農(nóng)藥殘留量測定法

農(nóng)藥殘留量測定法本方法系用氣相色譜法（附錄9）和質(zhì)譜法（附錄51）測定藥材、飲片及制劑中部分農(nóng)藥殘留量。除另有規(guī)定外，按下列方法測定。第一法、有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法-色譜法1、9種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以（14%-氰丙基-苯基）甲基聚硅氧烷或（5%苯基）甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mmX0.25um）,63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度230°C，檢測器溫度300C，不分流進(jìn)樣。程序升溫:初始100C,每分鐘10C升至220C,每分鐘8C：升至250C,保持10分鐘。理論板數(shù)按a-BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1X106，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取六六六（BHC）（a-BHC，0-BHC，y-BHC，決BHC）、滴滴涕（DDT）（PP'-DDE，PP'-DDD，OP'-DDT，PP'-DDT）及五氯硝基苯（PCNB）農(nóng)藥對(duì)照品適量，用石油醚（60?90C）分別制成每1ml約含4~5pg的溶液，即得?；旌蠈?duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚（60?90C）稀釋至刻度，搖勻，即得。混合對(duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用石油醚（60?90C）制成每1L分別含0卩g、1yg、5卩g、10卩g、50卩g、100卩g、250pg的溶液，即得。供試品溶液的制備藥材和飲片取供試品于60C干燥4小時(shí)，粉碎成細(xì)粉，取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30ml，稱定重量，超聲處理15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置（使分層），將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml,于40°C水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60?90°C）如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60?90C）溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚（60?90°C）精密稀釋至5ml,小心加入硫酸1ml，振搖1分鐘，離心（3000轉(zhuǎn)/分）10分鐘，精密量取上清液2ml，置具刻度的濃縮瓶中（見圖）,連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40C下（或用氮?dú)猓⑷芤簼饪s至適量，精密稀釋至1ml,即得。制劑取供試品，研成細(xì)粉（蜜丸切碎，液體直接量?。芊Q取適量（相當(dāng)于藥材2g），以下按上述供試品溶液制備法制備，即得供試品溶液。測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1山，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。2、22種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分析柱：以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mmX0.25卩m）,驗(yàn)證柱：以100%二甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mmX0.25pm），63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度240C,檢測器溫度300C,不分流進(jìn)樣，流速為恒壓模式（初始流速為1.3ml/min）。程序升溫：初始70C，保持1分鐘，每分鐘10C升至180C,保持5分鐘，再以每分鐘5°C升至220C,最后以每分鐘100C升至280C,保持8分鐘。理論板數(shù)按aBHC計(jì)算應(yīng)不低于1X106,兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備精密稱取表1中農(nóng)藥對(duì)照品適量，用異辛烷分別制成如表1中濃度，即得。混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備精密量取上述對(duì)照品貯備溶液各lml,置100ml量瓶中，用異辛烷稀釋至刻度，搖勻，即得。混合對(duì)照品溶液的制備分別精密量取上述混合對(duì)照品貯備溶液，用異辛烷制成每1L分別含10朋、20卩g、50卩g、100yg、200卩g、500yg的溶液，即得（其中0-六六六、異狄氏劑、p,p'-滴滴滴、o,p'-滴滴涕每1L分別含20卩g、40yg、100yg、200yg、400yg、1000yg）。供試品溶液的制備取供試品，粉碎成粉末（過三號(hào)篩），取約1.5g，精密稱定，置于50ml聚苯乙烯具塞離心管中，加入水10ml,混勻，放置2小時(shí)，精密加人乙腈15ml，劇烈振搖提取1分鐘，再加入預(yù)先稱好的無水硫酸鎂4g與氯化鈉lg的混合粉末，再次劇烈振搖1分鐘后，離心（4000轉(zhuǎn)/分鐘）1分鐘。精密吸取上清液10ml，40°C減壓濃縮至近干，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1:1）混合溶液分次轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加環(huán)己烷-乙酸乙酯（1:1）混合溶液至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至預(yù)先加入lg無水硫酸鈉的離心管中，振搖，放置1小時(shí)，離心（必要時(shí)濾過），取上清液5ml過凝膠滲透色譜柱（400mmX25mm，內(nèi)裝BIOBeadsS-X3填料；以環(huán)己烷-乙酸乙酯（1:1）混合溶液為流動(dòng)相；流速為每分鐘5.0ml）凈化，收集18?30分鐘的洗脫液，于40°C水浴減壓濃縮至近干，加少量正己烷替換兩次，加正己烷lml使溶解，轉(zhuǎn)移至弗羅里硅土固相萃取小柱［1000mg/6ml,用正己烷-丙酮（95:5）混合溶液10ml和正己烷10ml預(yù)洗］上，殘?jiān)谜和橄礈?次，每次lml，洗液轉(zhuǎn)移至同一弗羅里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷丙酮（95:5）混合溶液10ml洗脫，收集全部洗脫液，置氮吹儀上吹至近干，加異辛烷定容至lml，渦旋使溶解，即得。測定法別精密吸取供試品溶液和混合對(duì)照品溶液各lul，注入氣相色譜儀，按外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品中22種有機(jī)氣農(nóng)藥殘留量。限度除另有規(guī)定外，每lkg中藥材或飲片中含總六六六（a-BHC,0-BHC，Y-BHC,8-BHC之和)不得過0.2mg；總滴滴涕(p,p'-DDE,p,p'-DDD,o,p'-DDT,p,p'-DDT之和)不得過0.2mg；五氯硝基苯(Quintozene)不得過O.lmg；六氯苯(Hexachlorobenzene)不得過O.lmg；七氯(Heptachlor)、順式環(huán)氧七氯(Heptachlor-exo-epoxide)和反式環(huán)氧七氯(Heptachlor-endo-epoxide)之和不得過0.05mg;艾氏劑(Aldin)和狄氏劑(Dieldrin)之和不得過0.05mg；異狄氏劑(Endrin)不得過0.05mg;順式氯丹(Chlordane)、反式氯丹(trans-Chlordane)和氧化氣丹(oxy-Chlordane)之和不得過0.05mg;a-硫丹(a-Endosulfan)、0-硫丹/-Endosulfan)和硫丹硫酸鹽(Endosulfansulfate)之和不得過3mg?！靖阶ⅰ?l)當(dāng)供試品中有農(nóng)藥檢出時(shí),可在驗(yàn)證柱中確認(rèn)檢出的結(jié)果,再進(jìn)行定量。必要時(shí),可用氣相色譜一質(zhì)譜法進(jìn)行確證。(2)加樣回收率應(yīng)在70%?120%之間。表122種有機(jī)氯類農(nóng)藥對(duì)照品貯備液濃度、相對(duì)保留時(shí)間及檢出限參考值相對(duì)保對(duì)照品 檢出限留時(shí)間序號(hào) 中文名英文名 儲(chǔ)備液 (mg/kg(分析(ug/ml) )柱)1六氯苯、?、?、.Hexachlorobenzene1000.5740.0012a-八八八a-BHC1000.6010.0043五氯硝基苯Quintozene1000.6450.0074Y-八八八n、、、Y-BHC1000.6670.0035卩-八八八卩-BHC2000.7050.0086七氯Heptachlor1000.7130.007檢驗(yàn)操作附錄—5—70-BHC1000.7500.0030-八八八8艾氏劑Aldrin1000.7600.0069氧化氯丹Oxy-Chlordane1000.8160.007順式環(huán)氧七Heptachlor-exo-epoxi10氯de1000.8330.006反式環(huán)氧七Heptachlor-endo-epox11氯ide1000.8440.00512反式氯丹trans-Chlordane1000.8540.00513順式氯丹cis-Chlordane1000.8670.00814a-硫丹a-Endosulfan1000.8720.0115p,p'-滴滴伊p,p'-DDE1000.8920.00616狄氏劑Dieldrin1000.9010.00517異狄氏劑Endrin2000.9320.00918o,p'-滴滴涕o,p'-DDT2000.9380.01819p,p'-滴滴滴p,p'-DDD1000.9440.00820卩-硫丹卩-Endosulfan1000.9560.00321p,p'-滴滴涕p,p'-DDT1000.9700.00522硫丹硫酸鹽Endosulfansulfate1001.0000.004注：各對(duì)照品的相對(duì)保留時(shí)間以硫丹硫酸鹽為參照峰計(jì)算。3、2種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分析柱：以鍵合交聯(lián)14%氰丙基苯基二甲基硅氧烷為固定液(DM1701或同類型)的毛細(xì)管柱(30mx0.32mmx0.25ym),驗(yàn)證柱：以鍵合交聯(lián)5%苯基甲基硅氧烷為固定液(DB5或同類型)的毛細(xì)管柱(30mx0.32mmx0.25ym)；63Ni-ECD電子捕獲檢測器；進(jìn)樣口溫度230°C，檢測器溫度300°C，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始溫度60°C，保持0.3分鐘，以每分鐘60C升至170C，再以每分鐘10C升至220C，保持10分鐘，再以每分鐘1°C升至240C，每分鐘15°C升至280C，保持5分鐘。理論板數(shù)按a-BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1x105,兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5?；旌蠈?duì)照品儲(chǔ)備液的制備分別精密稱取六六六（a-BHC、卩-BHC、y-BHC、6-BHC）、滴滴涕（pp'-DDE、pp'-DDD、op'-DDT、pp'-DDT）、五氯硝基苯、六氯苯、七氯（七氯、環(huán)氧七氯）、艾氏劑、氯丹（順式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹）農(nóng)藥對(duì)照品適量，用正己烷溶解分別制成每lml約含100建的溶液。精密量取上述對(duì)照品溶液各lml，置同一100ml量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻；或精密量取有機(jī)氯農(nóng)藥混和對(duì)照品溶液lml，置10ml量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，即得（每1ml含各農(nóng)藥對(duì)照品1建）?；旌蠈?duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用正己烷制成每1ml分別含1ng、2ng、5ng、10ng、20ng、50ng、100ng的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品，粉碎成細(xì)粉（過二號(hào)篩），取約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水30ml，振搖10分鐘，精密加丙酮50ml，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約8g，精密加二氯甲烷25ml，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，振搖使氯化鈉充分溶解，靜置，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）3分鐘，使完全分層，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至裝有適量無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30分鐘。精密量取15ml，置40C水浴中減壓濃縮至約1ml，加正己烷約5ml，減壓濃縮至近干，用正己烷溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至離心管中，緩緩加入硫酸溶液（9-10）1ml，振搖1分鐘，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）10分鐘，分取上清液，加水1ml，振搖，取上清液，即得。測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各山1,注入氣相色譜儀，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。本品中含總六六六（a-BHC、B-BHC、Y-BHC、6-BHC之和）不得過0.2mg/kg；總滴滴涕（pp'-DDE、pp'-DDD、op'-DDT、pp'-DDT之和）不得過0.2mg/kg；五氯硝基苯不得過0.1mg/kg；六氯苯不得過0.1mg/kg；七氯（七氯、環(huán)氧七氯之和）不得過0.05mg/kg；艾氏劑不得過0.05mg/kg；氯丹（順式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹之和）不得過0.1mg/kg。第二法有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量測定法-色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷或（5%苯基）甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.25mmX0.25um），氮磷檢測器（NPD）或火焰光度檢測器（FPD）。進(jìn)樣口溫度220°C，檢測器溫度300°C，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始120C,每分鐘10C，升至200C，每分鐘5°C升至240C；，保持2分鐘，每分鐘20C:升至270C，保持0.5分鐘。理論板數(shù)按敵敢畏峰計(jì)算應(yīng)不低于6000，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪磷、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對(duì)照品適量，用乙酸乙酯分別制成每lml約含l00pg的溶液，即得。混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液lml，置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。?；旌蠈?duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品貯備溶液，用乙酸乙酯制成每lml含0.1卩g、0.5卩g、lyg、2卩g、5pg的濃度系列，即得。供試品溶液的制備藥材和飲片取供試品，粉碎成粉末（過三號(hào)篩），取約5g，精密稱定，加無水硫酸鈉5g，加入乙酸乙酯50~100ml，冰浴超聲處理3分鐘，放置，取上層液濾過，藥渣加入乙酸乙酯30?50m1,冰浴超聲處理2分鐘，放置，濾過，合并兩次濾液，用少量乙酸乙釀洗滌濾紙及殘?jiān)c上述濾液合并。取濾液于40°C以下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度；精密吸取上述溶液lml，置石墨化炭小柱（250mg/3m1用乙酸乙酯5ml預(yù)洗）上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）混合溶液5ml洗脫，收集洗脫液，置氮吹儀上濃縮至近干，加乙酸乙酯定容至lml，渦旋使溶解，即得。測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各山，注人氣相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中12種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量。第三法擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定法-色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以（5%苯基）甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱（30mx0.32mmx0.25卩m），63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度270C，檢測器溫度330C。不分流進(jìn)樣（或根據(jù)儀器設(shè)置最佳的分流比）。程序升溫：初始160C，保持1分鐘，每分鐘10C升至278C,保持0.5分鐘，每分鐘1C升至290C，保持5分鐘。理論板數(shù)按溴氰菊酯峰計(jì)算應(yīng)不低于105,兩個(gè)相鄰