尿液標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)

尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

一、標(biāo)本采集意義：尿液細(xì)菌培養(yǎng)是泌尿系感染的診斷依據(jù)。采集時(shí)間：取晨起第一次尿，應(yīng)在用藥之前；標(biāo)本采集注意事項(xiàng)：嚴(yán)格無菌操作，防止污染，正確留取尿液是細(xì)菌培養(yǎng)的關(guān)鍵；盡快送檢，不加防腐劑或消毒劑。采集方法：

1.導(dǎo)尿法取10-15ml置入無菌容器中送檢，用于無法排尿或已插導(dǎo)尿管的患者。2.中段尿采集法：簡(jiǎn)單易行，無感染危險(xiǎn)女性：先用肥皂水與滅菌水洗凈外陰及尿道口男性：應(yīng)翻轉(zhuǎn)包皮，肥皂水洗凈，再用清水沖洗尿道口讓患者排尿，收集成直線排出的中段尿10-20ml,于無菌瓶?jī)?nèi)送檢。

3.腎盂尿采集法：由泌尿科醫(yī)生進(jìn)行

4.膀胱穿刺采集法：適用于厭氧菌培養(yǎng)消毒患者恥骨上皮膚后，無菌注射器作膀胱穿刺，取尿（厭氧培養(yǎng)時(shí)應(yīng)將針頭插入橡皮塞內(nèi)）送檢。

5.集尿法:

適宜于結(jié)核桿菌檢查，用一清潔容器收集24小時(shí)尿，取沉渣送檢。

二、檢驗(yàn)方法

檢驗(yàn)程序：見表

尿液直接/離心沉淀涂片染色鏡檢定量培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)離心沉淀分離培養(yǎng)直接藥敏

報(bào)告（一級(jí)報(bào)告）普通細(xì)菌培養(yǎng)特殊培養(yǎng)（BA、MAC、EMB）（選擇培養(yǎng)基)

報(bào)告（二級(jí)報(bào)告）觀察菌落

分離鑒定（最終報(bào)告）涂片染色鏡檢純培養(yǎng)鑒定試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)最終報(bào)告（三級(jí)報(bào)告）（一）涂片鏡檢一般細(xì)菌檢查：取新鮮尿液1滴，涂片革蘭染色，油鏡觀察細(xì)菌數(shù)，如每個(gè)視野≥1個(gè)細(xì)菌，則相當(dāng)于細(xì)菌定量培養(yǎng)≥105CPU/ml。取尿液10-15ml,3000r/min離心15min,取沉渣涂片染色鏡檢，據(jù)形態(tài)、排列及染色，得出初步印象，報(bào)告找到--排列，疑似--菌。淋球菌檢查

取早晨第一次尿，10-15ml,離心沉淀，取沉渣染色鏡檢，據(jù)形態(tài)染色性（細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外），可作初步報(bào)告。結(jié)核桿菌檢查

取尿離心沉淀，涂片作抗酸染色或熒光染色。假絲酵母菌檢查取離心沉淀物置載玻片上，蓋上載玻片，鏡下直接觀察，也可革蘭染色，見有發(fā)亮的卵圓形芽生孢子和管狀假菌絲，或?yàn)楦锾m陽(yáng)性酵母樣細(xì)胞時(shí)，即可報(bào)告“找到酵母樣菌，形似假絲酵母菌”。鉤端螺旋體檢查取發(fā)病一周后患者（先口服NaHCO2，降低尿的酸度）的尿液5-10ml，3000r/min離心30min,取沉淀物置玻片上，加蓋玻片后放暗視野顯微鏡檢查，找到鉤體，報(bào)告“暗視野顯鏡檢找到鉤端螺旋體”。（二）分離培養(yǎng)1.一般細(xì)菌培養(yǎng)取尿液離心沉淀物分別種于BA、MAC、EMB等培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)18-24小時(shí);若2種培養(yǎng)基上均有革蘭陰性細(xì)菌生長(zhǎng)，不分解乳糖，按沙門菌、變形桿菌進(jìn)行鑒定；如果分解乳糖，則按大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌、肺炎克雷伯菌等鑒別；只能在血平板生長(zhǎng)者，應(yīng)根據(jù)涂片染色、做出最后鑒定，再報(bào)告。2、淋病奈瑟菌培養(yǎng)取沉淀物接種35℃預(yù)溫的CA(加萬古霉素、多粘菌素、制霉菌素)，置35℃含5-10%的CO2條件下培養(yǎng)24小時(shí)，如不長(zhǎng)，則繼續(xù)到48小時(shí)，若有可以菌落，則按淋球菌鑒定報(bào)告。尿中抗生素濃度高，易使細(xì)菌形成L-型，故常規(guī)方法培養(yǎng)陰性時(shí)，應(yīng)考慮進(jìn)行L-型菌培養(yǎng)。(三)定量培養(yǎng)要求：尿液新鮮、冷凍保存不得超過2小時(shí)，不能離心

1.傾注平板法取新鮮尿液混勻，用無菌生理鹽水進(jìn)行1:10,1:100；1:1000等稀釋，各取1ml,分別加入直徑9cm的無菌平皿內(nèi)，然后傾注融化冰冷卻至45℃-50℃的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，并立即混勻，帶凝固后，放35℃培養(yǎng)24-48小時(shí)，做菌落計(jì)數(shù)，計(jì)算每1ml中細(xì)菌數(shù)每ml尿液細(xì)菌數(shù)＝菌落平均數(shù)×尿液稀釋倍數(shù)2.平板接種法

用定量移液器取尿5ul,滴注在瓊脂平板上，用接種環(huán)或L型玻棒均勻涂抹，待表面干燥后，35℃培養(yǎng)，18-24小時(shí)，計(jì)數(shù)菌落，乘以200，即得每ml尿液中細(xì)菌數(shù)。3.定量接種法用定量接種環(huán)（1ul或10ul）醮滿尿液，在血平板上均勻劃線接種，置35℃培養(yǎng)，18-24小時(shí)，計(jì)數(shù)菌落，乘以1000或100，即得每ml尿液的菌落數(shù)。

報(bào)告：當(dāng)細(xì)菌超過10萬或生長(zhǎng)過多不可計(jì)數(shù)時(shí)，報(bào)告“菌落計(jì)數(shù)，每毫升尿液含菌數(shù)＞105個(gè)”（cfu/ml）;當(dāng)細(xì)菌數(shù)＜105個(gè)時(shí)，則報(bào)告實(shí)際菌數(shù)；若無菌生長(zhǎng)則報(bào)告“培養(yǎng)48小時(shí)無菌生長(zhǎng)”。三、臨床意義正常膀胱是無菌的。尿液排出受尿路細(xì)菌污染，但中段尿培養(yǎng)，細(xì)菌數(shù)不會(huì)超過103CFU/ml;當(dāng)泌尿系感染時(shí)，尿中細(xì)菌數(shù)可達(dá)到104-105CFU/ml；若細(xì)菌數(shù)≥105

CFU/ml可作為泌尿系細(xì)菌感染的細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。但如果低于上述標(biāo)準(zhǔn)，也不能完全排出尿路感染的可能。尿液標(biāo)本中常見的病原菌及正常菌群病原菌革蘭陽(yáng)性菌：金葡、化膿性鏈球菌、腸球菌、結(jié)核分枝桿菌革蘭陰性菌：淋病奈瑟菌、大腸桿菌、變形桿菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)氣桿菌、沙門菌、銅