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一、高考對(duì)試驗(yàn)與探究能力的要求(1)能獨(dú)立完成“生物知識(shí)內(nèi)容表”所列的生物實(shí)驗(yàn),包括理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法和操作步驟,掌握相關(guān)的操作技能,并能將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合的運(yùn)用。(2)具備驗(yàn)證簡(jiǎn)單生物學(xué)事實(shí)的能力,并能對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行解釋、分析和處理。(3)具有對(duì)一些生物學(xué)問(wèn)題進(jìn)行初步探究的能力,包括運(yùn)用觀察、實(shí)驗(yàn)與調(diào)查,假說(shuō)演繹、建立模型與系統(tǒng)分析等科學(xué)研究方法。(4)能對(duì)一些簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方案做出恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)和修訂。二、考綱中的實(shí)驗(yàn)考試內(nèi)容考試說(shuō)明中明確指出的19個(gè)生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。按實(shí)驗(yàn)性質(zhì)可分為以下類型:1.觀察類。2.物質(zhì)鑒定類3.驗(yàn)證類4.探究類5.調(diào)查類6.模擬建模類(一)觀察類實(shí)驗(yàn)在此類實(shí)驗(yàn)中常綜合運(yùn)用顯微觀察技術(shù)、染色技術(shù)、臨時(shí)裝本制作技術(shù)等。歸類如下:實(shí)驗(yàn)名稱觀察方式觀察對(duì)象顯微鏡玻片標(biāo)本染色劑生物材料觀察葉綠體原色反應(yīng)葉綠體高倍臨時(shí)裝片無(wú)蘚類葉觀察質(zhì)壁分離與復(fù)原紫色大液泡高倍臨時(shí)裝片無(wú)洋蔥表皮觀察減數(shù)分裂蝗蟲(chóng)精母細(xì)胞高倍固定裝片無(wú)固定裝片觀察有絲分裂染色觀察染色體高倍臨時(shí)裝片龍膽紫(醋酸洋紅)洋蔥根尖脂肪的鑒定脂肪高倍切片臨時(shí)裝片蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液花生種子觀察DNA、RNA的分布DNA、RNA高倍臨時(shí)裝片甲基綠和吡羅紅人的口腔上皮細(xì)胞觀察線粒體線粒體高倍臨時(shí)裝片健那綠低溫誘導(dǎo)染色體數(shù)目加倍染色體高倍臨時(shí)裝片改良苯酚品紅染液洋蔥根尖細(xì)胞實(shí)驗(yàn)名稱鑒定對(duì)象試劑顏色水浴加熱生物材料生物組織中糖類的鑒定淀粉碘液藍(lán)色無(wú)脫色的葉片還原糖斐林試劑(班氏試劑)磚紅色沉淀需要含糖量高的白色或近白色的植物組織、尿液、血漿蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)雙縮脲試劑紫色無(wú)豆?jié){、牛奶、雞蛋清、蛋白質(zhì)類酶模擬尿糖的檢測(cè)葡萄糖葡萄糖試紙有色無(wú)水、葡萄糖溶液、三份模擬“尿樣”的滴瓶驗(yàn)證類與探究類實(shí)驗(yàn)1、通過(guò)模擬實(shí)驗(yàn)探究膜的透性2、探究影響酶活性的因素3、探究酵母菌的呼吸方式4、模擬探究細(xì)胞表面積與體積的關(guān)系5、低溫誘導(dǎo)染色體加倍6、探究植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)扦插枝條生根的作用7、探究培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化8、探究水族箱(或魚(yú)缸)中群落的演替實(shí)習(xí)和研究性課題此類實(shí)驗(yàn)通過(guò)調(diào)查法,調(diào)查法中常使用統(tǒng)計(jì)技術(shù)和測(cè)量技術(shù)。實(shí)習(xí)和研究性課題調(diào)查對(duì)象統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算公式種群密度的取樣調(diào)查動(dòng)物標(biāo)志重捕法植物樣方法調(diào)查人群中遺傳病土壤中小動(dòng)物類群豐富度的調(diào)查人類某種遺傳病土壤中小動(dòng)物匯總法取樣器取樣調(diào)查法記名計(jì)數(shù)法和目測(cè)估計(jì)法個(gè)體總數(shù)(N)初次捕獲的個(gè)體數(shù)=再次捕獲的個(gè)體數(shù)重捕到的標(biāo)志個(gè)體數(shù)所有樣方內(nèi)個(gè)體總數(shù)樣方的總面積發(fā)病率=患病人數(shù)被調(diào)查人數(shù)*100%三、生物學(xué)中常用的試劑成分及用法(1)斐林試劑:成分:0.1g/mLNaOH(甲液)和0.05g/mLCuSO4(乙液)。用法:將斐林試劑甲液和乙液等體積混合,再將混合后的斐林試劑倒入待測(cè)液,水浴加熱或直接加熱,如待測(cè)液中存在還原糖,則出現(xiàn)磚紅色沉淀。(2)班氏糖定性試劑:為藍(lán)色溶液。和葡萄糖溶液混合后沸水浴會(huì)出現(xiàn)磚紅色沉淀。用于尿糖的測(cè)定。(3)雙縮脲試劑:由0.1g/mLNaOH(A液)和0.01g/mLCuSO4(B液)構(gòu)成。向待測(cè)液中先加入2mLA液,搖勻,再向其中加入3~4滴B液,搖勻。如待測(cè)中存在蛋白質(zhì),則呈現(xiàn)紫色。(10)20%的肝臟研磨液、3%的過(guò)氧化氫、3.5%的氯化鐵:用于比較過(guò)氧化氫酶和Fe3+的催化效率。(新鮮的肝臟中含有過(guò)氧化氫酶)(11)3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鮮淀粉酶溶液:用于探索淀粉酶對(duì)淀粉和蔗糖的作用實(shí)驗(yàn)。(12)碘液:用于鑒定淀粉的存在。遇淀粉變藍(lán)。(13)層析液:(成分:20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93號(hào)汽油)可用于色素的層析,即將色素在濾紙上分離開(kāi)。(14)二氧化硅:在色素的提取的分離實(shí)驗(yàn)中研磨綠色葉片時(shí)加入,可使研磨充分。(15)碳酸鈣:研磨綠色葉片時(shí)加入,可中和有機(jī)酸,防止在研磨時(shí)葉綠體中的色素受破壞。(16)0.3g/mL的蔗糖溶液:相當(dāng)于30%的蔗糖溶液,比植物細(xì)胞液的濃度大,可用于質(zhì)壁分離實(shí)驗(yàn)。(17)0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液:防止凝血得到血漿。(18)氯化鈉溶液:濃度為0.9%時(shí)可作為生理鹽水。(19)胰蛋白酶:①可用來(lái)分解蛋白質(zhì)。②可用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)分解組織使組織細(xì)胞分散開(kāi)。(20)秋水仙素:人工誘導(dǎo)多倍體試劑。用于萌發(fā)的種子或幼苗,可使染色體組加倍,原理是可抑制正在分裂的細(xì)胞紡錘體的形成。(21)健那綠染液(詹納斯綠B染液):能使活細(xì)胞中的線粒體呈現(xiàn)藍(lán)綠色(22)溴麝香草酚藍(lán)水溶液遇CO2藍(lán)綠黃(23)重鉻酸鉀酸性條件下遇酒精灰綠色三.方法步驟:操作步驟注意問(wèn)題解釋取口腔上皮細(xì)胞制片載玻片要潔凈,滴一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的NaCl溶液用消毒牙簽在自己漱凈的口腔內(nèi)側(cè)壁上輕刮幾下取細(xì)胞將載玻片在酒精燈下烘干防止污跡干擾觀察效果保持細(xì)胞原有形態(tài)消毒為防止感染,漱口避免取材失敗固定裝片水解將烘干的載玻片放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的鹽酸溶液中,用300C水浴保溫5min改變細(xì)胞膜的通透性,加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞,促進(jìn)染色體的DNA與蛋白質(zhì)分離而被染色沖冼涂片用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10S洗去殘留在外的鹽酸染色滴2滴吡羅紅甲綠染色劑于載玻片上染色5min觀察先低倍鏡觀察,選擇染色均勻、色澤淺的區(qū)域,移至視野中央,調(diào)節(jié)清晰后才換用高倍物鏡觀察使觀察效果最佳實(shí)驗(yàn)二檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)(必修一P18)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簢L試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)二.實(shí)驗(yàn)原理:某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物,產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。1.可溶性還原糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖)與斐林試劑發(fā)生作用,可生成磚紅色的Cu2O沉淀。如:加熱葡萄糖+Cu(OH)2葡萄糖酸+Cu2O↓(磚紅色)+H2O,即Cu(OH)2被還原成Cu2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。2.脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)。淀粉遇碘變藍(lán)色。3.蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用,產(chǎn)生紫色反應(yīng)。(蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵,在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用,產(chǎn)生紫色反應(yīng)。)三.實(shí)驗(yàn)材料1.做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn),應(yīng)選含糖高,顏色為白色的植物組織,如蘋果、梨。(因?yàn)榻M織的顏色較淺,易于觀察。)2.做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選富含脂肪的種子,以花生種子為最好,實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡3~4小時(shí)(也可用蓖麻種子)。3.做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn),可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。四、實(shí)驗(yàn)試劑斐林試劑(包括甲液:質(zhì)量濃度為0.1g/mLNaOH溶液和乙液:質(zhì)量濃度為0.05g/mLCuSO4溶液)、蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液、雙縮脲試劑(包括A液:質(zhì)量濃度為0.1g/mLNaOH溶液和B液:質(zhì)量濃度為0.01g/mLCuSO4溶液)、體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液,碘液、蒸餾水。(二)脂肪的鑒定操作方法注意問(wèn)題解釋花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片,將薄片放在載玻片的水滴中,用吸水紙吸去裝片中的水。干種子要浸泡3~4小時(shí),新花生的浸泡時(shí)間可縮短。因?yàn)榻輹r(shí)間短,不易切片,浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng),組織較軟,切下的薄片不易成形。切片要盡可能薄些,便于觀察。在子葉薄片上滴2~3滴蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液,染色1分鐘。染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。用吸水紙吸去薄片周圍染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精。酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,會(huì)影響對(duì)橘黃色脂肪滴的觀察。同時(shí),酒精是脂溶性溶劑,可將花生細(xì)胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。用吸水紙吸去薄片周圍酒精,滴上1~2滴蒸餾水,蓋上蓋玻片。滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)產(chǎn)生氣泡。低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處,可看到細(xì)胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。裝片不宜久放。時(shí)間一長(zhǎng),油滴會(huì)溶解在乙醇中。三、蛋白質(zhì)的鑒定操作方法注意問(wèn)題解釋制備組織樣液。(浸泡、去皮研磨、過(guò)濾。)黃豆浸泡1至2天,容易研磨成漿,也可購(gòu)新鮮豆?jié){以節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。鑒定。加樣液約2ml于試管中,加入雙縮脲試劑A,搖勻;再加入雙縮脲試劑B液3~4滴,搖勻,溶液變紫色。A液和B液也要分開(kāi)配制,儲(chǔ)存。鑒定時(shí)先加A液后加B液。CuSO4溶液不能多加。先加NaOH溶液,為Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)境。A、B液混裝或同時(shí)加入,會(huì)導(dǎo)致Cu2+變成Cu(OH)2沉淀,而失效。否則CuSO4的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色??捎玫扒宕娑?jié){。蛋清要先稀釋。如果稀釋不夠,在實(shí)驗(yàn)中蛋清粘在試管壁,與雙縮脲試劑反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上,使反應(yīng)不容易徹底,并且試管也不易洗干凈。附:淀粉的檢測(cè)和觀察用試管取2ml待測(cè)組織樣液,向試管內(nèi)滴加2滴碘液,觀察顏色變化。碘液不要滴太多以免影響顏色觀察(1)常見(jiàn)還原性糖與非還原性糖有哪些?葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。(2)還原性糖植物組織取材條件?含糖量較高、顏色為白色或近于白色,如:蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜等。(3)研磨中為何要加石英砂?不加石英砂對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會(huì)使組織樣液中還原性糖減少,使鑒定時(shí)溶液顏色變化不明顯。(4)斐林試劑甲、乙兩液的使用方法?混合的目的?為何要現(xiàn)混現(xiàn)用?混合后使用;產(chǎn)生氫氧化銅;氫氧化銅不穩(wěn)定。(5)還原性糖中加入斐林試劑后,溶液顏色變化的順序?yàn)??淺藍(lán)色棕色磚紅色實(shí)驗(yàn)三用顯微鏡觀察多種多樣的細(xì)胞(必修一P7)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?)使用高倍顯微鏡觀察幾種細(xì)胞,比較不同細(xì)胞的異同點(diǎn)2)運(yùn)用制作臨時(shí)裝片的方法二.實(shí)驗(yàn)原理:利用高倍鏡可以看到某些在低倍鏡下無(wú)法看到的細(xì)胞結(jié)構(gòu),例如:可以看到葉綠體、線粒體等細(xì)胞器,從而能夠區(qū)別不同的細(xì)胞。三.方法步驟:第一步:轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡使視野明亮第二步:在低倍鏡下觀察清楚后,把要放大觀察的物像移至視野中央第三步:用轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)過(guò)高倍物鏡問(wèn)(1)是低倍鏡還是高倍鏡的視野大,視野明亮?為什么?提示:低倍鏡的視野大,通過(guò)的光多,放大的倍數(shù)?。桓弑剁R視野小,通過(guò)的光少,但放大的倍數(shù)高。問(wèn)(2)為什么要先用低倍鏡觀察清楚后,把要放大觀察的物像移至視野的中央,再換高倍鏡觀察?提示:如果直接用高倍鏡觀察,往往由于觀察的對(duì)象不在視野范圍內(nèi)而找不到。因此,需要先用低倍鏡觀察清楚,并把要放大觀察的物像移至視野的中央,再換高倍鏡觀察。問(wèn)(3)用轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)過(guò)高倍鏡后,轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋行不行?提示:不行。用高倍鏡觀察,只需微調(diào)即可。轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,容易壓壞玻片。第四步:觀察并用細(xì)胞準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦。

四:討論:1.使用高倍鏡觀察的步驟和要點(diǎn)是什么?答:(1)首先用低倍鏡觀察,找到要觀察的物像,移到視野的中央。(2)轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,用高倍鏡觀察,并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,直到看清楚材料為止。2.試歸納所觀察到的細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上的共同點(diǎn),并描述它們之間的差異,分析產(chǎn)生差異的可能的原因:答:這些細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上的共同點(diǎn)是:有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,植物細(xì)胞還有細(xì)胞壁。各種細(xì)胞之間的差異和產(chǎn)生差異的可能原因是:這些細(xì)胞的位置和功能不同,其結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng),這是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞分化產(chǎn)生的差異。3.P8圖是一個(gè)大腸桿菌的電鏡照片和結(jié)構(gòu)模式圖,大腸桿菌與你在本實(shí)驗(yàn)中觀察到的細(xì)胞有什么主要區(qū)別?答:從模式圖中可以看出,大腸桿菌沒(méi)有明顯的細(xì)胞核,沒(méi)有核膜,細(xì)胞外有鞭毛,等等。實(shí)驗(yàn)四用高倍鏡觀察線粒體和葉綠體(必修一P47)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模菏褂酶弑剁R觀察葉綠體和線粒體的形態(tài)分布。二.實(shí)驗(yàn)原理:葉綠體的辨認(rèn)依據(jù):葉綠體是綠色的,呈扁平的橢圓球形或球形。線粒體辨認(rèn)依據(jù):線粒體的形態(tài)多樣,有短棒狀、圓球狀、線形、啞鈴形等。健那綠染液是專一性染線粒體的活細(xì)胞染料,可以使活細(xì)胞中線粒體呈現(xiàn)藍(lán)綠色。三.實(shí)驗(yàn)材料:觀察葉綠體時(shí)選用:蘚類的葉、黑藻的葉。取這些材料的原因是:葉子薄而小,葉綠體清楚,可取整個(gè)小葉直接制片,所以作為實(shí)驗(yàn)的首選材料。若用菠菜葉作實(shí)驗(yàn)材料,要取菠菜葉的下表皮并稍帶些葉肉。因?yàn)楸砥ぜ?xì)胞不含葉綠體。(1)為什么可直接取用蘚類的小葉,而不能直接取用菠菜葉?因?yàn)樘\類的小葉很薄,只有一層細(xì)胞組成,而菠菜葉由很多層細(xì)胞構(gòu)成。(2)取用菠菜葉的下表皮時(shí),為何要稍帶些葉肉?表皮細(xì)胞除保衛(wèi)細(xì)胞外,一般不含葉綠體,而葉肉細(xì)胞含較多的葉綠體。(3)怎樣加快黑藻細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)速度?最適溫度是多少?進(jìn)行光照、提高水溫、切傷部分葉片;25℃左右。(4)對(duì)黑藻什么部位的細(xì)胞觀察,所觀察到的細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的現(xiàn)象最明顯?葉脈附近的細(xì)胞。(5)若視野中某細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)方向?yàn)轫槙r(shí)針,則在裝片中該細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)的實(shí)際流動(dòng)方向是怎樣的?仍為順時(shí)針。(6)是否一般細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)不流動(dòng),只有黑藻等少數(shù)植物的細(xì)胞質(zhì)才流動(dòng)?否,活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)都是流動(dòng)的。(7)若觀察植物根毛細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng),則對(duì)顯微鏡的視野亮度應(yīng)如何調(diào)節(jié)?視野應(yīng)適當(dāng)調(diào)暗一些,可用反光鏡的平面鏡來(lái)采光或縮小光圈。(8)在強(qiáng)光照射下,葉綠體的向光面有何變化?葉綠體的受光面積較小有一面面向光源。四.討論:1.漏斗管內(nèi)的液面為什么會(huì)升高?答:由于單位時(shí)間內(nèi)透過(guò)玻璃紙進(jìn)入長(zhǎng)頸漏斗的水分子數(shù)量多于從長(zhǎng)頸漏斗滲出的水分子數(shù)量,使得管內(nèi)液面升高。2.如果用一層紗布代替玻璃紙,漏斗管內(nèi)的液面還會(huì)升高嗎?答:用紗布替代玻璃紙時(shí),因紗布的孔隙很大,蔗糖分子也可以自由通透,因而液面不會(huì)升高。3.如果燒杯中不是清水,而是同樣濃度的蔗糖溶液,結(jié)果會(huì)怎樣?答:半透膜兩側(cè)溶液的濃度相等時(shí),單位時(shí)間內(nèi)透過(guò)玻璃紙進(jìn)入長(zhǎng)頸漏斗的水分子數(shù)量等于滲出的水分子數(shù)量,液面也不會(huì)升高。實(shí)驗(yàn)六觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原(必修一P61“探究”)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)會(huì)觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離與復(fù)原的方法。2.了解植物細(xì)胞發(fā)生滲透作用的原理。二.實(shí)驗(yàn)原理:1.質(zhì)壁分離的原理:當(dāng)細(xì)胞液的濃度小于外界溶液的濃度時(shí),細(xì)胞就會(huì)通過(guò)滲透作用而失水,細(xì)胞液中的水分就透過(guò)原生質(zhì)層進(jìn)入到溶液中,使細(xì)胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定程度的收縮。由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁的收縮性大,當(dāng)細(xì)胞不斷失水時(shí),原生質(zhì)層就會(huì)與細(xì)胞壁分離。2.質(zhì)壁分離復(fù)原的原理:當(dāng)細(xì)胞液的濃度大于外界溶液的濃度時(shí),細(xì)胞就會(huì)通過(guò)滲透作用而吸水,外界溶液中的水分就通過(guò)原生質(zhì)層進(jìn)入到細(xì)胞液中,整個(gè)原生質(zhì)層就會(huì)慢慢地恢復(fù)成原來(lái)的狀態(tài),緊貼細(xì)胞壁,使植物細(xì)胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。二、實(shí)驗(yàn)材料:紫色洋蔥鱗片葉的外表皮。因?yàn)橐号莩首仙?,易于觀察。也可用水綿代替。0.3g/ml的蔗糖溶液。用蔗糖溶液做質(zhì)壁分離劑對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害作用。三、實(shí)驗(yàn)步驟:步驟注意問(wèn)題分析1.制作洋蔥表皮的臨時(shí)裝片。在載玻片上滴一滴水,撕取洋蔥鱗片葉外表皮放在水滴中展平(也可挑取幾條水綿放入水滴中)。蓋上蓋玻片。蓋蓋玻片應(yīng)讓蓋玻片的一側(cè)先觸及載玻片,然后輕輕放平。防止裝片產(chǎn)生氣泡。2.觀察洋蔥(或水綿)細(xì)胞可看到:液泡大,呈紫色,原生質(zhì)層緊貼著細(xì)胞壁。(或水綿細(xì)胞中有帶狀葉綠體,原生質(zhì)層呈綠色,緊貼著細(xì)胞壁。液泡含花青素,所以液泡呈紫色。先觀察正常細(xì)胞與后面的“質(zhì)壁分離”起對(duì)照作用。3.觀察質(zhì)壁分離現(xiàn)象。從蓋玻片的一側(cè)滴入0.3g/ml的蔗糖溶液,在另一側(cè)用吸水紙吸引,重復(fù)幾次。鏡檢。觀察到:液泡由大變小,顏色由淺變深,原生質(zhì)層與細(xì)胞壁分離。原生質(zhì)層與細(xì)胞壁之間充滿蔗糖溶液。重復(fù)幾次糖液濃度不能過(guò)高蔗糖溶液濃度大于細(xì)胞液濃度,細(xì)胞通過(guò)滲透作用失水,細(xì)胞壁伸縮性小原生質(zhì)層的伸縮性大,液泡和原生質(zhì)層不斷收縮,所以發(fā)生質(zhì)壁分離。為了使細(xì)胞完全浸入蔗糖溶液中。否則,細(xì)胞嚴(yán)重失水死亡,看不到質(zhì)壁分離的復(fù)原。4.觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離的復(fù)原現(xiàn)象。從蓋玻片的一側(cè)滴入清水,在另一側(cè)用吸水紙吸引,重復(fù)幾次。鏡檢。觀察到:液泡由小變大,顏色由深變淺,原生質(zhì)層恢復(fù)原狀。發(fā)生質(zhì)壁分離的裝片,不能久置,要馬上滴加清水,使其復(fù)原。重復(fù)幾次。細(xì)胞液的濃度高于外界溶液,細(xì)胞通過(guò)滲透作用吸水,所以發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原現(xiàn)象。因?yàn)榧?xì)胞失水過(guò)久,也會(huì)死亡。為了使細(xì)胞完全浸入清水中。實(shí)驗(yàn)討論答案:1.如果將上述表皮細(xì)胞浸潤(rùn)在與細(xì)胞液濃度相同的蔗糖溶液中,這些表皮細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象?答:表皮細(xì)胞維持原狀,因?yàn)榧?xì)胞液的濃度與外界溶液濃度相等。2.當(dāng)紅細(xì)胞細(xì)胞膜兩側(cè)的溶液具有濃度差時(shí),紅細(xì)胞會(huì)不會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離?為什么?答:不會(huì)。因?yàn)榧t細(xì)胞不具細(xì)胞壁。(1)洋蔥為何要選紫色的?若紫色過(guò)淡怎么辦?紫色的洋蔥有紫色的大液泡,便于觀察液泡的大小變化;讓陽(yáng)光照射。(2)洋蔥表皮應(yīng)撕還是削?為何?表皮應(yīng)撕不能削,因?yàn)橄鞯谋砥ね瘛#?)植物細(xì)胞為何會(huì)出現(xiàn)質(zhì)壁分離?動(dòng)物細(xì)胞會(huì)嗎?當(dāng)細(xì)胞失去水分時(shí),其原生質(zhì)層的伸縮性大于細(xì)胞壁的伸縮性;動(dòng)物細(xì)胞不會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離,因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁。(4)質(zhì)壁分離時(shí),液泡大小和顏色的變化?復(fù)原時(shí)呢?細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離時(shí),液泡變小,紫色加深;當(dāng)細(xì)胞質(zhì)壁分離復(fù)原時(shí),液泡變大,紫色變淺。(5)若發(fā)生質(zhì)壁分離后的細(xì)胞,不能發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原,其原因是什么?細(xì)胞已經(jīng)死亡(可能是外界溶液濃度過(guò)大,細(xì)胞失水過(guò)多或質(zhì)壁分離時(shí)間過(guò)長(zhǎng))(6)怎樣利用質(zhì)壁分離現(xiàn)象來(lái)測(cè)定植物細(xì)胞液的濃度?①配制一系列濃度從小到大的蔗糖溶液②分別用以上不同濃度的溶液制成某植物細(xì)胞的臨時(shí)裝片③用顯微鏡觀察某植物細(xì)胞是否發(fā)生質(zhì)壁分離。某植物細(xì)胞液的濃度就介于不能引起質(zhì)壁分離的濃度和能引起質(zhì)壁分離的濃度之間。實(shí)驗(yàn)七探究影響酶活性的因素(必修一P78、P83)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.探究不同溫度和PH對(duì)過(guò)氧化氫酶活性的影響。2.培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力。二.方法步驟:提出問(wèn)題→作出假設(shè)→設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)→(包括選擇實(shí)驗(yàn)材料、選擇實(shí)驗(yàn)器具、確定實(shí)驗(yàn)步驟、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)記錄表格)→實(shí)施實(shí)驗(yàn)→分析與結(jié)論→表達(dá)與交流。實(shí)例1:比較過(guò)氧化氫酶和Fe3+的催化效率一).實(shí)驗(yàn)原理:鮮肝提取液中含有過(guò)氧化氫酶,過(guò)氧化氫酶和Fe3+都能催化H2O2分解放出O2。經(jīng)計(jì)算,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.5%的FeCl3溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的肝臟研磨液相比,每滴FeCl3溶液中的Fe3+數(shù),大約是每滴肝臟研磨液中過(guò)氧化氫酶分子數(shù)的25萬(wàn)倍。二)方法步驟:步驟注意問(wèn)題解釋取4支潔凈試管,編號(hào),分別加入2mLH2O2溶液不讓H2O2接觸皮膚H2O2有一定的腐蝕性將2號(hào)試管放在900C左右的水浴中加熱,觀察氣泡冒出情況,與1號(hào)對(duì)照向3號(hào)、4號(hào)試管內(nèi)分別滴入2滴FeCl3溶液和2滴肝臟研磨液,觀察氣泡產(chǎn)生情況不可用同一支滴管肝臟研磨液必須是新鮮的肝臟在制成研磨液由于酶具有高效性,若滴入的FeCl3溶液中混有少量的過(guò)氧化氫酶,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性因?yàn)檫^(guò)氧化氫酶是蛋白質(zhì),放置過(guò)久,可受細(xì)菌作用而分解,使肝臟組織中酶分子數(shù)減少,活性降低研磨可破壞肝細(xì)胞結(jié)構(gòu),使細(xì)胞內(nèi)的酶釋放出來(lái),增加酶與底物的接觸面積2-3min后,將點(diǎn)燃的衛(wèi)生香分別放入3號(hào)和4號(hào)試管內(nèi)液面的上方,觀察復(fù)燃情況放衛(wèi)生香時(shí),動(dòng)作要快,不要插到氣泡中現(xiàn)象:3號(hào)試管產(chǎn)生氣泡多,冒泡時(shí)間短,衛(wèi)生香猛烈復(fù)燃,4號(hào)試管產(chǎn)生氣泡少,冒泡時(shí)間長(zhǎng),衛(wèi)生香幾乎無(wú)變化避免衛(wèi)生香因潮濕而熄滅實(shí)例2:溫度對(duì)酶活性的影響一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.初步學(xué)會(huì)探索溫度對(duì)酶活性的影響的方法。2.探索淀粉酶在不同溫度下催化淀粉水解的情況。二)實(shí)驗(yàn)原理:1.淀粉遇碘后,形成紫藍(lán)色的復(fù)合物。2.淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麥芽糖和葡萄糖(淀粉水解過(guò)程中,不同階段的中間產(chǎn)物遇碘后,會(huì)呈現(xiàn)紅褐色或紅棕色。)麥芽糖和葡萄糖遇碘后不顯色。注:市售a-淀粉酶的最適溫度約600C三)方法步驟:操作注意問(wèn)題解釋取3支試管,編上號(hào),然后分別注入2mL可溶性淀粉溶液另取3支試管,編上號(hào),然后分別注入1mL新鮮淀粉酶溶液將裝有淀粉溶液和酶溶液的試管分成3組,分別放入熱水(約600C)、沸水和冰塊中,維持各自的溫度5min不能只用不同溫度處理淀粉溶液或酶溶液防止混合時(shí),由于兩種溶液的溫度不同而使混合后溫度發(fā)生變化,反應(yīng)溫度不是操作者所要控制的溫度,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。分別將淀粉酶溶液注入相同溫度下的淀粉溶液中,搖勻后,維持各自的溫度5min保持各自溫度時(shí)間不能太短淀粉酶催化淀粉水解需要一定時(shí)間在3支試管中各滴入1-2滴碘液,搖勻后觀察這3支試管中溶液顏色變化并記錄碘液不能滴加太多防止影響實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察用表格的形式顯示實(shí)驗(yàn)步驟序號(hào)加入試劑或處理方法試管ABCabc1可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL///新鮮淀粉酶溶液///1mL1mL1mL2保溫5min600C1000C00C600C1000C00C3將a液加入到A試管,b液加入到B試管,c液加入到C試管中,搖勻4保溫5min600C1000C00C5滴入碘液,搖勻2滴2滴2滴6觀察現(xiàn)象并記錄實(shí)例3:PH值對(duì)酶活性的影響操作步驟:用表格開(kāi)式顯示實(shí)驗(yàn)步驟:(注意操作順序不能錯(cuò))序號(hào)加入試劑或處理方法試管1231注入新鮮的淀粉酶溶液1mL1mL1mL2注入蒸餾水1mL//3注入氫氧化鈉溶液/1mL/4注入鹽酸//1mL5注入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL6600C水浴保溫5min7加入斐林試劑,邊加邊振蕩2mL2mL2mL8水浴加熱煮沸1min9觀察3支試管中溶液顏色變化變記錄(1)為何要選新鮮的肝臟?因?yàn)樵诓恍迈r的肝臟中,過(guò)氧化氫酶的活性會(huì)由于細(xì)菌的破壞而降低。(2)該實(shí)驗(yàn)中所用試管應(yīng)選較粗的還是較細(xì)的?為什么?應(yīng)選用較粗的,因?yàn)樵谳^細(xì)的試管中容易形成大量的氣泡,而影響衛(wèi)生香的復(fù)燃。(3)為何要選動(dòng)物的肝臟組織來(lái)做實(shí)驗(yàn),其他動(dòng)植物的組織的研磨液能替代嗎?因?yàn)楦闻K組織中過(guò)氧化氫酶含量較豐富;其它動(dòng)植物組織也含有少量的過(guò)氧化氫酶,所以能夠替代。(4)相同質(zhì)量的塊狀肝臟和肝臟研磨液,哪一個(gè)催化效果好?為什么?研磨液效果好;因?yàn)樗黾舆^(guò)氧化氫酶與過(guò)氧化氫的接觸面積。(5)滴入肝臟研磨液和氯化鐵溶液時(shí),可否共用下個(gè)吸管?為什么?不可共用,防止過(guò)氧化氫酶與氯化鐵混合,而影響實(shí)驗(yàn)效果。實(shí)驗(yàn)八葉綠體色素的提取和分離(必修一P97)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模憾畬?shí)驗(yàn)原理:三、實(shí)驗(yàn)材料:幼嫩、鮮綠的菠菜葉四、實(shí)驗(yàn)步驟:步驟注意問(wèn)題分析1.提取色素5克綠葉剪碎,放入研缽,加SiO2、CaCO3和5mL丙酮(或10mL無(wú)水乙醇)迅速、充分研磨。(若沒(méi)有無(wú)水乙醇,也可用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇,但要加入適量的無(wú)水碳酸鈉,除去水分)加SiO2加CaCO3加丙酮迅速加SiO2為了研磨得更充分。加CaCO3防止研磨時(shí)葉綠素受到破壞。葉綠體色素易溶于丙酮等有機(jī)溶劑。減少研磨過(guò)程葉綠素的分解,減少有毒性的丙酮揮發(fā)。2.收集濾液漏斗基部放一單層尼龍布,研磨倒入漏斗內(nèi)擠壓,將濾液收集到小試管中,用棉花塞塞住試管口。尼龍布起過(guò)濾作用。試管口用棉花塞塞緊是為了防止丙酮揮發(fā)。3.制備濾紙條將干燥的濾紙,順著紙紋剪成長(zhǎng)10cm,寬1cm的紙條,一端剪去二個(gè)角,并在距這一端1cm處劃一鉛筆線。干燥順著紙紋剪成長(zhǎng)條一端剪去二個(gè)角可吸收更多的濾液。層析時(shí),色素分離效果好。可使層析液同時(shí)到達(dá)濾液細(xì)線。4.劃濾液細(xì)線用毛細(xì)吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線劃出細(xì)、齊、直的一條濾液細(xì)線,干后重復(fù)三次。濾液細(xì)線越細(xì)、越齊越好。重復(fù)三次。防止色素帶之間部分重疊。增加色素在濾紙上的附著量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更明顯。胡蘿卜素(橙黃色)葉黃素(黃色)葉綠素a(藍(lán)綠色)葉綠素b(黃綠色)6.觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.紙層析法分離色素將3mL層析液倒入燒杯中,將濾紙條(劃線一端朝下)插入層析液中,用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯。層析液不能沒(méi)及濾紙條。燒杯要蓋培養(yǎng)皿蓋。防止色素溶解在層析液中,層析液中的苯、丙酮、石油醚易揮發(fā)。6.觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果擴(kuò)散最快是胡蘿卜素,擴(kuò)散最慢是葉綠素b,含量最多的是葉綠素a。四種色素之所以能被分離,是因?yàn)樗姆N色素隨層析液在濾紙上的擴(kuò)散速度不同。五:實(shí)驗(yàn)討論:

1.濾紙條上的濾液細(xì)線,為什么不能觸及層析液?答:濾紙條上的濾液細(xì)線如觸及層析液,濾紙上的葉綠體色素就會(huì)溶解在層析液中,實(shí)驗(yàn)就會(huì)失敗。2.提取和分離葉綠體色素的關(guān)鍵是什么?答:提取葉綠體色素的關(guān)鍵是:①葉片要新鮮、濃綠;②研磨要迅速、充分;③濾液收集后,要及時(shí)用棉塞將試管口塞緊,以免濾液揮發(fā)。分離葉綠體色素的關(guān)鍵是:一是濾液細(xì)線要細(xì)且直,而且要重復(fù)劃幾次;二是層析液不能沒(méi)及濾液線。(1)對(duì)葉片的要求?為何要去掉葉柄和粗的時(shí)脈?綠色、最好是深綠色。因?yàn)槿~柄和葉脈中所含色素很少。(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?為了使研磨充分。不加二氧化硅,會(huì)使濾液和色素帶的顏色變淺。(3)丙酮的作用?它可用什么來(lái)替代?用水能替代嗎?溶解色素。它可用酒精等有機(jī)溶劑來(lái)代替,但不能用水來(lái)代替,因?yàn)樯夭蝗苡谒?。?)碳酸鈣的作用?不加碳酸鈣對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?保護(hù)色素,防止在研磨時(shí)葉綠體中的色素受到破壞。不加碳酸鈣,濾液會(huì)變成黃綠色或褐色。(5)研磨為何要迅速?要充分?過(guò)濾時(shí)為何用布不用濾紙?研磨迅速,是為了防止丙酮大量揮發(fā);只有充分研磨,才能使大量色素溶解到丙酮中來(lái)。色素不能通過(guò)濾紙,但能通過(guò)尼龍布。(6)濾紙條為何要剪去兩角?防止兩側(cè)層析液擴(kuò)散過(guò)快。(7)為何不能用鋼筆或圓珠筆畫線?因?yàn)殇摴P水或圓珠筆油中含有其它色素,會(huì)影響色素的分離結(jié)果。(8)濾液細(xì)線為何要直?為何要重畫幾次?防止色素帶的重疊;增加色素量,使色素帶的顏色更深一些。(9)濾液細(xì)線為何不能觸到層析液?防止色素溶解到層析液中。(10)濾紙條上色素為何會(huì)分離?由于不同的色素在層析液中的溶解度不同,因而它們隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散速度就不同。(11)色素帶最寬的是什么色素?它在層析液中的溶解度比什么色素大一些?最寬的色素帶是葉綠素a,它的溶解度比葉綠素b大一些。(12)濾紙條上相互間距最大的是哪兩種色素?胡蘿卜素和葉黃素。(13)色素帶最窄的是第幾條色素帶?為何?第一條色素帶,因?yàn)楹}卜素在葉綠體的四種色素中含量最少。實(shí)驗(yàn)九探究酵母菌的呼吸方式(必修一P91)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模憾畬?shí)驗(yàn)原理:三.方法步驟:提出問(wèn)題→作出假設(shè)→設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)→(包括選擇實(shí)驗(yàn)材料、選擇實(shí)驗(yàn)器具、確定實(shí)驗(yàn)步驟、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)記錄表格)→實(shí)施實(shí)驗(yàn)→分析與結(jié)論→表達(dá)與交流。1.酵母菌培養(yǎng)液的配制取20g新鮮的食用酵母菌,分成兩等份,分別放入錐形瓶A(500mL)和錐形瓶B(500mL)中,再分別向瓶中注入240mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的葡萄糖溶液2.檢測(cè)CO2的產(chǎn)生用錐形瓶和其他材料用具組裝好實(shí)驗(yàn)裝置(如圖),并連通橡皮球(或氣泵),讓空氣間斷而持續(xù)地依次通過(guò)3個(gè)錐形瓶(約50min)。然后將實(shí)驗(yàn)裝置放到25-350C的環(huán)境中培養(yǎng)8-10h。3.檢測(cè)灑精的產(chǎn)生各取2mL酵母菌培養(yǎng)液的濾液,分別注入2支干凈的試管中。向試管中分別滴加0.5mL溶有0.1g重鉻酸鉀的濃硫酸溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%-97%)并輕輕振蕩,使它們混合均勻,觀察試管中溶液的顏色變化。實(shí)驗(yàn)十觀察細(xì)胞的有絲分裂(必修一P115)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模憾畬?shí)驗(yàn)原理:三.實(shí)驗(yàn)材料:

洋蔥(可用蔥、蒜代替)。因?yàn)楦馍L(zhǎng)點(diǎn)屬于分生組織,細(xì)胞分裂能力強(qiáng),易觀察到有絲分裂各個(gè)時(shí)期的細(xì)胞。四.實(shí)驗(yàn)步驟:步驟注意問(wèn)題分析一、根尖的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)前3~4天,讓洋蔥放在廣口瓶上,底部接觸清水。根長(zhǎng)約5cm時(shí)可用。置于溫暖處,常換水。因?yàn)榧?xì)胞分裂和生長(zhǎng)需要水分、適宜的溫度和氧氣。二、裝片的制作(解離→漂洗→染色→制片)1.解離:上午10時(shí)至下午2時(shí),剪取洋蔥根尖2~3mm,立即放入盛有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液的混合液(1:1)的玻璃皿中,室溫下解離3~5min。解離時(shí)間要保證,細(xì)胞才能分散開(kāi)來(lái)。解離時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)。目的:溶解細(xì)胞間質(zhì),使組織中的細(xì)胞相互分離開(kāi)來(lái)。此時(shí),細(xì)胞已被鹽酸殺死。否則,根尖過(guò)于酥軟,無(wú)法取出。2.漂洗:待根尖酥軟后,用鑷子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約10min。漂洗要充分,可換水1~2次。目的:洗去解離液,便于染色。3.染色:把洋蔥根尖放進(jìn)盛有質(zhì)量濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液的玻璃皿中染色3~5min。染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則顯微鏡下一片紫色,無(wú)法觀察。龍膽紫等為堿性染料,可使染色體著色。醋酸洋紅溶液也能使染色體著色4.制片:用鑷子將這段洋蔥根尖取出來(lái),放在載玻片上,加一滴清水,并用鑷子尖把洋蔥根尖弄碎,蓋上蓋玻片,在蓋玻片上再加一片載玻片。然后,用拇指輕輕地壓載玻片,使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)。要弄碎根尖,再垂直向下均勻用力壓片,不可移動(dòng)蓋玻片,目的:使細(xì)胞分散,避免細(xì)胞重疊,便于觀察。做得成功的裝片,標(biāo)本被壓成云霧狀。三、觀察1.低倍鏡觀察:把裝片放在低倍鏡下,慢慢移動(dòng)裝片,找到分生區(qū)細(xì)胞。2.高倍鏡觀察:移走低倍鏡,換上高倍鏡,用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋和反光鏡把視野調(diào)整清晰,仔細(xì)觀察,找出處于細(xì)胞分裂期中期的細(xì)胞,再找出前期、后期、末期的細(xì)胞。一定要找到分生區(qū)。在一個(gè)視野里,往往不容易找全有絲分裂過(guò)程中各個(gè)時(shí)期的細(xì)胞。如果是這樣,可以慢慢地移動(dòng)裝片,從鄰近的分生區(qū)細(xì)胞中尋找。分生區(qū)細(xì)胞特點(diǎn)是:細(xì)胞呈正方形,排列緊密,有的細(xì)胞正處于分裂期。討論:制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關(guān)鍵是什么?答:制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關(guān)鍵有以下幾點(diǎn):(1)剪取洋蔥根尖材料時(shí),應(yīng)該在洋蔥根尖細(xì)胞一天之中分裂最活躍的時(shí)間;(2)解離時(shí),要將根尖細(xì)胞殺死,細(xì)胞間質(zhì)被溶解,使細(xì)胞容易分離;(3)壓片時(shí),用力的大小要適當(dāng),要使根尖被壓平,細(xì)胞分散開(kāi)。(1)培養(yǎng)根尖時(shí),為何要經(jīng)常換水?增加水中的氧氣,防止根進(jìn)行無(wú)氧呼吸造成根的腐爛。(2)培養(yǎng)根尖時(shí),應(yīng)選用老洋蔥還是新洋蔥?為什么?應(yīng)選用舊洋蔥,因?yàn)樾卵笫[尚在休眠,不易生根。(3)為何每條根只能用根尖?取根尖的最佳時(shí)間是何時(shí)?為何?因?yàn)楦夥稚鷧^(qū)的細(xì)胞能進(jìn)行有絲分裂

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