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文檔簡介
實驗五實驗六酵母菌的形態(tài)觀察及死活細胞鑒定微生物顯微鏡直接計數(shù)法
一、目的要求1.學習自制水浸片法觀察酵母菌的方法2.觀察酵母菌形態(tài)和出芽生殖方式3.學習并掌握區(qū)分酵母菌死活細胞的染色方法4.了解血球計數(shù)板的構造、計數(shù)原理和計數(shù)方法,掌握顯微鏡下直接計數(shù)的技能
二、實驗原理1.酵母菌可以用單純的水制成水浸片觀察,也可以用染色液制成水浸片觀察。2.美蘭是一種無毒性染液,有兩種形態(tài)還原型:無色氧化性:藍色活細胞因新陳代謝而有強還原力使美蘭從氧化型變?yōu)檫€原型;死細胞無此能力,而被美蘭染成藍色。以此可以區(qū)分死活細胞。3.測定微生物細胞數(shù)量的方法很多,通常采用的有顯微直接計數(shù)法和平板計數(shù)法。
血球計數(shù)板計數(shù)區(qū)的刻度有兩種:一種是25×16:計數(shù)區(qū)分為16個大方格(大方格用三線隔開),而每個大方格又分成25個小方格;另一種是16×25:一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格(大方格之間用雙線分開),而每個大方格又分成16個小方格。每毫升菌液中的菌數(shù)
=——×25(16)×10×1000×BA:5個中方格中的酵母菌數(shù)B:稀釋倍數(shù)A5三、實驗材料1.菌種:啤酒酵母2.染色液:0.1%呂氏堿性美藍3.器材:載玻片,顯微鏡、血球計數(shù)板、蓋玻片、吸水紙、計數(shù)器、滴管、擦鏡紙。
1、在載玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培養(yǎng)液,蓋上蓋玻片,(勿使產(chǎn)生氣泡,且不要再移動蓋玻片)2、將制好的水浸片放置2分鐘后鏡檢。先用低倍鏡觀察,然后換用高倍鏡觀察釀酒酵母的形態(tài)和出芽情況,同時可以根據(jù)是否染上顏色來區(qū)別死、活細胞。3、染色半小時后,再觀察一下死細胞數(shù)是否增加。4、染色一小時后,再觀察一下死細胞數(shù)是否增加。(二)、顯微鏡直接計數(shù)法1.鏡檢計數(shù)室,熟悉計數(shù)器的使用方法2.對稀釋5倍的啤酒酵母懸液進行計數(shù)3.注意:(1)血球計數(shù)板必須洗干凈,勿刷(2)注意勿損壞計數(shù)器
五、實驗結果1.酵母個體形態(tài),芽體(繪圖)2.計算死活細胞的比率,說明呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間對死活細胞數(shù)的影響3.計數(shù)結果酵母個體形態(tài)六、思考題1.在顯微鏡下,酵母菌有哪些突
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