(3.2)-2.2.3抗酸染色衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法與技能

抗酸染色【原理】有些細(xì)菌，如結(jié)核分枝桿菌，細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)，一般不宜著色，需用強(qiáng)濃染液加溫或延長時間才能著色。一旦著色后可抵抗鹽酸酒精的脫色作用，這種特性為抗酸性，應(yīng)用此原理染色的方法為抗酸染色法。2023/4/152常用方法萋-尼（Ziehl-Neelsen）氏染色法（WHO推薦方法）金永（Kinyoun）染色法2023/4/153樣本：抗酸染色專用混合液試劑：抗酸染色液儀器：顯微鏡、生物安全柜其他：載玻片、接種環(huán)、酒精燈，玻片架等2023/4/154【實(shí)驗(yàn)器材】抗酸染色專用混合液抗酸染色液萋-尼（Ziehl-Neelsen）氏染色法2023/4/155【方法】涂片制備用接種環(huán)取待檢樣本，在清潔無油脂玻片上涂開。自然干燥后，用片夾挾住玻片一端，通過火焰固定。2023/4/156【方法】染色初染：于涂面處滴加石炭酸復(fù)紅溶液，置于酒精燈火焰上方徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)。待蒸氣消失后再加溫，如此反復(fù)3～4次，約染色5~8min，水洗，瀝干。注意隨時添加染液，勿使染液煮干、煮沸。2023/4/157【方法】染色脫色：滴加3%的鹽酸酒精脫色，不時搖動玻片至無紅色脫落為止，水洗，瀝干。復(fù)染：滴加呂氏亞甲藍(lán)染液，染色0.5~1分鐘，水洗，印干后鏡檢?？顾峋t色；非抗酸菌—藍(lán)色?！窘Y(jié)果】結(jié)核分枝桿菌抗酸染色2023/4/159金永（Kinyoun）染色法（冷染法）【染色步驟】初染：涂片固定后加金永氏石碳酸復(fù)紅染色液染色15min，不必加熱。脫色：棄去初染液后，水洗，加金永氏脫色液脫色至無紅色為止，水洗。復(fù)染：滴加復(fù)染液亞甲藍(lán)染色30~60s，水洗，待干，油鏡鏡檢。2023/4/1510[結(jié)果]：抗酸菌染成紅色，非抗酸菌及細(xì)胞等均染成淡藍(lán)色。金永（Kinyoun）染色法痰液標(biāo)本金永抗酸染色2023/4/1511【應(yīng)用】常用于分枝桿菌屬細(xì)菌的檢查。痰液、腦脊液或胸腹水中找到抗酸菌，具有診斷意義。常取膿性或干酪樣痰標(biāo)本，制成約15mm×20mm大小的卵圓形厚涂片。染色后，肉眼觀察痰膜呈淡藍(lán)色或藍(lán)色，不得有紅色斑塊，痰膜脫落部分在10%以下。若發(fā)現(xiàn)即可報告“找到抗酸桿菌”。2023/4/1512涂片鏡檢結(jié)果的報告方式半定量報告齊-尼抗酸染色（×1000）未找到抗酸菌0可疑抗酸菌：重新送檢1~2/300視野1+1~9/100視野2+1~9/10視野3+1~9/視野4+>9/視野【應(yīng)用】2023/4/1513【注意事項(xiàng)】廢棄標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)操作相關(guān)污染物須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方能丟棄或清洗。涂片應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。為防止交叉污染，一張載玻片只能做一份樣本涂片。2023/4/1514【知識拓展】主要采用冷染法操作簡單染色標(biāo)準(zhǔn)化減少污染提高效率和安全性抗酸染色儀2023/4/1515【思考】某患者痰液樣本抗酸染色結(jié)果陽性，該患者一定是感染了結(jié)核分枝桿菌嗎？答案：不一