第四章微生物生長(zhǎng)與生活環(huán)境

第四章微生物生長(zhǎng)與生活環(huán)境第1頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第一節(jié)微生物純培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室條件下，由一個(gè)微生物細(xì)胞繁殖得到的后代。純培養(yǎng)基本步驟：稀釋平皿法劃線法單細(xì)胞挑取法純培養(yǎng)方法(2)培養(yǎng)

(1)分離一、微生物純培養(yǎng)的概念第2頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)1、稀釋平板分離法：傾注平板法和涂布平板法?；具^程：（1）梯度稀釋過程；（2）分離培養(yǎng)過程涂布傾注梯度稀釋過程10-110-210-310-410-510-6第3頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第4頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2、單細(xì)胞挑取法：從待分離材料中挑取一個(gè)細(xì)胞來(lái)培養(yǎng)，從而獲得純培養(yǎng)的過程。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)第5頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3、平皿劃線法用接種環(huán)沾少許待分離的材料，在培養(yǎng)基表面進(jìn)行多次平行劃線，使微生物細(xì)胞分開生長(zhǎng)以獲得微生物純培養(yǎng)的過程。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)第6頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二三、微生物無(wú)菌操作與接種技術(shù)培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個(gè)過程叫做無(wú)菌接種操作。在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作。（1）培養(yǎng)基與接菌工具的滅菌（2）保證接菌過程的無(wú)菌操作第7頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二滅菌方法一、高溫滅菌濕熱滅菌干熱滅菌：干燥條件，160℃維持1-2h。高壓蒸汽滅菌法：密閉條件下，水加熱蒸發(fā)形成高壓的同時(shí)產(chǎn)生高溫。利用高溫殺死菌。巴斯德消毒法：采用60-70℃的溫度處理15-30min

的消毒方法。間歇滅菌法：100℃，30-60min

冷卻，37℃培養(yǎng)1d反復(fù)三次第8頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1、紫外線：殺菌波長(zhǎng)范圍：240—300nm殺菌力最強(qiáng)范圍：255—265nm

二、輻射紫外線殺菌特點(diǎn)：穿透力差，用作表面消毒或空氣滅菌，30min滅菌95%以上2、放射性同位素：Co60等，主要用于誘變產(chǎn)生新品種第9頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（一）純培養(yǎng)的保存第一節(jié)微生物純培養(yǎng)四、純培養(yǎng)的保存與復(fù)壯保存過程的注意點(diǎn)：防止雜菌污染。1、傳代保存法2、液體石蠟覆蓋保存法3、載體保存法4、懸液保存法5、寄主保存法6、冷凍保存法第10頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（二）純培養(yǎng)的衰退與復(fù)壯第一節(jié)微生物純培養(yǎng)四、純培養(yǎng)的保存與復(fù)壯衰退的原因：衰老、變異衰退的表現(xiàn)：生長(zhǎng)緩慢優(yōu)良性狀的喪失抗逆性下降衰退的預(yù)防：控制傳代頻率創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件采取有效的保存方式復(fù)壯選優(yōu)汰劣第11頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二一、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定微生物數(shù)量的測(cè)定顯微鏡直接計(jì)數(shù)法平板計(jì)數(shù)法比濁法稱重法含N量測(cè)定法DNA含量測(cè)定法ATP含量測(cè)定法代謝活性法微生物重量的測(cè)定第12頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二(一)微生物數(shù)量的測(cè)定

1、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法使用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，計(jì)數(shù)直觀。一、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律第13頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2、平板計(jì)數(shù)法對(duì)樣品稀釋培養(yǎng)，據(jù)形成的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：傳統(tǒng)計(jì)數(shù)方法。對(duì)設(shè)備要求不高。一、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律10-310-510-410-6第14頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二３、比濁計(jì)數(shù)法根據(jù)細(xì)菌懸浮液的吸光度測(cè)定其數(shù)量。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，直接。一、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律第15頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二(二)微生物重量的測(cè)定

1、稱重法用離心或過濾的方法將菌體從培養(yǎng)基中分離、冼凈，稱濕重或干重。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單可靠。一、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律在活性污泥法中采用的指標(biāo)：（1）混合液懸浮固體(MLSS)（粗放測(cè)定）

污泥—干燥----稱重(W1)（2）揮發(fā)性懸浮固體(MLVSS)（相對(duì)準(zhǔn)確）

上述已稱重污泥-----馬福爐(500度2小時(shí))----冷卻---稱重(W2)第16頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二(二)微生物重量的測(cè)定

2、含氮量測(cè)定法

根據(jù)樣品中菌體蛋白質(zhì)含量計(jì)算微生物重量的方法。

一、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律原理：（1）微生物蛋白質(zhì)含量穩(wěn)定（2）氮是蛋白質(zhì)的穩(wěn)定成分

(蛋白質(zhì)量=6.25×總含N量)優(yōu)點(diǎn)：測(cè)定準(zhǔn)確?！?？”第17頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律（1）分批培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)第18頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律分批培養(yǎng)(batchculture)：將少量的菌體接種到一定體積的液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，最后一次性收獲的過程。第19頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二生長(zhǎng)曲線(growthcurve)代表細(xì)菌在新的適宜的環(huán)境中生長(zhǎng)、繁殖、衰老、死亡的動(dòng)態(tài)變化。生長(zhǎng)曲線：以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌的數(shù)目的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)繪制成的曲線圖。第20頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖速率將生長(zhǎng)曲線分四個(gè)階段：第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律緩慢期對(duì)數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律第21頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律緩慢期（延遲期、滯留適應(yīng)期）滯留適應(yīng)期二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律特點(diǎn)：分裂遲緩。產(chǎn)生及影響緩慢期長(zhǎng)短的因素１、培養(yǎng)基成分２、菌株的遺傳性３、接種量４．接種時(shí)的機(jī)械損傷引第22頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律對(duì)數(shù)期（指數(shù)生長(zhǎng)期）特點(diǎn)：（1）代謝活性強(qiáng)（2）世代時(shí)短而穩(wěn)定對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長(zhǎng)規(guī)律Nt=2nN0n=3.33(lgNt-lgN0)G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0)

n——繁殖代數(shù)；G——世代時(shí)(每繁殖一代所需的時(shí)間)N0——對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期開始微生物數(shù)量

Nt——對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期經(jīng)過時(shí)間t后微生物數(shù)量第23頁(yè)，共25頁(yè)，2023年，2月20日，星期二例題：利用250ml三角瓶培養(yǎng)菌體細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)初利用分光光度計(jì)在600nm

測(cè)得菌體濃度為OD=0.1,(設(shè)每個(gè)OD=100個(gè)/ml)，培養(yǎng)24小時(shí)后