自身免疫性疾病免疫學(xué)檢驗(yàn)

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概述

1自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢查

2自身抗體的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)選擇的原則

3小結(jié)4第一頁(yè)，共49頁(yè)。自身耐受(self-tolerance)：正常情況下，免疫系統(tǒng)對(duì)宿主自身的組織和細(xì)胞不產(chǎn)生免疫應(yīng)答。自身免疫

(autoimmunity)：當(dāng)某種原因使自身耐受

性破壞時(shí)，免疫系統(tǒng)就會(huì)對(duì)自身組織成分、細(xì)胞成分及其產(chǎn)物發(fā)生免疫應(yīng)答。第一節(jié)概述第二頁(yè)，共49頁(yè)。自身免疫病(autoimmunedisease,AID)：是自身免疫應(yīng)答過強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過久，表現(xiàn)為質(zhì)和量的異常，所產(chǎn)生的自身抗體和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞對(duì)表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動(dòng)攻擊，導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙，并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀。第三頁(yè)，共49頁(yè)。一、自身免疫病與風(fēng)濕性疾病風(fēng)濕性疾?。╮heumaticdiseases）泛指影響骨、關(guān)節(jié)及周圍軟組織等一組疾病，簡(jiǎn)稱風(fēng)濕病。第四頁(yè)，共49頁(yè)。結(jié)締組織病(connectivetissuedisease,CTD)

是指病變主要發(fā)生于結(jié)締組織，有組織黏液樣水腫、纖維蛋白樣變性及壞死性血管炎等基本病理變化的一組疾病。以往所指的結(jié)締組織病或膠原病是風(fēng)濕性疾病的一部分，它們和風(fēng)濕性疾病不可完全等同。

第五頁(yè)，共49頁(yè)。1.發(fā)生與感染、遺傳、性激素等因素有關(guān)，屬AID；2.結(jié)締組織及血管的慢性炎癥為其基本病理變化；3.病變可累及多系統(tǒng)、多器官；發(fā)病情況差異大，為異質(zhì)性疾病；5.以關(guān)節(jié)、肌肉、軟組織等疼痛為主要癥狀；6.血清中可查出多種自身抗體；7.對(duì)糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑藥物治療有療效；8.病程慢性、反復(fù)、進(jìn)行性，最終可導(dǎo)致殘疾或死亡。風(fēng)濕病的臨床特點(diǎn)第六頁(yè)，共49頁(yè)。二、自身免疫病的共同特征血中測(cè)到高效價(jià)的自身抗體/自身應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞自身抗體/自身應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞作用于表達(dá)自身抗原的組織細(xì)胞，造成其損傷或功能障礙動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可復(fù)制與AID相似的動(dòng)物模型，并能通過血清或致敏的淋巴細(xì)胞可使疾病被動(dòng)轉(zhuǎn)移大多數(shù)自身免疫病是自發(fā)性或特發(fā)性的，外因可有一定影響

，病情的轉(zhuǎn)歸與自身免疫應(yīng)答強(qiáng)度相關(guān)有遺傳傾向，反復(fù)發(fā)作和慢性遷延，部分自身免疫性疾病易發(fā)于女性，應(yīng)用免疫抑制劑治療有效

第七頁(yè)，共49頁(yè)。三、自身免疫病的分類按自身抗原分類

器官特異性自身免疫性疾病器官非特異性自身免疫性疾病患者的病變常局限于某一特定的器官，由對(duì)器官的特異性抗原的免疫應(yīng)答引起全身性或系統(tǒng)性自身免疫性疾??；患者的病變可見于多種器官及結(jié)締組織（結(jié)締組織病或膠原病）第八頁(yè)，共49頁(yè)。器官特異性病名自身抗原橋本甲狀腺炎甲狀腺球蛋白和甲狀腺微粒體甲狀腺功能亢進(jìn)(Graves病)TSH受體Addison病腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞自身免疫性萎縮性胃炎胃壁細(xì)胞、內(nèi)因子潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸黏膜細(xì)胞重癥肌無力乙酰膽堿受體交感性眼炎眼晶狀體蛋白胰島素依賴型糖尿病胰島β細(xì)胞胰島素抵抗型糖尿病胰島素受體原發(fā)性膽汁性肝硬化小膽管上皮細(xì)胞第九頁(yè)，共49頁(yè)。器官非特異性病名自身抗原系統(tǒng)性紅斑狼瘡細(xì)胞核成分、細(xì)胞漿成分類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎變性IgG、類風(fēng)濕相關(guān)的核抗原干燥綜合征涎腺上皮細(xì)胞混合性結(jié)締組織病細(xì)胞核(RNP)自身免疫性溶血性貧血紅細(xì)胞特發(fā)性血小板減少性紫癜血小板特發(fā)性白細(xì)胞減少癥白細(xì)胞硬皮病細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞核染色體著絲點(diǎn)多發(fā)性肌炎細(xì)胞核蛋白第十頁(yè)，共49頁(yè)。器官特異性和器官非特異性的特征性區(qū)別器官特異性器官非特異性自身抗體和病變具器官特異性自身抗體和病變無器官特異性極少量自身抗原與淋巴樣系統(tǒng)接觸大量自身抗原進(jìn)入免疫系統(tǒng)實(shí)質(zhì)病變可能由Ⅳ變態(tài)反應(yīng)或自身抗體所致病變由抗原抗體復(fù)合物所致治療原則為控制代謝缺陷治療原則為抑制炎癥和抗體形成有發(fā)生器官內(nèi)癌癥的傾向有發(fā)生淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤的傾向抗原與弗氏佐劑共同免疫動(dòng)物可誘導(dǎo)產(chǎn)生器官特異性抗體動(dòng)物被刺激后不產(chǎn)生抗體第十一頁(yè)，共49頁(yè)。分類疾病結(jié)締組織系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、混合性結(jié)締組織病內(nèi)分泌系統(tǒng)橋本甲狀腺炎、Graves病、Addison病、胰島素依賴性糖尿病消化系統(tǒng)萎縮性胃炎、潰瘍性胃炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化血液系統(tǒng)惡性貧血、自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜心血管系統(tǒng)風(fēng)濕性心肌炎泌尿系統(tǒng)腎小球腎炎呼吸系統(tǒng)特發(fā)性肺纖維化神經(jīng)系統(tǒng)重癥肌無力、多發(fā)性神經(jīng)炎皮膚蕁麻疹按發(fā)病部位的解剖系統(tǒng)分類第十二頁(yè)，共49頁(yè)。第十三頁(yè)，共49頁(yè)。（一）自身抗原形成分子模擬四、自身免疫病的發(fā)病機(jī)制隱蔽抗原的釋放自身抗原改變第十四頁(yè)，共49頁(yè)。多克隆激活（二）免疫系統(tǒng)發(fā)育和免疫調(diào)節(jié)異常胸腺骨髓功能異常Th1和Th2細(xì)胞功能失衡第十五頁(yè)，共49頁(yè)。（三）遺傳因素第十六頁(yè)，共49頁(yè)。1.自身抗體的作用

（四）AID的病理?yè)p傷機(jī)制抗血細(xì)胞表面抗原的抗體第十七頁(yè)，共49頁(yè)。1.自身抗體的作用——抗細(xì)胞表面受體抗體

重癥肌無力第十八頁(yè)，共49頁(yè)?？辜?xì)胞表面受體抗體毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves?。┌l(fā)病機(jī)制示意圖第十九頁(yè)，共49頁(yè)。自身抗體——抗核抗體腎小球、關(guān)節(jié)、皮膚和其它多種器官的毛細(xì)血管壁結(jié)合循環(huán)中的核抗原多部位脈管炎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡形成可溶性抗原—抗體IC反復(fù)沉積1.自身抗體的作用：

自身抗體與相應(yīng)抗原形成的免疫復(fù)合物第二十頁(yè)，共49頁(yè)。2.自身應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞作用針對(duì)自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答的T細(xì)胞可引起組織損傷，這類疾病屬于Ⅳ型超敏反應(yīng)引起的疾病。

3.巨嗜細(xì)胞和NK細(xì)胞的作用巨噬細(xì)胞在AID的組織損傷中也起重要作用。巨噬細(xì)胞被細(xì)胞因子激活后，就具有細(xì)胞毒作用。

（四）AID的病理?yè)p傷機(jī)制返回章目錄第二十一頁(yè)，共49頁(yè)?？购丝贵w（antinuclearantibody，ANA):是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱；在某些因素作用下改變細(xì)胞核某些成分性質(zhì)，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體；第二節(jié)自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢查一、抗核抗體測(cè)定第二十二頁(yè)，共49頁(yè)。ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA無器官特異性和種屬特異性；ANA主要存在于血清中；將檢出ANA作為AID存在的依據(jù)。第二十三頁(yè)，共49頁(yè)。

抗DNA抗體：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等抗組蛋白抗體(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、抗H3、抗H4抗體等

抗非組蛋白抗體：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗體、

AnuA、抗DNP、抗D’E多肽抗體、抗DM53抗體抗RANA抗體、抗著絲點(diǎn)、抗Ku抗體等

抗核仁抗體：抗PM-Scl抗體、抗Th/To抗體、抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗體等（一）ANA的類型和臨床意義

ANA譜第二十四頁(yè)，共49頁(yè)。①抗天然DNA(nativeDNA,nDNA)抗體，又稱抗雙鏈DNA(doublestrandedDNA,dsDNA)抗體。②抗變性DNA(denaturedDNA,dDNA)

抗體，又稱抗單鏈DNA(singlestrandedDNA,ssDNA)抗體。對(duì)SLE有高特異性;SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。緩解期降低70%～90%SLE活動(dòng)期增高藥物療效抗dsDNA抗體抗DNA抗體第二十五頁(yè)，共49頁(yè)。

抗組蛋白抗體（anti-histonicantibody,AHA）：由H1、H2A、H2B、H3和H4五個(gè)亞單位，各自都有特異性抗體；AHA檢出百分率抗dsDNA507090100藥物誘導(dǎo)性狼瘡只能檢出此SLEAHAAHA抗組蛋白抗體第二十六頁(yè)，共49頁(yè)。

可提取性核抗原(extractablenuclearantigen,ENA)是鹽水可提取性核抗原的總稱，是非組蛋白的核蛋白，屬酸性核蛋白抗原，由許多小分子量的RNA和多肽組成?？笶NA抗體第二十七頁(yè)，共49頁(yè)。對(duì)風(fēng)濕病有特異診斷價(jià)值的有以下七種：

①抗nRNP(nuclearRNP,nRNP)抗體；②抗Sm抗體；③抗SSA抗體；④抗SSB抗體；

⑤抗Scl-70抗體；⑥抗Jo-1抗體；

⑦抗核糖體抗體。第二十八頁(yè)，共49頁(yè)?？笵NP抗體（抗核蛋白抗體）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和蛋白質(zhì)組成。DNP抗原有不溶性和可溶性兩種，可分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。檢出百分率抗DNP20406080SLE非活動(dòng)期

SLE活動(dòng)期抗不溶性DNP抗體抗DNP抗DNP100RA滑膜液中抗DNP抗可溶性DNP抗體抗DNP抗體第二十九頁(yè)，共49頁(yè)。

抗核小體抗體（anti-nucleosomeantibody，AnuA)是細(xì)胞核染色質(zhì)的基本單位;細(xì)胞凋亡而致核小體大量蓄積，誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生的AnuA是SLE特異性的標(biāo)志抗體?？筪sDNA抗體抗核小體抗體抗dsDNA和抗Sm陰性的SLE陽(yáng)性率為60%～80%，特異性＞97%?？购诵◇w抗體第三十頁(yè)，共49頁(yè)。常見AID的ANA陽(yáng)性檢出率疾病ANA（%）疾病ANA（%）SLE≥95SS70～80MCTD≥95PM/DM30PSS85～95RA20～30第三十一頁(yè)，共49頁(yè)。（二）ANA的檢測(cè)方法

將患者血清先進(jìn)行稀釋，可以做定量試驗(yàn)，在1:80稀釋仍呈陽(yáng)性時(shí)，對(duì)SLE的診斷有較大的參考價(jià)值。形成胞核基質(zhì)—ANA—抗人Ig·FITC1.熒光免疫法第三十二頁(yè)，共49頁(yè)?？购丝贵w核型與相關(guān)疾病核型熒光圖形抗體相關(guān)疾病周邊型核周環(huán)狀熒光抗dsDNASLE、慢活肝炎均質(zhì)型核呈均質(zhì)熒光抗DNA、AHA、AnuASLE、RA、PSS、慢性肝病斑點(diǎn)型核內(nèi)顆粒狀熒光抗ENAMCTD、SLE、PSS、SS、PM核仁型核仁有熒光抗核仁抗體PSS、雷諾現(xiàn)象、SLE著絲點(diǎn)型核漿細(xì)小相同顆粒熒光抗著絲點(diǎn)PSS、CREST綜合征第三十三頁(yè)，共49頁(yè)。均質(zhì)型抗核抗體核型著絲點(diǎn)型核仁型斑點(diǎn)型第三十四頁(yè)，共49頁(yè)。例：間接免疫熒光法（IIF法）測(cè)定抗dsDNA抗體短膜蟲的動(dòng)基體內(nèi)含有大量純的dsDNA，無其他抗原干擾，可用作基質(zhì)來測(cè)定抗dsDNA抗體。短膜蟲替換小鼠肝切片或肝印片或

Hep2，制成抗原基質(zhì)—抗dsDNA—抗人IgG·FITC,

陽(yáng)性結(jié)果可見鞭毛一端的動(dòng)基體顯示清晰的熒光。測(cè)定抗dsDNA抗體具有特異性強(qiáng)、敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。第三十五頁(yè)，共49頁(yè)。用ELISA間接法檢測(cè)抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體和抗核小體抗體。2.ELISA法第三十六頁(yè)，共49頁(yè)。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳待檢血清按分子大小分開不同區(qū)帶

分離轉(zhuǎn)印NC膜上抗ENA與膜上相應(yīng)抗原帶結(jié)合抗人IgG·HRPNC—ENA—抗ENA—抗人IgG·HRP—顯色3.IBT法第三十七頁(yè)，共49頁(yè)。類風(fēng)濕因子(rheumatoidfactor,RF):

是抗變性IgG的自身抗體，為19S的IgM，也可見7S的IgG和IgA。與人變性IgG結(jié)合，不與正常IgG發(fā)生凝集反應(yīng)。RF出現(xiàn)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者中，約70%～90%的血清中和約60%的滑膜液中可檢出IgG類RF；二、類風(fēng)濕因子測(cè)定第三十八頁(yè)，共49頁(yè)。IgG類抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，即發(fā)生變性；在炎癥過程中也可發(fā)生IgG變性，構(gòu)成自身抗原，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生各種抗IgG抗體；滑膜液中的IgG類RF與變性IgG結(jié)合形成中等大小的IC，比血清中IgM類RF更易致病。第三十九頁(yè)，共49頁(yè)。（一）RF檢測(cè)方法1

RF檢測(cè)最常采用的試驗(yàn)方法。

將IgG吸附在聚苯乙烯膠乳顆粒上作為診斷試劑，與待檢血清中的RF結(jié)合，出現(xiàn)膠乳凝集顆粒。但此法的靈敏度和特異性均不高，而且只能檢出血清中的IgM類RF。間接膠乳凝集試驗(yàn)第四十頁(yè)，共49頁(yè)。2將待檢血清稀釋成一定濃度，再加入定量變性IgG診斷試劑，立即用透射比濁或速率散射比濁儀測(cè)定血清中的RF。此法具有速度快、敏感性高（達(dá)ng/L水平）、精密度高（CV<5%）、穩(wěn)定性好、能定量分析的優(yōu)點(diǎn)，但仍局限在IgM類RF的檢測(cè)。

免疫比濁法第四十一頁(yè)，共49頁(yè)。3IgM、IgG和IgA類RF需要用RIA法或ELISA法等方法檢測(cè)，但前者有放射性污染，故臨床上多采用ELISA間接法或雙抗原夾心法進(jìn)行測(cè)定。ELISA法第四十二頁(yè)，共49頁(yè)。（二）臨床應(yīng)用常見AID的RF陽(yáng)性檢出率疾病RF（%）疾病RF（%）干燥綜合征95結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎50類風(fēng)濕70～90系統(tǒng)性紅斑狼瘡30硬皮病/皮肌炎80混合性結(jié)締組織病25RF在診斷RA患者時(shí)并非特異的，也非唯一標(biāo)準(zhǔn)。慢性活動(dòng)性肝炎及老年人均可有不同程度的陽(yáng)性率。第四十三頁(yè)，共49頁(yè)。三、其他自身抗體測(cè)定自身抗體的類型、檢測(cè)方法及臨床意義自身抗體類型檢測(cè)方法臨床意義抗甲狀腺球蛋白抗體(A-TG)熒光免疫法、ELISA、RIA橋本甲狀腺炎抗甲狀腺過氧化物酶抗體,)ELISAGraves病,橋本甲狀腺炎抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)ELISA、RIA重癥肌無力抗平滑肌抗體(SMA)熒光免疫法、ELISA、RIA自身免疫性肝炎,慢性活動(dòng)性肝炎,原發(fā)性膽汁性肝硬化抗線粒體抗體(AMA)熒光免疫法、ELISA、RIARA,SS,SLE,原發(fā)性膽汁性肝硬化,慢性活動(dòng)性肝炎,持續(xù)性肝阻塞抗胃壁細(xì)胞抗體熒光免疫法惡性貧血抗胰島素抗體（IAA）ELISA胰島素依賴性糖尿病抗精子抗體（AsAb）ELISA、熒光免疫法不育癥,不孕癥抗紅細(xì)胞抗體直接凝集試驗(yàn)、Coombs試驗(yàn)新生兒溶血,自身免疫性溶血性貧血抗血小板抗體ELISA法、ABC-ELISA法原發(fā)性血小板減少性紫癜、輸血史抗心磷脂抗體（ACA）RIA、ELISASLE,血栓,自發(fā)性流產(chǎn),血小板減少抗腎小球基底膜抗體(GBM-Ab)熒光免疫法Goodpasture綜合征,狼瘡腎炎返回章目錄第四十四頁(yè)，共49頁(yè)。1.篩選試