酶學(xué)分析技術(shù)課件

酶學(xué)分析技術(shù)1酶的活性是指酶的催化能力的大小，即酶促反應(yīng)速度的快慢。在規(guī)定條件下，單位時間內(nèi)底物減少的量或產(chǎn)物生成的量來表示。2酶活性的單位是指在特定的條件下，使酶促反應(yīng)達到某一速度所需要的酶量。

3

酶的比活性是指單位質(zhì)量（mg）的蛋白質(zhì)所具有某種酶的活性。

活性單位/mg蛋白

比活性是衡量酶純度的一個指標(biāo)。5酶活性單位的計算酶單位/升=（A測-A對）.V總.106K.L.V標(biāo)×規(guī)定保溫時間實際保溫時間6酶促反應(yīng)進程曲線產(chǎn)物濃度反應(yīng)時間t線性期(B)偏離線性期（c）7Vm[S]Vm/2Km一級反應(yīng)混合級反應(yīng)零級反應(yīng)酶促反應(yīng)底物動力學(xué)81.

v=V[S]/Km+[S]2.Km=[S](V/v-1)3.Km在一定的底物、pH、溫度下是一個常數(shù)(種類及底物性質(zhì)有關(guān))

4.酶促反應(yīng)∝親和力∝1/Km6.設(shè)計適宜的底物濃度10-20

Km5.選擇酶的最適底物10Km和Vmax的測定(雙倒數(shù)法)1Km+[S]Km11==vVmax[S]Vmax[S].+Vmax11酶活性測定的方法1.終點法（又稱二點法、固定時間法）

酶促反應(yīng)一定時間后（從t1到t2)終止酶促反應(yīng)，然后測定產(chǎn)物生成的量或底物消耗的量。

13

優(yōu)點

酶促反應(yīng)已終止，比色計無需恒溫裝置，不必考慮顯色劑對酶的影響。

缺點

無法了解酶作用這段時間里反應(yīng)是否外于線性期。

14

每隔一定時間（10～60秒）連續(xù)測定酶促反應(yīng)中某一產(chǎn)物或底物變化量稱為連續(xù)監(jiān)測法。

優(yōu)點容易找到線性期、結(jié)果可靠、省時、省試劑、省樣品

缺點

反應(yīng)速度易受溫度、pH、底物濃度等因素的影響。2.連續(xù)監(jiān)測法（又稱速率法）15

在許多酶促反應(yīng)中，底物或產(chǎn)物的變化量很難直接測定，常需要在反應(yīng)體系中加入一種或一種以上的酶作為試劑。使第一個酶促反應(yīng)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)橐子跈z測的第二個酶或第三個酶的底物，通過這種偶聯(lián)反應(yīng)間接測定第一個酶的待測物濃度或待測酶的活性，這種作為試劑用的酶稱為工具酶。ABCP17酶偶聯(lián)測定法ABCPEXEaEiLDH、MDH、G6PD、GLDH作工具酶均是以NAD（P）H為輔酶的脫氫酶。P+NAD(P)H+H+PH2+NAD(P)+18

將水溶性的酶，通過物理或化學(xué)的方法，使其吸附、包埋或共價結(jié)合在固相載體上，成為不溶于水但仍保留催化活性的酶的衍生物稱為固相酶。

優(yōu)點：可反復(fù)使用

機械強度大

穩(wěn)定性好

抗干擾性強

19同工酶的產(chǎn)生機理

不同基因位點編碼等位基因編碼多條肽鏈化學(xué)修飾產(chǎn)生21

電泳法

層析法

免疫化學(xué)法

動力學(xué)法

熱失活法

同工酶的分離及鑒定2223酶活性測定在臨床診斷中的應(yīng)用在肝臟疾病診斷中的應(yīng)用

ALT、AST、LCAT、OCT、ICD、GLDH、SDH、5’-NT、γ-GT、ALP、MAO特異性強、活性高的酶在急性心肌梗死診斷中的應(yīng)用AST、LDH、CK（心肌酶）在急性胰腺炎診斷中的應(yīng)用淀粉酶和脂肪