頁\一共有38頁\編輯于星期四酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光法快速檢測及其它檢測

明膠顆粒凝集試驗（PA）

免疫滲濾試驗：斑點ELISA和斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗電化學發(fā)光試驗其它快速篩查試驗方法艾滋病唾液尿液檢測試劑初篩檢測方法現(xiàn)在是6頁\一共有38頁\編輯于星期四酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)

最早用于檢測血清中HIV抗體的有效篩檢方法；很高的敏感性和特異性；

HIV抗體檢測試劑根據(jù)其抗原的來源和檢測方式可分為四代；根據(jù)檢測方法，可分成四類間接法、雙抗原夾心法、競爭法和捕獲法?，F(xiàn)在是7頁\一共有38頁\編輯于星期四（1）膠體金（膠體硒）法（2）明膠凝集法（3）斑點印跡試驗（4）電化學發(fā)光法快速檢測方法現(xiàn)在是8頁\一共有38頁\編輯于星期四（1）膠體金法原理：采用雙抗原夾心法免疫測定原理，使用純化HIV-1/2基因重組抗原，分別固定于硝酸纖維膜上，作為檢測線，并且用這些抗原標記膠體金。當待檢樣本中存在HIV抗體時，先和金標記抗原結合，由于層析作用向前移動，當遇到膜上固定的抗原時，形成Ag-Ab-Ag-AU復合物而富集在包被線上，形成一條或二條紅色線，是陽性結果。反之，若標本中不存在HIV抗體，則不會出現(xiàn)紅線，是陰性結果。無論樣本中是否含有HIV抗體，在質控線區(qū)域都會形成另一條紅色線。

T-檢測線C-質控線現(xiàn)在是9頁\一共有38頁\編輯于星期四1.準備試劑與相關耗材2.每個樣本檢測用一片試劑，標上相應樣本編號.

3.加入50μl全血或血清和血漿4.5-20分鐘讀取結果

5.讀取和記錄檢測結果.

現(xiàn)在是10頁\一共有38頁\編輯于星期四陽性反應：在質控窗和反應窗均顯示紅線。陰性反應：只在質控窗出現(xiàn)紅線，反應窗沒有紅線。無效：在質控窗沒有出現(xiàn)紅線，說明檢測無效，需要重新檢測?，F(xiàn)在是11頁\一共有38頁\編輯于星期四第四代試劑

聯(lián)合檢測HIVP24抗原和抗HIV抗體電化學發(fā)光法現(xiàn)在是12頁\一共有38頁\編輯于星期四第一代艾滋病抗體檢測試劑檢測的是HIV-1的IgG抗體,檢測的窗口期大約是42天.第二代試劑可以檢測HIV-1和HIV-2型的IgG抗體窗口期縮短至35天.第三代的試劑可以同時檢測IgG和IgM抗體,將檢測的窗口期又縮短至22天.第四代的可以聯(lián)合檢測HIV的P24抗原和HIV-1/2型抗體的試劑,大約平均比較第三代試劑縮短6天時間.

現(xiàn)在是13頁\一共有38頁\編輯于星期四ElecsysHIVCombi的檢測原理羅氏第四代HIVCombi試劑檢測的是HIVP24抗原和HIV-1/HIV-2抗體.檢測P24抗原使用的是單克隆的HIV抗體.檢測HIV-1/2抗體使用的是大量的重組抗原,來捕捉IGg和IGM抗體.

釕生物素辣根過氧化物酶標記的磁性珠電化學發(fā)光現(xiàn)在是14頁\一共有38頁\編輯于星期四快速檢測法的優(yōu)先使用

技術角度需要考慮：需要快速得到結果、免去試劑和樣本的冷鏈運輸環(huán)節(jié)、小空間實驗室的成本效益、檢測的簡單性等。

優(yōu)先使用包括：應急、門診急診，如VCT、母嬰傳播、臨床評估、農村血檢、術前檢測、緊急事件等?，F(xiàn)在是15頁\一共有38頁\編輯于星期四HIV快速檢測的局限性一般不用于血液篩查有一定的假陽性反應窗口期問題：有一定的假陰性反應（尤其暴露時間<3個月）HIV抗體快速檢測具有快速優(yōu)勢，但是“快速”并不意味著對早期感染者的快速診斷，因為HIV感染后產生抗體應答需要一段時間，存在窗口期（即從暴露至最早檢測出的時間），即使采用分子生物學試驗，也有1～2周的窗口期?，F(xiàn)在是16頁\一共有38頁\編輯于星期四陰性－－報告“HIV抗體陰性”陽性－－出具“HIV抗體待復查”報告（1）不能出陽性報告。（2）同時盡快進行以下處理：

在廣州市疾病預防控制中心數(shù)字化信息系統(tǒng)填寫送檢病例信息，打印送檢單，重新采血，兩份血和紙質版送檢單一并送篩查中心或確證實驗室；做檢測后咨詢；初篩陽性告知。（注意告知技巧）

篩查檢測結果的報告和處理現(xiàn)在是17頁\一共有38頁\編輯于星期四抗體篩查試驗的局限性陽性結果需用其他試劑復查以及確證。陰性結果有時不能排除HIV感染:(1)在感染早期，血清陽轉前存在“窗口期”，在感染晚期，某些抗體可能檢測不到（如p24抗體）。

(2)反應中抗體過量，抗原抗體比例不合適而不能形成特定結構，出現(xiàn)凝集抑制?，F(xiàn)在是18頁\一共有38頁\編輯于星期四艾滋病實驗室生物安全生物安全細則職業(yè)暴露的防范現(xiàn)在是19頁\一共有38頁\編輯于星期四梅毒實驗室檢測技術廣州醫(yī)科大學附屬第五醫(yī)院檢驗科詹鈾超現(xiàn)在是20頁\一共有38頁\編輯于星期四主要內容實驗室檢測注意事項及臨床意義梅毒實驗室檢測策略探討現(xiàn)在是21頁\一共有38頁\編輯于星期四常用梅毒實驗室檢測方法病原學檢測血清學檢測現(xiàn)在是22頁\一共有38頁\編輯于星期四病原學檢查原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。方法：（1）暗視顯微鏡檢查（2）鍍銀染色法 （3）核酸檢測（血液標本？）注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功， 僅能通過接種兔睪丸等部位進行有限增殖?，F(xiàn)在是23頁\一共有38頁\編輯于星期四梅毒血清學檢測方法1)非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （特異性梅毒抗體）兩類方法?，F(xiàn)在是24頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質作出免疫應答，產生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。未經治療的病人，其血清內的非特異性抗體可長期存在。經正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉為陰性?，F(xiàn)在是25頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學原理方法包括：（1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和膽固醇抗原抗體結合形成復合物，凝集成網狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似現(xiàn)在是26頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理示意圖現(xiàn)在是27頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點1、儀器：水平旋轉儀，轉速100r/min，轉幅約18mm2、定性試驗加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原（60滴/mL，1滴=17ul）反應：水平旋轉儀旋轉8分鐘(23℃-29℃）亮光下觀察結果?，F(xiàn)在是28頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點3、定量試驗稀釋夜準備：在反應紙板圈內加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內。下同定性實驗。1:11:21:8現(xiàn)在是29頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義早期梅毒（一期、二期）經足量規(guī)則抗梅毒治療后一期梅毒1年后轉為陰性二期梅毒2年后轉為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應仍為陽性。非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征?，F(xiàn)在是30頁\一共有38頁\編輯于星期四非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點假陽性反應技術性假陽性反應一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應，經過重復試驗即可排除。生物學假陽性反應(一般滴度小1:8），應采用梅毒螺旋體抗原血清學試驗如TPPA等進行排除。現(xiàn)在是31頁\一共有38頁\編輯于星期四梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者終身陽性?，F(xiàn)在是32頁\一共有38頁\編輯于星期四梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光免疫分析法（CLIA）梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）現(xiàn)在是33頁\一共有38頁\編輯于星期四TPPATPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見的凝集反應，具有較高的敏感性和特異性