生物技術(shù)實踐專題一微生物課件

生物技術(shù)實踐實驗要求5-1

微生物的利用

（1）微生物的分離和培養(yǎng)（2）培養(yǎng)基對微生物的選擇利用（3）利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物掌握程度參考本考試大綱中的：一、考試的能力要求2、實驗與探究能力5-2

生物技術(shù)在食品加工及其他方面的應用

（1）從生物材料中提取某些特定的成分（2）運用發(fā)酵加工食品的基本方法（3）植物的組織培養(yǎng)掌握程度參考本考試大綱中的：一、考試的能力要求2、實驗與探究能力選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:分離導入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基:分離雜交瘤細胞各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？

不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。

注：另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。

(1)無菌技術(shù)具體操作①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。④實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。二無菌技術(shù)：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(2)常用消毒的方法：條件結(jié)果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學藥物消毒法滅菌強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。三、實驗操作純化大腸桿菌以及菌種的保藏倒平板:1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。注意:3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。劃線后培養(yǎng)一段時間后微生物的恒溫培養(yǎng)

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(3)菌種的保存1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。2、長期保存：甘油冷凍管藏法一、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1．選擇合適的培養(yǎng)基(1)根據(jù)培養(yǎng)基的用途可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基(2)分離分解尿素的細菌的培養(yǎng)基即為選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的氮源只有尿素，理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長。2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。②方法：用計數(shù)板計數(shù)。③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長著一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。統(tǒng)計菌落數(shù)目

常用稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)30—300的平板計數(shù)。②操作a．設(shè)置重復組，增強實驗的說服力與準確性。b．為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝C/V×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。3．細菌分離與計數(shù)的實驗流程土壤取樣→樣品稀釋→取樣涂布→微生物培養(yǎng)→觀察并記錄結(jié)果→細菌計數(shù)。二、分解纖維素的微生物的分離1．纖維素酶是一種復合酶，它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。2．纖維素分解菌的篩選原理(1)剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。(2)纖維素分解菌能增生纖維素酶分解纖維素，從而使菌落周圍形成透明圈。3．土壤中纖維素分解菌的篩選(1)方案土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。(2)選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(3)涉及的微生物技術(shù)主要有：培養(yǎng)基的制作、無菌操作、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等。【例1】從自然菌樣篩選較理想的生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定。(1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應從_____________環(huán)境采集。(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其在群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應選擇__________________的培養(yǎng)基，并在________條件下培養(yǎng)。海灘等高鹽以淀粉為唯一碳源高溫(3)下面兩圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請分析接種的具體方法。獲得圖A效果的接種方法是________________，獲得圖B效果的接種方法是________________。(4)配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行____________，接種前要進行________________，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在________條件下進行。稀釋涂布平板法平板劃線法pH調(diào)整高壓蒸汽滅菌無菌2．(2009·寧夏理綜，40)(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、________、__________等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行________(消毒、滅菌)；操作者的雙手需進行清洗和____；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_________________。(3)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，除應嚴格操作、多次重復外，還應保證待測樣品稀釋的____________。溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)比例合適(4)通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的___________________。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應