腫瘤超早期篩查在體檢中應(yīng)用10.6

癌癥分子解析preMiD技術(shù)在腫瘤早期篩查中的應(yīng)用案例分享總結(jié)主要內(nèi)容第一頁(yè)，共58頁(yè)。惡性腫瘤現(xiàn)狀?lèi)盒阅[瘤已成為人類(lèi)的“頭號(hào)殺手”。全球每年新發(fā)腫瘤>1400萬(wàn)人，死亡約820萬(wàn)人。預(yù)計(jì)2025年，因人口增加和老齡化等因素，每年新增超2000萬(wàn)病例?！?012年中國(guó)腫瘤登記年報(bào)”數(shù)據(jù)表明，中國(guó)每年新發(fā)腫瘤約310萬(wàn)人，死亡270萬(wàn)人（右上圖）。近60年來(lái)癌癥致死率沒(méi)有明顯下降（右下圖）。第二頁(yè)，共58頁(yè)。世衛(wèi)組織（WHO）：早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療“三早”是關(guān)鍵，“早發(fā)現(xiàn)”是根本!

目前還無(wú)法攻克癌癥（尤其是中晚期）；

癌癥可防、可治：

癌前階段：可實(shí)現(xiàn)近100%預(yù)防

早期癌癥：可以實(shí)現(xiàn)80%治愈率晚期癌癥：僅30%人活過(guò)5年。按照平均壽命74歲計(jì)算，人一生中患癌幾率是22%。從年齡看，45歲以后發(fā)病率上升明顯，應(yīng)在40歲開(kāi)始重視針對(duì)腫瘤的專(zhuān)項(xiàng)檢查。2014世界癌癥報(bào)告“抗擊癌癥，重在預(yù)防”第三頁(yè)，共58頁(yè)。癌癥的分子解析第四頁(yè)，共58頁(yè)。ICGC：癌癥基因組學(xué)研究國(guó)際癌癥基因組聯(lián)盟(InternationalCancerGenomeConsortium，ICGC)2014年2月4日公布超過(guò)1萬(wàn)個(gè)癌癥基因組的數(shù)據(jù)。

2013年12月5日ICGC宣布：在原來(lái)白血病、膀胱癌、胃癌的基礎(chǔ)上，中國(guó)又發(fā)起針對(duì)腸癌、食道癌、肝癌的驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)項(xiàng)目。

“眼下癌癥診治急需新的途徑。如果能更好地從基因組來(lái)了解癌癥，那么將更有利于癌癥的預(yù)防和控制。"

——TomHudson安大略癌癥研究所（OICR）所長(zhǎng)、ICGC創(chuàng)始人之一第五頁(yè)，共58頁(yè)。致癌突變（oncogenicmutations）到腫瘤形成需要10-20年；期間，涉及多基因的異常發(fā)生，具有早期性和特異性：（早期性：分子異常是癌癥發(fā)生的早期事件；特異性：分子異常是癌癥發(fā)生的特有標(biāo)記）癌變的分子事件AlfredG.Knudson,NatureRev.Cancer,

1,157-162(2001)CarloM.Croce,N.Engl.J.Med.

358,502-511(2008)第六頁(yè)，共58頁(yè)。第七頁(yè)，共58頁(yè)。原癌基因（Proto-oncogene）原癌基因是是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的高度保守的基因。原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時(shí)（此時(shí)轉(zhuǎn)化為癌基因），使細(xì)胞過(guò)度增殖。第八頁(yè)，共58頁(yè)。抑癌基因（TumorSuppressor）抑癌基因一般調(diào)控DNA的修復(fù)和細(xì)胞凋亡。在被激活情況下它們具有抑制細(xì)胞增殖作用。抑癌基因突變能導(dǎo)致活性降低或消失，從而減弱甚至消除抑癌作用。第九頁(yè)，共58頁(yè)。Sanger研究所：Cosmic數(shù)據(jù)庫(kù)EmerginglandscapeofoncogenicsignaturesacrosshumancancersNatureGenetics45,1127–1133(2013)腸癌中基因異常發(fā)生率GaoH.etal,CancerRes.,54,4342-4346(1994)MorganC.etal,Br.J.Cancer,89,,1314-1319(2003)第十頁(yè)，共58頁(yè)。

preMiD技術(shù)在腫瘤早期篩查中的應(yīng)用第十一頁(yè)，共58頁(yè)。傳統(tǒng)檢測(cè)突變檢測(cè)癌癥的“冰山學(xué)說(shuō)”早期癌癥幾乎沒(méi)有癥狀，極其容易被傳統(tǒng)檢測(cè)所忽視，一旦檢出，則大部分為中晚期。preMiD超早期防癌檢測(cè)，提前約3年預(yù)防發(fā)現(xiàn)潛伏體內(nèi)的癌癥或癌前病變。preMiD?超早期防癌檢測(cè)，提前臨床癥狀3-5年預(yù)警！第十二頁(yè)，共58頁(yè)。突變preMiD?技術(shù)檢測(cè)的是來(lái)自于腫瘤相關(guān)的原癌基因和抑癌基因的異常突變。第十三頁(yè)，共58頁(yè)?；蛲蛔冾?lèi)型如下：第十四頁(yè)，共58頁(yè)。血液循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）來(lái)源NatRevCancer.2011Jun;11(6):426-37ctDNA由癌變細(xì)胞死亡、凋亡或主動(dòng)分泌進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)cfDNA的長(zhǎng)度一般為100-500堿基，攜帶有癌癥細(xì)胞內(nèi)部所含異常信息，如突變、copy數(shù)變化、甲基化、融合基因及染色體異常等。血液中含有驅(qū)動(dòng)突變或致癌突變分子，意味身體內(nèi)有癌變細(xì)胞。

“ctDNA是最有希望發(fā)現(xiàn)早期癌癥”

——美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)LuisDiaz博士Free-floatingDNAfromtumorcouldprovideearlywarning！——USAtoday第十五頁(yè)，共58頁(yè)。分子癌變階段（8-10年）細(xì)胞癌變階段（3-5年）細(xì)胞簇形成組織形成早癌（1-3年）中晚期癌（？）1.不死2.無(wú)限增殖3.表型正常1.逃避免疫監(jiān)視2.形成新血管3.異性增生常規(guī)手段可以檢測(cè)preMiD可以第十六頁(yè)，共58頁(yè)。血漿突變檢測(cè)技術(shù)-preMiD挑戰(zhàn)血漿游離DNA含量極低突變DNA占比低于0.1%血漿成分復(fù)雜某些屏障存在………………應(yīng)對(duì)preMiD檢測(cè)基于PCR，擴(kuò)增DNA融合Blocker、偏向擴(kuò)增及熔點(diǎn)分析，極大提高靈敏度納米技術(shù)提高核酸萃取效率新技術(shù)平臺(tái)的融入第十七頁(yè)，共58頁(yè)。preMiD?

=Blocker+ASA+MCA突變偏向擴(kuò)增系統(tǒng)（ASA）PCR引物的3'端位必須和突變擴(kuò)增子匹配，而野生不匹配采用特異探針，實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)熔解曲線(xiàn)分析（MeltingCurveAnalysis）熒光vs溫度作圖得到DNA熔解曲線(xiàn)DNA溶解曲線(xiàn)是DNA序列的“指紋”核酸blocker阻滯野生擴(kuò)增設(shè)計(jì)野生匹配blocker（含PNA修飾）阻滯對(duì)野生片段擴(kuò)增三種已有技術(shù)的有機(jī)結(jié)合成preMiD，靈敏度達(dá)到0.01%，特異性近100%。第十八頁(yè)，共58頁(yè)。美國(guó)斯坦福癌癥研究院近30年調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)：癌前階段，癌癥是可逆性“工程”。消除突變，抑制癌變第十九頁(yè)，共58頁(yè)。正常DNADNA突變（腫瘤驅(qū)動(dòng)基因）DNA修復(fù)抑癌基因誘導(dǎo)凋亡免疫監(jiān)視失敗癌

干預(yù)（突變逆轉(zhuǎn)）第二十頁(yè)，共58頁(yè)。早發(fā)現(xiàn)與早預(yù)防突變篩查免疫力遠(yuǎn)離致癌物干預(yù)第二十一頁(yè)，共58頁(yè)。突變定量分析1.對(duì)于有基因突變的受檢者，同時(shí)加做突變定量值，便于后期干預(yù)有效性的對(duì)比；2.隨著樣本量的增加，跟蹤后續(xù)發(fā)展變化，將給出突變風(fēng)險(xiǎn)提示。突變值第二十二頁(yè)，共58頁(yè)。QRAM-qPCR相對(duì)定量檢測(cè)腫瘤特異突變位點(diǎn)在血漿中含量在干預(yù)前后的變化，判斷效果。干預(yù)有效性判斷

主要用途：

1.直觀(guān)反應(yīng)干預(yù)或治療方案的有效性，避免無(wú)效治療。 2.評(píng)估手術(shù)后患者基本狀態(tài)，如體內(nèi)有無(wú)殘留或轉(zhuǎn)移。 3.判斷有無(wú)復(fù)發(fā)。第二十三頁(yè)，共58頁(yè)。第二十四頁(yè)，共58頁(yè)。第二十五頁(yè)，共58頁(yè)。第二十六頁(yè)，共58頁(yè)。第二十七頁(yè)，共58頁(yè)。第二十八頁(yè)，共58頁(yè)。preMiD專(zhuān)業(yè)性

preMiD?德國(guó)標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)質(zhì)控體系國(guó)際公認(rèn)檢測(cè)內(nèi)容COSMIC數(shù)據(jù)庫(kù)，包含突變基因及位點(diǎn)信息，屬于國(guó)際最權(quán)威機(jī)構(gòu)最新研究成果。國(guó)家批準(zhǔn)專(zhuān)有檢測(cè)試劑美國(guó)Roche檢測(cè)儀器注冊(cè)號(hào):(進(jìn))字2009第3402689號(hào)第二十九頁(yè)，共58頁(yè)。preMiD?血漿突變技術(shù)驗(yàn)證：

NSCLC組織和血漿中EGFR突變一致性研究試驗(yàn)單位：北京協(xié)和醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院、江蘇省腫瘤醫(yī)院、青島大學(xué)附屬醫(yī)院

Sanger測(cè)序1212例非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織EGFR突變；

preMiD?法檢測(cè)對(duì)應(yīng)1212例血漿EGFR突變?？傮w結(jié)果：陽(yáng)性符合率為80.49%，陰性符合率為94.66%，總符合率為90.35%

（唯一完成臨床試驗(yàn)研究，血漿-組織突變一致性最高的結(jié)果）（已完成CFDA批準(zhǔn)臨床實(shí)驗(yàn)，2011年12月28號(hào)-2013年12月28號(hào)）第三十頁(yè)，共58頁(yè)。中國(guó)唯一入選國(guó)際腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)ASCO會(huì)議的主講報(bào)告第三十一頁(yè)，共58頁(yè)。中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)preMiD項(xiàng)目專(zhuān)家論證會(huì)第三十二頁(yè)，共58頁(yè)。ctDNA在國(guó)際上的應(yīng)用NDRG4,BMP3NDRG4,BMP3,KRAS總靈敏度：92%sensitivity早期腸癌靈敏度：94%特異性：87%ColonGuard（EXACT）第三十三頁(yè)，共58頁(yè)。ColonVantage(QUEST)ColoVantage檢測(cè)血漿中SEPTIN9的甲基化狀態(tài)，達(dá)到檢測(cè)和預(yù)警結(jié)直腸癌的目的。ColoVantage是一種無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)方法靈敏度達(dá)到70%特異性達(dá)到89%適用于各個(gè)分期的結(jié)直腸癌第三十四頁(yè)，共58頁(yè)。ctDNA在甲狀腺癌檢測(cè)中的應(yīng)用基因檢測(cè)對(duì)甲狀腺腫瘤診斷的準(zhǔn)確率在80%以上突變檢測(cè)能夠應(yīng)對(duì)病理檢測(cè)不能確定的情況NikiforovYEetal,JClinEndocrinolMetab.2011Nov;96(11):3390-7第三十五頁(yè)，共58頁(yè)。案例分享第三十六頁(yè)，共58頁(yè)。preMiD檢測(cè)：FLT3突變案例一：FLT3基因突變，2年半后診斷大腸癌中晚期個(gè)人不相信，不愿面對(duì)，沒(méi)有采取必要干預(yù)措施第三十七頁(yè)，共58頁(yè)。案例二：KRAS突變檢測(cè)者：男性，35歲，重慶人家族史：其父患肺癌進(jìn)行preMiD檢測(cè)：KRAS基因突變第三十八頁(yè)，共58頁(yè)。KRAS突變報(bào)告解讀：結(jié)合健康問(wèn)卷及專(zhuān)家咨詢(xún)其父患肺癌作息紊亂干咳、胸悶近期沒(méi)有體檢資料結(jié)合該情況給出建議：進(jìn)行胸部增強(qiáng)CT檢查，判斷突變?cè)谀膫€(gè)階段（臨床前期或臨床階段）第三十九頁(yè)，共58頁(yè)。KRAS突變2014年5月8日右肺下葉斜裂旁小結(jié)節(jié)影肝左葉多發(fā)小囊腫第四十頁(yè)，共58頁(yè)。KRAS突變—干預(yù)方案匹多莫德口服液服用方法：1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用）3個(gè)月為一周期第四十一頁(yè)，共58頁(yè)。KRAS突變--跟蹤隨訪(fǎng)2014年9月9日胸部CT增強(qiáng)未發(fā)現(xiàn)腫瘤第四十二頁(yè)，共58頁(yè)。干預(yù)后4個(gè)月進(jìn)行突變復(fù)查及突變定量分析：復(fù)查結(jié)果，基因仍有突變，并對(duì)再次突變情況進(jìn)行與第一次的定量值分析，突變較之前下降。KRAS突變--復(fù)查及定量第四十三頁(yè)，共58頁(yè)。案例三：THR-α基因突變檢測(cè)者：男性，41歲，南京人進(jìn)行preMiD檢測(cè)：THR-α基因突變第四十四頁(yè)，共58頁(yè)。THR-α基因突變報(bào)告解讀：結(jié)合健康專(zhuān)家咨詢(xún)作息紊亂20年吸煙史，每日1包近期沒(méi)有體檢資料第四十五頁(yè)，共58頁(yè)。THR-α基因突變右頸部、頜下多發(fā)小淋巴結(jié)，部分淋巴結(jié)FDG代謝增高；甲狀腺瘤可能第四十六頁(yè)，共58頁(yè)。THR-α基因突變--干預(yù)方案胸腺肽a1方法：1支（1.6mg）/次，1次/周，皮下注射3個(gè)月為一周期第四十七頁(yè)，共58頁(yè)。干預(yù)后3個(gè)月進(jìn)行突變復(fù)查及突變定量分析：復(fù)查結(jié)果：突變消失。THR-α基因突變--干預(yù)方案第四十八頁(yè)，共58頁(yè)。病理：肺腺癌案例四：EGFR突變確診6mm早癌檢測(cè)者男性，62歲，無(wú)錫人士，某醫(yī)院院長(zhǎng)，體檢發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)有6mm孤立影，不能確定其性質(zhì)，經(jīng)preMiD?檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EGFR突變。該檢測(cè)者在上海肺科醫(yī)院行胸腔鏡手術(shù)，取出病理為肺腺癌。第四十九頁(yè)，共58頁(yè)。案例五：FHIT突變確診胃癌晚期檢測(cè)者男性，62歲，機(jī)關(guān)干部，既往慢性胃病史，平時(shí)喜食蒜泥等刺激食物。經(jīng)preMiD?檢測(cè)：FHIT突變，后追加蛋白標(biāo)志物FMD1值異常升高。建議進(jìn)一步胃鏡檢查，結(jié)果為低分化腺癌晚期，對(duì)化療均不敏感。病理：低分化腺癌第五十頁(yè)，共58頁(yè)。案例六：宮頸癌復(fù)發(fā)監(jiān)控案例檢測(cè)者女性，29歲，2012年12月確診宮頸癌，術(shù)后、放、化療后。2013年5月經(jīng)perMiD檢測(cè)發(fā)現(xiàn)FHIT-exon8位點(diǎn)和HLA-A-c.835C>T位點(diǎn)有突變，確診為術(shù)后復(fù)發(fā)。第五十一頁(yè)，共58頁(yè)。案例七：鑒別：前列腺癌or前列腺增生（BPH）？PSA>700,前列腺癌？！PSA=25，BPH？第五十二頁(yè)，共58頁(yè)?？偨Y(jié)第五十三頁(yè)，共58頁(yè)。preMiD檢測(cè)原理突變preMiD