實驗室常用小鼠簡介-(同濟)

C57BL/6簡要描述：最常見的實驗小鼠，經(jīng)常簡稱為B6C57或者小鼠。性狀描述：毛色為黑色，常作為“標(biāo)準(zhǔn)”的近交系。常見用途：⑴用于多種免疫學(xué)、遺傳學(xué)研究，包括移植、感染等動物模型。⑵常作為背景小鼠，對其進行基因敲除、轉(zhuǎn)基因等遺傳修飾,從而提供標(biāo)準(zhǔn)的遺傳背景。BALB/C簡要描述：是實驗室常見的免疫功能不太完善的小鼠。性狀描述：毛色為白色，對致癌因子敏感，卵巢、腎上腺和肺部腫瘤、白血病發(fā)生率較高。常見用途：⑴用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤的制備。⑵免疫學(xué)研究，如移植的供受鼠等。BM12簡要描述：是C57BL/6近交系小鼠自發(fā)形成的一個近交系小鼠，在MHCII類分子中有3個氨基酸的突變。性狀描述：與C57BL/6基本相同，對EAE等自身免疫性疾病具有抗性。常見用途：用于慢性排斥反應(yīng)研究的供鼠。免疫學(xué)研究中常用的小鼠品系第一頁，共23頁。常見的小鼠品系A(chǔ)LR：與NOD小鼠具有共同祖先的小鼠，白色，兩者有70%的基因組完全相同，但MHC不相同。對I型糖尿病具有很強的誘導(dǎo)耐受。常用于NOD的對照小鼠。雜交鼠：由兩個近交系雜交獲得后代，性狀不穩(wěn)定。小鼠遺傳操作未進行徹底的小鼠。NOD：簡要描述：非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠，最常見的實驗小鼠，公認(rèn)的自身免疫性糖尿?。↖型糖尿病）。性狀描述：白色，從第9周開始，即會有胰腺炎癥狀，之后雌鼠會有較高的概率得I型糖尿病。常見用途：⑴I型糖尿病遺傳、發(fā)病機制研究。⑵其它相關(guān)的自身免疫性疾病研究，如干燥綜合癥等。第二頁，共23頁。1、器官移植模型2、自身免疫性疾病模型3、超敏反應(yīng)模型4、腫瘤模型免疫研究常見的小鼠動物模型第三頁，共23頁。腎移植模型異位心臟移植模型小腸移植模型骨髓移植模型肝移植模型皮膚移植模型胰腺（胰島）移植模型慢性排斥（BM12）器官移植模型第四頁，共23頁。1、自發(fā)型I型糖尿病動物模型NOD小鼠2、誘導(dǎo)型I型糖尿病動物模型：藥物（STZ、Alloxan、環(huán)磷酰胺等）誘導(dǎo)破壞小鼠胰島3、自發(fā)型系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠BXSB4、誘導(dǎo)型系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠慢性移植物抗宿主自身免疫性疾病模型第五頁，共23頁。5、自發(fā)型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎SKG小鼠6、誘導(dǎo)型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型，佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvantarthritis，AA)模型，其它誘導(dǎo)模型7、誘導(dǎo)小鼠EAE；模擬人多發(fā)性硬化癥/急性播散性腦脊髓炎。髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽免疫；髓鞘堿性蛋白（MBP）免疫疫；髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)免疫；脊髓組織勻漿免疫等自身免疫性疾病模型第六頁，共23頁。超敏反應(yīng)模型氣道高敏感反應(yīng)模型：腹腔注射卵清白蛋白致敏，然后通過霧化吸入造模。皮膚過敏反應(yīng)模型：過繼輸入抗二硝基苯酚（DNP）的IgGE單克隆抗體，使小鼠被動致敏，然后以二硝基氟代苯（DNFB）刺激產(chǎn)生過敏反應(yīng)。第七頁，共23頁。腫瘤模型移植瘤實驗：將人移植入BalB/C、祼鼠、C57BL/6、Rag1等小鼠體內(nèi)。誘導(dǎo)癌/腫瘤模型：使用二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN)等誘癌劑灌胃及自由飲水，長期誘導(dǎo)可產(chǎn)生肝癌模型。第八頁，共23頁。1、基因敲除小鼠2、基因敲入小鼠3、基因捕獲小鼠4、轉(zhuǎn)基因小鼠5、條件性基因表達小鼠6、條件性基因敲除小鼠基因修飾小鼠第九頁，共23頁。載體構(gòu)建基本知識二、pIRES2-EGFP-rtTAAdvanced構(gòu)建使用引物將rtTAAdvancedCDS區(qū)克隆出來，然后以XhoI/BglII雙酶切，將其克隆入pIRES2-EGFP載體的XhoI/BamHI位點中。引物序列為：rtTA_XhoI_F:ATCGCTCGAGCCGCCACCATGTCTAGACTGGACAAGAGCAAArtTA_BglII_R:ATCGAGATCTTACTTAGTTACCCGGGGAGCATGTCA第十頁，共23頁?；虮磉_基本知識DNA一級結(jié)構(gòu)上調(diào)控基因表達的元件（基因表達盒結(jié)構(gòu)）promoter5’-UTRpromoterenhancerUTRexonPolyAsignalingenhancer3’-UTRChromosomesequence第十一頁，共23頁。基因敲除小鼠第十二頁，共23頁?；蛐揎桬S細胞的獲得及囊胚注射基因敲除小鼠第十三頁，共23頁。2、基因敲除純合小鼠的獲得第十四頁，共23頁。基因敲入小鼠Neorw.tallelefloxallele1IIIIIIw.t.sequenceVectorsequenceloxPsiteFRTsiteTypingprimerTypingprimerexon第十五頁，共23頁?；虿东@小鼠效果類似于基因敲除第十六頁，共23頁。MBD2基因敲除小鼠

b-geo

w.t.allele

1

2

w.t.sequence

Vectorsequence

mutantallele

Typingprimer

Typingprimer

exon

1

3

b-geo

3

Sequencenotindicated

targetingvector

A

第十七頁，共23頁。轉(zhuǎn)基因小鼠靶標(biāo)基因表達盒DNA第十八頁，共23頁。條件性基因表達小鼠PCAGloxPCATloxPHGHPApBR322oriAmpPacIpCAG-CAT-X7100bpMBD2cDNA在MBD2CDS兩端PCR加入PacI酶切位點PacIPacIPacI酶切，T4連接酶連接PCAGCATMBD2loxPloxPPacIPacIABCPCAGMBD2loxPPacIPacIDEloxPCAT+Cre介導(dǎo)重組Cre-loxP系統(tǒng)第十九頁，共23頁。Tet-on表達系統(tǒng)第二十頁，共23頁。條件性基因敲除小鼠Cre-loxP及FLP-FRT技術(shù)Cre、FLP是重組酶，loxP、FRT是重組位點第二十一頁，共23頁。圖1:誘導(dǎo)型平滑肌特異性敲除Dicer1基因的小鼠基因型。1A：Dicer1的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),主要包含4個結(jié)構(gòu)域，任一個結(jié)構(gòu)域的缺失均能導(dǎo)致microRNA不能成熟；1B：兩側(cè)包含loxP位點的Dicer基因結(jié)構(gòu)圖，兩個同向loxP位于Dicer基因22號外顯子的兩側(cè)，該外顯子對應(yīng)于前一個RNAIII結(jié)