一測多評法同時測定補骨脂主要化學(xué)成分

一測多評法同時測定補骨脂主要化學(xué)成分中藥補骨脂,為豆科植物補骨脂(PsoraleacorylifoliaL.)干燥成熟果實。其性溫、味辛,具有補腎助陽,溫中止瀉,納氣平喘之功。其中主要活性成分補骨脂素(psoralen)和異補骨脂素(isopsoralen)等香豆素類成分,具有較強的光敏化作用和鎮(zhèn)靜、解痙、止血等作用[1-2],是治療白癜風(fēng)、斑禿、牛皮癬以及瘤樣皮膚病的有效藥物。近來研究表明,補骨脂素對多種動物及人的腫瘤生長有明顯抑制作用[3-4]。1實驗方法1.1色譜條件色譜柱:Purospher○RSTARLPRP-18endcapped(250mm×4.6mm,5μm);流動相為乙腈-水,梯度洗脫程序;流速1.0mL/min;檢測波長250nm;進樣量10μL;柱溫30℃。1.2對照品溶液的制備分別精密稱取補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、BroussochalconeB、補骨脂定、補骨脂二氫黃酮甲醚、異補骨脂查爾酮和CorylifolA適量,置同一棕色10mL容量瓶中,加甲醇溶解至刻度,搖勻,制成濃度分別為0.3000mg/mL、0.3500mg/mL、0.3000mg/mL、0.2700mg/mL、0.3000mg/mL、0.1200mg/mL、0.2000mg/mL、0.2500mg/mL、0.4500mg/mL、0.3600mg/mL和0.2000mg/mL的混合對照品溶液。于4℃保存?zhèn)溆谩?.3供試品溶液的制備取補骨脂生品粗粉(過60目篩)各約0.1g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加甲醇50mL,加熱回流2h,放冷,濾過,濾液置100mL蒸發(fā)皿中,在水浴鍋上蒸至有少量濾液殘留即可,用甲醇將蒸發(fā)皿中殘留的濾液和殘渣完全轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,搖勻,過0.45μm微孔濾膜作為供試品溶液。于4℃保存?zhèn)溆谩?方法學(xué)考察2.1線性關(guān)系考察取2.2項下的混合對照品溶液,精確稀釋2倍、4倍、8倍、16倍和32倍。精密吸取以上6份混合對照品溶液各10μL注入高效液相色譜儀,測定。以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,計算回歸方程,結(jié)果R>0.999,線性良好。2.2精密度試驗精密吸取2.2項下的混合對照品溶液5μL連續(xù)進樣6次,記錄補骨脂各主要成分的峰面積積分值,計算RSD,結(jié)果精密度各成分峰面積的RSD≤2.92%,表明儀器精密度良好。2.3穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗取生品供試品溶液分別在0,2,4,6,8,10,12h進樣,測定補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、BroussochalconeB、補骨脂定、補骨脂二氫黃酮甲醚、異補骨脂查爾酮、CorylifolA、補骨脂查爾酮和補骨脂酚的峰面積。RSD≤3.43%,表明樣品在12h內(nèi)較為穩(wěn)定。測得的平均峰面積的RSD≤2.93%,表明該方法的重現(xiàn)性較好。2.4回收率試驗取已測含量的生品粗粉約0.1g,6份,精密稱定補骨脂各對照品,加入,按"2.3"項制得供試品溶液,按"2.1"項中色譜條件考察結(jié)果測定補骨脂中各化學(xué)成分的含量,計算加樣回收率?；厥章?5.52%~104.85%,RSD≤2.61%。3含量測定結(jié)果補骨脂生品和鹽炙品,按2.3項下制備,2.1項下色譜條件進行分析,標準曲線法計算補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、BroussochaloneB、補骨脂定、補骨脂二氫黃酮甲醚、異補骨脂查爾酮、CorylifolA的含量。4一測多評法校正因子的計算,見表1。5討論采用一測多評法測定補骨脂中2種常見香豆素成分補骨脂素和異補骨脂素,補骨脂中8中黃酮成分,新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、BroussoclaloneB、異補骨脂查爾酮、補骨脂二氫黃酮甲醚以及CoryifolA,一測多評法可在缺少對照品的情況下,依然能夠?qū)ζ渌煞诌M行定量。本文采用一測多評法所得補骨脂藥材中8種黃酮類成分含量與常規(guī)的外標法所測得的含量間沒有顯著差異,說明在對照品缺乏的情況下,通過一測多評法實現(xiàn)補骨脂藥材同類成分的含量測定是準確的、可行的。參考文獻:[1]朱兆榮,李玉強,劉娟,等.補骨脂總黃酮抗氧化作用研究[J].中國獸藥雜志,2005,39(2):18-20.[2]HerrmannG,BrenneisenP,WlaschekM,eta1.Psoralenphotoactivationpromotesmorphologicalandfunctionalchangesinfibroblastsinvitroreminiscentofcellularsenescence[J].JournalofCellScience,1998,111(6):759-767.[3]李冬云,陳信義,劉瑞娟.單味中藥成分逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥基礎(chǔ)研究評述[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,