從雞蛋清中提取溶菌酶課件

從雞蛋清中提取溶菌酶制作者：目錄1、溶菌酶的含義2、溶菌酶的理化性質(zhì)3、溶菌酶的提取及分離4、溶菌酶的用途什么是溶菌酶？

溶菌酶又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。溶菌酶的化學(xué)性質(zhì)：溶菌酶的結(jié)構(gòu)一:【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.熟練掌握離子層析分離純化溶菌酶的原理以及離子交換層析的操作方法2.理解SDS-聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）測定蛋白質(zhì)純度與分子量的原理二:【實(shí)驗(yàn)原理】

溶菌酶是一種有效的抗菌劑，全稱為1,4-β-N-溶菌酶，又稱作粘肽N-乙?；邗Ｋ饷富虬谫|(zhì)酶。是一種糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖與N-乙酰胞壁酸間的β-1，4糖苷鍵，由129氨基酸殘基構(gòu)成，由于其中含有較多堿性氨基酸殘基，所以其等電點(diǎn)高達(dá)10.8左右，最適溫度為50℃，最適PH為6～7左右。 溶菌酶廣泛存在于動植物及微生物體內(nèi)，雞蛋(含量約為2%～4%)和哺乳動物的乳汁是溶菌酶的主要來源，目前，溶菌酶仍屬于緊銷的生化物質(zhì)， 雞蛋的蛋清中含有豐富的上述物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)以雞蛋蛋清為原料，對溶菌酶進(jìn)行提取并分離純化。 溶菌酶常溫下在中性鹽溶液中具有較高天然活性，在中性條件下溶菌酶帶正電荷，因此在分離制備時(shí)，先采用等電點(diǎn)法粗分離，再用DE-52纖維素離子交換色譜和葡聚糖G50凝膠層析分離純化。

【試劑配制】冰醋酸、5mol/LNaOH、20%磺基水楊酸溶液、考馬斯亮藍(lán)染色液、脫色液：450mL甲醇：水（1：1）、50mL冰醋酸、0.02mol/LPBS(pH8.0)【實(shí)驗(yàn)步驟】1.溶菌酶的粗提?。s兩個半小時(shí)）

拿3個雞蛋破殼取蛋清置于250mL燒杯中，輕輕攪拌5分鐘，使其的稠度均勻，然后用兩層紗布過濾，去除臍帶和蛋殼。記錄其體積V1

加入1.5倍體積的pH8.0PBS緩沖液，攪拌均勻

用冰醋酸調(diào)pH4.7左右，充分?jǐn)嚢?/p>

濾紙過濾，取清液，測量并記錄體積V2

取清液裝在10mL離心管中 -20℃凍存?zhèn)溆?。（樣品S1）2.溶菌酶的分離純化 （1）DE-52初次純化溶菌酶 DE-52纖維素的處理②裝柱

③加樣、洗脫（2）葡聚糖G50再次純化溶菌酶

①凝膠的處理 ②裝柱 ③加樣、洗脫

溶菌酶的用途：

溶菌酶是生物體內(nèi)廣泛存在的一種能分解黏多糖的水解酶。能是革蘭陽性菌細(xì)胞壁溶解，從而發(fā)揮抗菌作用。有抗菌、抗病毒、止血、消腫、加速組織功能恢復(fù)及增強(qiáng)